草莓miR390基因及其启动子的鉴定与表达分析

【目的】明确草莓miR390基因的表达特性,为进一步揭示其与草莓白粉病抗性的关系奠定基础。【方法】采用PCR和qRT-PCR的方法,从栽培草莓‘全明星’中克隆了miR390基因及其启动子序列,系统研究了高盐、低温、不同培养方式、IAA处理等对草莓miR390基因表达的影响。【结果】克隆到的418 bp的草莓miR390基因序列中,包含97 bp的茎环结构及侧翼序列,并且高度保守的21 nt的成熟miR390序列位于茎环的5′端臂上。利用生物信息学软件分析草莓miR390基因的启动子序列发现,除了具有TATA/CAAT-box外,还含有spl、HSE等特异作用元件。定量RT-PCR结果表明,高盐能明显抑制草莓miR390的表达,而低温对其表达影响不大,相同条件下固体培养基比液体培养基更能促进草莓miR390的表达;与GA3等激素相比,IAA能显著增加草莓miR390的表达。【结论】采用IAA质量浓度为0.01 mg·L-1的固体培养基,最能增加草莓微繁殖苗miR390的表达量。

草莓miR390靶基因TAS3的克隆及表达分析

以栽培草莓品种‘全明星’为试材,通过3′-和5′-RACE技术克隆出miR390靶基因TAS3的cDNA全长,命名为FaTAS3。序列分析发现:草莓TAS3基因的cDNA全长为742bp,含有16个碱基的Poly A尾巴及2个高度保守的ta-siRNA产生位点和1个miR390靶位点;该基因DNA全长为824bp,5′端130bp处有一个98bp的内含子序列。生物信息学软件预测显示,草莓TAS3基因的启动子除具有TATA/CAAT-box外,还含有G-box、Cbox等特异作用元件。实时定量RT-PCR结果表明,草莓miR390与靶基因TAS3间的表达模式与拟南芥中的表达模式相同,推测草莓TAS3基因的生物合成也受miR390的指导。

果树microRNA研究进展

micro RNA(mi RNA)是一类来自真核生物自身基因组的非编码小分子RNA,通过互补配对原则作用于靶基因,从而调控植物的生长发育、激素信号以及胁迫响应等生物过程。扼要总结了果树mi RNA的生物学功能,分析了果树作物与模式植物mi RNA保守性的差异,从mi RNA的分离鉴定、表达检测及靶基因验证等方面介绍了果树mi RNA的研究方法,同时对该领域的研究进展及存在的问题进行讨论。