蜡样芽孢杆菌溶血素BL的表达及多克隆抗体的制备

为了获得蜡样芽孢杆菌溶血素BL的三个亚基HblA、HblC和HblD的蛋白质和多克隆抗体,试验采用PCR方法分别扩增得到HblA、HblC和HblD基因片段,基于原核表达载体pET-28a构建重组表达质粒,利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞分别表达重组蛋白HblA、HblC和HblD,通过Ni2+亲和层析柱对其进行纯化,用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠制备相应的多克隆抗体,通过Western-blot检测蜡样芽孢杆菌BC12培养上清液中的溶血素BL。结果表明:试验成功构建出HblA、HblC和HblD基因的重组表达质粒;获得与预期大小相符的重组蛋白HblA、HblC和HblD,蛋白质条带大小分别为44.7,52.1,46.8 ku;制备出HblC和HblD的多克隆抗体,该抗体均能特异性识别蜡样芽孢杆菌培养上清液中的溶血素BL亚基。说明试验制备的多克隆抗体可用于蜡样芽孢杆菌溶血素BL的检测。