野生与养殖全蝎酶解后主要成分含量及抗肿瘤作用的对比研究

目的观察比较野生与养殖全蝎酶解后主要成分变化及抗肿瘤作用效果。方法分别采用改良Lowrry法测定蛋白质含量;阿利新蓝法测定糖胺聚糖含量;半微量凯氏定氮测定水解度;MTT法测定对A549和Hep-2细胞的抑制率。结果对所得含量用t-检验:双样本等方差假设分析所得实验数据,比较两者间差异,其中蛋白质含量、糖胺聚糖含量差异均无统计学意义;野生全蝎的水解度为16.87%,养殖全蝎为16.46%;两者对A549细胞和Hep-2细胞的抑制作用均成剂量关系,随药物浓度的升高抑制率呈现上升趋势,且养殖全蝎酶解后其抑制效果总体优于野生全蝎酶解后的效果。结论经过两者间几个主要成分含量的比较以及对肿瘤抑制作用的比较,野生与养殖全蝎酶解后主要化学成分含量变化不大,但养殖全蝎酶解后肿瘤细胞的抑制作用优于野生全蝎。

基于生物转化作用球孢白僵菌发酵土鳖虫抗肿瘤的研究

目的研究基于生物转化作用的球孢白僵菌发酵土鳖虫是否能显著增强其抗肿瘤的原有功效,并探究其水提液和醇提液抗肿瘤的差异性。方法利用噻唑蓝(MTT)法测定土鳖虫经球孢白僵菌发酵前后不同浓度的水提液和醇提液对肝癌Bel-7402细胞、肺腺癌A549细胞及乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制效果。结果土鳖虫发酵后水提液抗肿瘤活性与发酵前相比,具有明显的抑制肝癌Bel-7402细胞、乳腺癌MCF-7细胞以及肺腺癌A549细胞的作用,其IC_(50)分别为1.802 5、0.370 4、0.949 1 mg·m L^(-1),而发酵后醇提液则没有良好的效果,其IC50为10.288 5 mg·m L^(-1)。结论土鳖虫发酵炮制后其水提液抗肿瘤活性与发酵前相比,呈现明显增强的趋势,且对肿瘤细胞具有一定的选择性。

土鳖虫的活性成分及药理研究进展

土鳖虫作为一种传统的药食两用的中药材,化学成分复杂,富含多种活性蛋白、氨基酸、脂肪酸、生物碱以及脂溶性和水溶性元素等,具有广泛的药理作用,因此本文总结了近几年的土鳖虫的化学成分和药理研究文献。

发酵蜣螂粉乙醇提取物抗肿瘤活性研究

目的:研究蜣螂发酵产物经乙醇回流提取对乳腺癌MCF-7细胞、肺腺癌A549细胞的抑制效果。方法:采用新型固体发酵方式对蜣螂粉进行深层加工,再经乙醇回流提取旋蒸后,用MTT法测定不同浓度的发酵蜣螂醇提物对乳腺癌MCF-7细胞和肺腺癌A549细胞的抑制率。结果:发酵蜣螂醇提物对MCF-7和A549具有较好的抑制作用,且作用强度与药物浓度成正比。其IC50分别为1.51和0.94 mg/mL。结论:蜣螂发酵产物醇提物具有一定的抗肿瘤效果,为临床用药提供新思路。

蜈蚣酶解工艺优化及抗肿瘤活性研究

目的:优化蜈蚣酶解工艺并探究酶解液产物体外抗肿瘤活性。方法:采用胰蛋白酶进行酶解,以水解度为指标,在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺。结果:蜈蚣的最佳酶解条件为酶解温度49. 6℃,酶解p H为7. 62,酶解时间7小时,加酶量3000U。在最优条件下,平均水解度为17. 77%。体外抗肿瘤试验表明蜈蚣酶解液产物具有较优增殖抑制效果,对肺腺癌A549细胞株、乳腺癌MCF-7细胞株及喉癌Hep-2细胞株的IC50值分别为1. 822mg/ml、1. 142mg/ml和1. 404mg/ml。结论:此工艺稳定可行,可应用于蜈蚣酶解工艺的优化;其抗肿瘤效果优良。

