S100B在多柔比星诱导心肌细胞损伤中的表达及作用

目的:研究S100B在多柔比星诱导心肌细胞损伤中的表达变化及作用。方法:将体外培养的心肌细胞随机分为对照组,多柔比星损伤组(DOX组),多柔比星+阴性siRNA对照组(DNC组),DOX+S100B-siRNA组(DSB组)。用脂质体RNAi-MAX将S100B-siRNA转染到心肌细胞48 h后,多柔比星(2.0μmol/L)处理2 h。分别采用四甲基噻唑蓝(MTT法)、流式细胞术、蛋白质印迹法检测细胞存活率、凋亡率、S100B蛋白变化。结果:MTT测定显示,DNC组与DOX组存活率相比差异无统计学意义(P>0.05),DSB组与DOX组相比,其存活率增加(P<0.05)。流式细胞术分析表明,DOX组与DNC组凋亡率相比,差异无统计学意义(P>0.05);与DOX组相比,DSB组凋亡率降低(P<0.01)。蛋白质印迹检测S100B蛋白结果显示,DOX组与DNC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);DSB组与DOX组相比,S100B蛋白表达下降(P<0.01)。结论:S100B在多柔比星诱导损伤的心肌细胞中表达明显增加并且可能促进心肌细胞凋亡。

胞内高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)中的作用。方法:酶消化法分离3周C57/BL6小鼠心脏成纤维细胞,培养并传代,实验使用2～4代细胞,波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色鉴定细胞。高糖培养不同时间(0,6,12,24,48h)后分别检测成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达量。在转染siRNA后再高糖培养心脏成纤维细胞6 h,RT-PCR检测HMGB1、TGF-β1 mRNA的水平。结果:与0h相比,高糖培养6,12,24,48 h后成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达都上调。转染HMGB1 siRNA后高糖培养6 h的成纤维细胞TGF-β1表达下调。结论:HMGB1可能参与调节高糖诱导的心脏成纤维细胞的TGF-β1的表达。

miR-181d-5p对人结肠癌细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨微小RNA-181 d-5 p(microRNA miR-181 d-5 p)对人结肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:采用miR-181d-5p抑制物转染人结肠癌细胞系HCT116细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR和Western blot技术检测细胞miR-181 d-5 p、第10染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、黏附斑激酶(FAK)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱天冬蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和PTEN、FAK、p-FAK、Bcl-2、激活型Caspase-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达,Targetscan软件在线预测及双荧光素酶实验分析miR-181 d-5 p和PTEN的调控关系。结果:与阴性对照组比较,miR-181d-5p抑制物组miR-181 d-5 p mRNA表达明显下调(P<0.01),凋亡细胞明显增加(P<0.01),PTENmRNA表达水平明显上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达水平明显下调(P<0.01),PTEN、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-FAK、Bcl-2蛋白表达水平显著下调(P<0.01),其余各组之间差异均无统计学意义(P>0.05);Targetscan软件预测显示PTEN基因3′UTR含有miR-181 d-5 p的结合位点,双荧光素酶结果显示与突变型PTEN 3′UTR联合miR-181 d-5p模拟物组相比,野生型PTEN 3′UTR联合miR-181d-5p模拟物组荧光素酶活性明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论:miR-181 d-5 p可通过靶向调控PTEN抑制人结肠癌细胞凋亡,可成为结肠癌临床分子靶向治疗的潜在靶点。

SCNN1B与胃癌细胞上皮间质转化相关性实验研究

目的:探讨SCNN1B基因与人胃癌细胞上皮间质转化的相关性。方法:构建SCNN1B过表达载体,稳定转染人胃癌SGC-7901细胞。于裸鼠右前肢皮下接种细胞,制备胃癌裸鼠移植瘤模型。3周后处死裸鼠,观察移植瘤生长情况。分别采用Real-time PCR、Western blot、免疫组化检测移植瘤组织中SCNN1B、E-cadherin,N-cadherin及Vimentin表达情况。结果:SCNN1B过表达抑制胃癌移植瘤增长,提高E-cadherin表达水平,降低N-cadherin和Vimentin表达水平。结论:过表达SCNN1B能够抑制胃癌细胞的生长及上皮间质转化。

TRIM21调控人结直肠癌细胞增殖分子机制研究

目的:探讨TRIM21通过正调控转化生长因子-β1(TGF-β1)-Smad2/3信号通路影响人结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:在人结直肠癌细胞HCT116中转染TRIM21 siRNA沉默TRIM21的表达,采用荧光定量PCR和Western blot检测转染效果;采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h和96 h时的细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1的表达;采用Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad2和Smad3在mRNA水平上的表达,Western blot检测TGF-β1、Smad2/3在蛋白水平上的表达及Smad2/3的磷酸化,验证TRIM21 siRNA转染后对TGF-β1—Smad2/3通路的影响。结果:TRIM21 siRNA转染组HCT116细胞中的TRIM21表达量明显下降(P<0.01),转染后24 h、48 h、72 h和96 h的细胞活力显著高于阴性对照组(P<0.05),Cyclin D1表达量上调(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染后的凋亡细胞比例显著下降(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染组TGF-β1的表达降低(P<0.01),Smad2和Smad3的表达量基本不变(P>0.05),但Smad2/3的磷酸化水平显著下降(P<0.01)。结论:干扰TRIM21的表达促进人结直肠癌细胞HCT116细胞增殖、抑制凋亡,其作用机制可能与影响TGF-β1—Smad2/3信号通路的激活和CyclinD1表达有关。

TUSC3对人肝癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

[目的]探究 TUSC3对肝癌细胞(SMMC‐7721细胞系)增殖、迁移和侵袭的影响.[方法]在SMMC‐7721细胞中转染TUSC3过表达质粒,采用Real‐time PCR和Western blot技术检测 T USC3 mRNA和蛋白表达验证质粒转染效果. MTT检测转染后24 h 、48 h 、72 h和96 h时的细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭.[结果]本研究成功在SMMC‐7721细胞中过表达 TUSC3 . MTT结果显示TUSC3过表达转染组的细胞增殖能力显著低于空载体转染组( P <0 .01).划痕实验结果显示TUSC3过表达转染组的细胞迁移能力也显著下降( P <0 .05).与划痕实验结果类似,Transwell结果也表明TUSC3过表达后,肝癌细胞侵袭能力下降( P <0 .01).[结论]TUSC3抑制人肝癌细胞SMMC‐7721细胞系的增殖、迁移和侵袭,可能在肝癌发展中发挥抑癌作用.