家蚕核型多角体病毒基因bm64的表达及定位分析

对家蚕核型多角体病毒（Bm NPV）功能未知基因的研究,有利于全面揭示病毒的复制和感染机制。依据NCBI数据库发表的Bm NPV T3株基因组序列（Gen Bank登录号：L33180.1）,选择未知功能基因bm64进行生物信息学分析,该基因ORF全长333 bp,编码110个氨基酸,预测蛋白质分子质量为12.71 k D,等电点4.21。将Bm64蛋白亲水区1～49 aa的编码序列与原核表达载体p GEX-4T-3连接,构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta菌株后进行诱导表达。SDS-PAGE检测在预测分子质量处有明显的蛋白质条带,纯化该蛋白质并以此为抗原免疫新西兰大白兔,制备Bm64蛋白多克隆抗体。在病毒感染Bm N细胞后24 h即可用Western blot方法检测到Bm64蛋白的表达。通过间接免疫荧光检测到Bm64蛋白在Bm NPV感染的Bm N细胞中表达,并定位于细胞核。研究结果为进一步分析家蚕核型多角体病毒bm64基因的功能奠定了实验基础。

柞蚕滞育关联蛋白基因dap2的表达特征及分子特性

滞育关联蛋白(DAP)在昆虫滞育进程中可能发挥重要作用。从NCBI获取柞蚕滞育关联蛋白基因2(Antheraea pernyi diapause-associated protein 2,dap2)的序列,序列分析表明该基因的cDNA全长1 187bp,ORF为874bp,编码278个氨基酸。NCBI数据库氨基酸序列比对,DAP2与烟草天蛾和家蚕的眼色素结合蛋白(omminbinding protein,OBP)同源性分别达到57%和58%。通过荧光定量PCR和Western blotting方法,分别检测柞蚕不同发育时期和五龄幼虫不同组织中dap2的转录表达水平,结果表明dap2在滞育蛹中转录和表达水平最高;在5龄幼虫不同组织中的分析表明其转录水平在脂肪体和血淋巴中最高,在翻译水平上血淋巴中表达最高。分离纯化后,对天然DAP2蛋白分子特性进行初步研究,吸收光谱分析不能表明其携带色素,去糖基化修饰分析表明其为糖蛋白,双向电泳表明其可能存在三种不同程度的翻译后修饰,推测其可能是柞蚕的一种眼色素结合蛋白(ommin-binding protein,OBP)。

肿瘤生物模型及其功能性检测的转化潜能和应用

分子靶向治疗和免疫治疗在不同类型的肿瘤中均显示出疗效,已成为肿瘤治疗的新兴领域和方向。二维和三维细胞培养模型、基因工程小鼠模型、类器官模型、患者来源的异种移植瘤(PDX)模型等临床前模型已成为研究肿瘤机制、抗肿瘤药物的研发及预测临床药物疗效的有效工具。然而,肿瘤异质性和微环境的复杂性等在不同程度上影响基于这些临床前模型的功能性检测的真实性和准确性。综述临床前模型的发展情况及功能性检测在药物测试和联合临床试验中的适用性和局限性;为更好地应用于临床,探讨如何将功能性检测利用转化医学的手段使其朝体外诊断(IVD)方向发展,同时分析了目前功能性检测迈向IVD领域所面临的挑战。