复合酶酶解蜈蚣粉工艺优化

目的优化复合酶酶解蜈蚣粉最佳酶解工艺。方法采用正交试验法探究酶解温度、酶解时间、pH值及单个酶酶活力对蜈蚣复合酶酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率的影响,并确定最佳酶解工艺条件。结果蜈蚣复合酶最佳酶解工艺条件为酶解温度35℃、酶解时间3 h、pH值为8.0及单个酶酶活力2000 U/g,在此工艺条件下,蜈蚣复合酶酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率为61.67%。结论通过实验验证此工艺可行,蜈蚣复合酶酶解液冻干粉对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率较高。

基于半仿生及体外抗肿瘤细胞株实验技术对土鳖虫最佳用酶的筛选

以半仿生技术结合体外抗肿瘤细胞实验,筛选出土鳖虫的最佳用酶。方法:以土鳖虫为底物,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶进行酶解,同时以不加酶的水提液为对照组,测定每组的水解度,采用MTT法,以对肿瘤细胞株的抑制率为指标,分别对土鳖虫的最佳用酶进行筛选。水解度从高到低的顺序依次为弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,它们的水解度分别为9.95%、6.76%、4.94%、2.29%;不同酶解液对不同肿瘤细胞抑制效果不同。土鳖虫酶解液对肝癌细胞的最佳用酶是胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶;对喉癌细胞的最佳用酶是胰蛋白酶和弹性蛋白酶。胃蛋白酶对两个肿瘤细胞的抑制效果最弱可忽略不计。

蜘蛛粉中糖胺聚糖提取工艺的优化

目的:探究蜘蛛粉中总糖胺聚糖的最佳提取工艺。方法:通过紫外可见分光光度法测定蜘蛛粉中糖胺聚糖的含量,以糖胺聚糖的提取量为考察指标,采用正交试验法,优化蜘蛛粉中糖胺聚糖的最佳提取工艺。结果:超声波提取蜘蛛粉中糖胺聚糖的最佳工艺为:料液比1∶40,提取温度50℃,提取时间80 min。结论:在优化提取工艺条件下糖胺聚糖的含量是21.072 mg·g^(-1),验证实验证明结果稳定,具有生产应用价值。

发酵品醇提物吸入粉雾剂处方筛选及性质表征研究

目的:研究全蝎、白术、蛴螬混合发酵品(SAHHFP)醇提物的吸入粉雾剂处方筛选及性质表征。方法:将SAHHFP醇提物冻干粉与乳糖按1∶1、1∶2、1∶3、3∶4的比例混合得到的喷雾干燥粉制成胶囊型吸入粉雾剂,通过对粒径、电位、流动性、吸湿性和吸入粉雾剂空气动力学有效沉积率的比较,得到两者的最佳配比。结果:SAHHFP醇提物冻干粉与乳糖按1∶1比例混合得到的喷雾干燥粉流动性、吸湿性和有效沉积率均优于另外三个比例。结论:SAHHFP醇提物冻干粉与乳糖按1∶1比例混合得到的喷雾干燥粉可以制成胶囊型吸入粉雾剂,且具有较好的稳定性。

地衣芽孢杆菌发酵土鳖虫前后水溶性活性物质含量比较及抗凝血活性

目的:比较未发酵和经地衣芽孢杆菌发酵后蛋白质、多糖含量的差别,并研究土鳖虫经地衣芽孢杆菌发酵后的抗凝血活性;方法:通过改良Lowry法、苯酚-硫酸法分别测定蛋白质、多糖含量,以凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)为指标评价抗凝血活性。结果:水溶性蛋白质发酵前后含量为65.2061 mg/g,55.9015 mg/g,多糖为46.9724 mg/g,84.8736 mg/g;发酵后能显著延长小鼠的APTT、TT值,但对PT值则无明显影响。结论:土鳖虫经地衣芽孢杆菌发酵后能显著提高多糖含量,明显降低蛋白质含量,并且发酵后具有更强的抗凝效果。

不同弹性蛋白酶酶活力条件下野生与养殖全蝎活性成分含量及体外抗肿瘤实验的对比研究

研究了弹性蛋白酶酶活力对野生与养殖全蝎活性成分含量及体外抑制肿瘤细胞生长的影响,筛选了弹性蛋白酶的最佳用量。依据全蝎混合酶解工艺中最佳提取条件,在弹性蛋白酶酶活力分别为2000、1000、400、200、20和0 U的条件下,分别测定野生与养殖全蝎中蛋白质和糖胺聚糖的含量及对肺腺癌(A549)细胞的抑制率。结果养殖全蝎的蛋白质含量显著高于野生的,而糖胺聚糖含量则显著低于野生的;养殖全蝎对肺腺癌细胞的抑制效果高于野生全蝎的抑制效果,且当弹性蛋白酶的酶活力为200U时,养殖全蝎对A549细胞的抑制效果最佳,IC50值为0.331 mg/mL。养殖全蝎对肺腺癌细胞具有较高的抑制作用,弹性蛋白酶的最优酶活力为200 U。

发酵前后不同分子量段全蝎白术混合品体外抗肿瘤研究

目的研究全蝎白术混合发酵品的抗肿瘤活性,确定药物抗肿瘤的活性部位。方法依据双指标优化提取工艺的最优条件对全蝎白术混合发酵品进行超声提取。采用超滤手段,分别用截留量为5kD和10k D的超滤膜对水提液进行超滤分段,测定各分子量段中蛋白质和多糖的含量,采用MTT法检测体外抗肿瘤活性,并以未发酵品做对照。结果各分子量段对2种肿瘤细胞抑制效果具有差异性,醇沉上清液对肿瘤细胞的抑制效果最好,其次为分子量段>10 kD全蝎白术混合发酵品,且全蝎白术混合发酵品对肿瘤细胞抑制作用显著优于未发酵品。结论全蝎白术混合发酵品对乳腺癌细胞、喉癌细胞均有较高的抑制作用,其活性部位主要为醇沉上清液和分子量段>10 kD全蝎白术混合发酵品。

野生与养殖全蝎水提液中化学成分含量及抗病毒作用的对比研究

为了观察比较野生与养殖全蝎冻干粉水提液中主要成分含量及其抗病毒作用,分别采用改良Lowry法测定蛋白质含量,阿利新蓝法测定糖胺聚糖含量,重量法测定醇提物含量,MTT法考察两种全蝎水提成分对HSV、RSV、EV71病毒的抑制作用。结果蛋白质含量、糖胺聚糖含量差异均无统计学意义。两者对病毒的抑制效果比较中,养殖全蝎水提液效果优于野生全蝎。经过两者间几个主要成分含量的比较以及抗病毒抑制作用的比较,野生与养殖全蝎原粉水提液中主要化学成分含量变化不大,但养殖全蝎抗病毒作用优于野生全蝎。

全蝎白术白头翁组合发酵品不同醇浓度提取物的活性成分分析及体外药理研究

评价全蝎白术白头翁组合发酵品(SAPZFP)不同醇浓度提取物的活性成分含量及体外抗肿瘤活性差异。分别测定SAPZFP不同醇浓度提取物的醇溶性总蛋白、总多糖、总黄酮的含量,并采用MTT法检测不同醇浓度提取物抑制肿瘤细胞体外增殖的能力。SAPZFP不同醇浓度提取物均具有体外抗肿瘤活性,其中75%醇提物抑制乳腺癌细胞株MCF-7、肺腺癌细胞株A549体外增殖的能力最强,IC50分别为0.066、0.022 mg·mL-1。综上所述,SAPZFP的25%、50%、75%醇提物均具有体外抗肿瘤活性,且75%醇提物效果最优。

正交实验法优化地龙粉混合酶酶解工艺

探索了地龙粉混合酶(弹性蛋白酶和胰蛋白酶)酶解最佳工艺。在单因素实验基础上,采取正交实验对地龙粉进行酶解。以酶解时间、酶解温度、pH、加酶量为自变量,以地龙粉水解度为因变量,采用L9(43)正交实验表进行实验。各因素对实验结果影响顺序为:C>B>D>A。最佳酶解工艺条件为酶解时间8h,酶解温度55℃,pH=8,加酶量3 000 U,水解度达52.96%。

地龙粉酶解用酶初步筛选

分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶对地龙粉进行酶解,以水解度和对肺腺癌细胞抑制率为指标筛选最佳用酶。利用五种酶对地龙粉进行酶解,同时进行空白实验,采用MTT体外抗肿瘤技术,通过水解度和酶解液对肺腺癌细胞的抑制率筛选最佳用酶。胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对地龙粉的水解度分别为9.42%、7.95%,且两者的酶解液对肺腺癌细胞A549的抑制率与浓度成负相关;木瓜蛋白酶对地龙粉的水解度最低且酶解液对肺腺癌细胞A549无抑制作用;胰蛋白酶对地龙粉的水解度为17.96%,其酶解液对肺腺癌细胞A549在低浓度下无抑制作用,在1 mg/L时抑制作用达最大,为83.08%;弹性蛋白酶对地龙粉的水解度最大,为30.61%,且其酶解液对肺腺癌细胞A549的抑制作用与浓度成正相关。地龙粉酶解最佳用酶为弹性蛋白酶和胰蛋白酶混合使用。

基于半仿生酶解技术的中药乌贼墨最佳用酶初步筛选

以体外抗肿瘤实验为指标,初步确定中药乌贼墨的最佳用酶。用人胃肠道系统中的胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶,弹性蛋白酶酶解乌贼墨,以乌贼墨水提液为对照组,在茚三酮显色法测定水解度的基础上,采用四唑盐(MTT)比色法研究四种蛋白酶酶解液对肺腺癌细胞株A549的抑制作用,初步筛选出最佳用酶。四种蛋白酶酶解中药乌贼墨后的蛋白质水解度分别为胰蛋白酶5.12%,胃蛋白酶4.61%,胰凝乳蛋白酶2.09%,弹性蛋白酶0.32%。抗肿瘤实验结果表明:胰蛋白酶酶解液在药物浓度0.4～1.4mg·mL^(-1)范围内,细胞抑制率均在85%～95%。其他三种酶解液的抑制率在各实验浓度范围内均未超过30%。通过半仿生酶解技术,初步筛选出酶解中药乌贼墨的最佳用酶为胰蛋白酶。

地胆粉最佳用酶及其酶解物的抗肿瘤作用研究

初步筛选了地胆粉的最佳用酶及通过了MTT法测定酶解产物的抗肿瘤活性。模拟体外胃肠道消化系统以胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶4种蛋白酶进行酶解反应,采用MTT法检测酶解产物对肝癌细胞BEL-7402、乳腺癌细胞MCF-7的抑制效果。结果弹性蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶的水解度分别为2.84%、13.11%、10.31%,其中胰蛋白酶的酶解液对肝癌细胞BEL-7402的抑制率明显高于对照组,且成剂量依赖性,其他酶解液的抑制作用不显著。胰蛋白酶的酶解液对乳腺癌细胞MCF-7也有一定的抑制作用,其他酶解液无效果。胰蛋白酶是地胆粉抑制肝癌细胞的最佳酶,酶解度与抑制肿瘤细胞生长没有直接关系。

烟台刺参酶解工艺最佳用酶初筛及体外抗肿瘤研究

通过考察不同酶对海参酶解产物的体外抗肿瘤活性及水解度的影响,确定最佳用酶,为海参抗肿瘤研究提供新思路。以海参水提液及100μg/mL顺铂为对照组,对比不同提取条件下海参水提液对喉癌Hep-2细胞的增殖抑制率,结合茚三酮显色法测定海参酶解液水解度,确定最佳用酶。结果显示:弹性蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶处理组水解度分别为10.05%、7.86%、1.54%,其IC50分别为0.642、0.763、0.917 mg/mL,胃蛋白酶处理组水解度为2.72%,抗肿瘤效果极差。说明海参酶解最佳用酶为弹性蛋白酶,其次是胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶。

中药全蝎白术白头翁组合品发酵前后水提液不同截留分子量段的活性成分及体外抗肿瘤研究

比较全蝎白术白头翁组合发酵品(SAPZFP)与未发酵品(SAPZP)水提液不同截留分子量冻干粉活性成分及体外抗肿瘤活性的差异。分别测定各截留分子量段水溶性氨基酸、蛋白质、多糖的含量,并采用MTT法研究其对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用。SAPZFP截留分子量<5、5~10、>10 kDa冻干粉对乳腺癌细胞株MCF-7的IC50分别为0.854、0.315、0.071 mg·mL-1;SAPZP的分别为1.128、0.360、0.115 mg·mL-1。SAPZFP截留分子量>10kDa的抗肿瘤活性显著,球孢白僵菌双向固体发酵技术可显著增强本组合物的体外抗肿瘤活性。