流式细胞术检测组蛋白乙酰化水平方法的建立与应用

组蛋白去乙酰化酶抑制剂是近年来出现的一类新的抗肿瘤药物,在艾滋病等其他疾病中同样也受到关注。但是在基础和临床研究中,目前还缺乏统一可靠的组蛋白乙酰化水平的检测手段。本文利用全血和外周血单个核细胞,通过一系列的对比实验,比较了不同样品处理温度(冰上和室温)、破膜方法(细胞内因子染色破膜和核内因子染色破膜)、抗体剂量(抗体滴定)和抗体孵育时间(时间梯度)等实验条件对流式细胞术检测的影响,最终建立了一套基于流式细胞术的组蛋白乙酰化水平检测手段。同时,将优化后的流式细胞检测技术应用于西达本胺(目前国内唯一上市的组蛋白去乙酰化酶抑制剂)的体外实验和临床试验,结果均证明本文建立的组蛋白乙酰化流式细胞检测方法可以作为基础和临床研究中一个可靠、快速、便捷的检测手段。

HAART对HIV感染者NK细胞FcγRII表达及疾病进展的影响

目的研究艾滋病病毒(HIV)感染者外周血中自然杀伤细胞(NK cells)亚群的比例,各亚群细胞对CD32A/CD32B/CD57的表达水平,高效抗反转录病毒治疗(HAART)与疾病进展的相关性。方法对未经治疗的慢性HIV感染者35例和进展期患者23例,分析NK细胞各亚群的比例,各亚群细胞对CD32A/CD32B/CD57的表达水平,CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)、CD8+T淋巴细胞(简称CD8细胞)计数及CD4/CD8比值,并对以上各因素进行相关性分析。以上患者中选14例慢性HIV感染者、10例进展期患者进行HAART治疗(替诺福韦+拉米夫定+依非韦伦)6个月,分析治疗对以上因素的影响。结果机体感染HIV后,CD56dimNK细胞的比例下降,CD56neg NK细胞的比例升高(P<0.0005);CD57+CD56dimNK细胞、CD57+CD56neg NK细胞的比例下降(P<0.05),CD32B+CD56dim NK细胞、CD32B+CD56neg NK细胞的比例升高(P<0.05)。CD56dimNK细胞比例与CD4/CD8比值正相关(P=0.0176,r2=0.0813),CD56neg NK细胞比例与CD4/CD8比值呈负相关(P=0.0293,r2=0.0689)。经过治疗的慢性HIV患者的CD56bright NK细胞的比例降低(P<0.05),所有患者的CD4细胞计数及CD4/CD8比值升高(P<0.01)。结论 HIV通过抑制NK细胞成熟增加抑制型受体表达,改变NK细胞亚群比例来抑制NK细胞功能。有效的HAART治疗可以恢复HIV患者CD4细胞计数及CD4/CD8比值,促进免疫重建,降低死亡概率。

HIV感染人群的NK细胞表型及功能变化

艾滋病病毒(HIV)作为艾滋病(AIDS)的病原体可损害人体免疫系统,使机体免疫功能部分或完全丧失,继而发生机会性感染、恶性肿瘤等严重并发症。HIV是当今世界最为严重的公共卫生问题之一。自然杀伤细胞(NK)是机体固有免疫系统中一种重要的细胞毒效应细胞,在机体抗感染和抗肿瘤免疫中发挥着重要作用;该细胞还具有良好的抗病毒及诱导、调节机体适应性免疫的作用。文章就NK细胞的表型及功能对HIV疾病的影响进行综述。

抗病毒治疗对HIV-1感染者调节B细胞和记忆B细胞免疫平衡的影响

目的探讨抗反转录病毒治疗(ART)前后,艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者外周血中调节B细胞(Breg)和记忆B细胞(Bmem)的平衡,以及白介素-10(IL-10)表达水平与HIV-1感染疾病进展的关系。方法选择30例未治疗的HIV-1感染者,于ART治疗前和治疗12周,分离外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术(FCM)检测CD19+CD24hi CD38hi B细胞、CD19+CD24hi CD38loB细胞的及CD19+IL-10+B细胞比例的变化;用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定培养上清中IL-10水平,与健康对照组比较。结果相对于健康对照组,感染HIV-1后,CD19+CD24hi CD38hi B细胞的比例(P=0.0001)、Breg/Bmem比值(P<0.0001)及上清中IL-10水平(P=0.0028)均升高,而CD19+CD24hi CD38loB细胞的比例(P=0.0005)显著降低,差异具有统计学意义。ART开展12周后,CD19+CD24hi CD38hi B细胞的比例(P=0.0069)、Breg/Bmem比值(P=0.0012)及上清中IL-10水平(P=0.041)均显著降低,且上清中IL-10水平与Breg(R2=0.1347,P=0.0039)的比例呈正相关性,而与Bmem细胞的比例呈显著负相关(R2=0.1705,P=-0.001)。结论 HIV-1感染改变了CD19+CD24hi CD38hi B细胞的比例、其相关细胞因子IL-10的表达水平,并破坏了Breg/Bmem平衡;经过ART治疗后,CD19+CD24hi CD38hi B细胞的比例与其相关细胞因子IL-10的表达水平及Breg/Bmem平衡可以得到逐渐恢复。

基于空间-时间相关成像技术的胎儿心脏3D建模打印方法学研究及临床初步应用

目的探讨基于超声数据三维(three-dimensional,3D)建模打印胎儿心脏三种方法的可行性、准确性及其在不同胎儿心血管结构展示中的价值。方法选取2019年1-12月于空军军医大学唐都医院超声医学科进行胎儿心脏检查的胎儿93例,其中心脏正常83例,心脏畸形10例。利用空间-时间相关成像技术(spatio-temporal image correlation,STIC)采集胎儿超声心动图容积数据。采用血流建模、血池建模和空腔建模三种方法对93例胎儿心脏进行3D建模,利用光固化3D打印技术打印实体模型。比较3D数字模型及打印模型上的测值和相对应的在胎儿超声心动图图像上的测值,评估三种建模方法的可行性和准确性。结果多普勒血流图像数据建模的胎儿心脏血流模型真实呈现了细小血管的畸形及走向;利用血池建模3D打印模型可直观呈现出心脏及大血管的畸形结构;空腔建模3D打印模型可准确呈现瓣膜及结构缺损部位。Bland-Altman分析显示,不论是正常还是心脏畸形胎儿相关指标超声测值与数字建模和3D打印模型测值一致性良好,其中正常胎儿心脏左室和右室长径的超声图像测值[(15.3±1.9)mm,(13.2±1.9)mm]与其空腔建模的数字模型[(15.1±1.9)mm,(12.9±1.9)mm]和3D打印模型[(15.1±1.9)mm,(13.0±1.9)mm]测值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。操作者内和操作者间一致性良好。结论血流建模、血池建模和空腔建模三种方法在不同种类胎儿心脏畸形结构展示方面各有优势,应从中选择合适的建模方法进行3D建模打印,弥补单一建模方式的局限性。三种建模方法所得数字模型与3D打印模型及超声心动图参数测值一致性及重复性较好。

3D打印心脏模型在模拟左心耳封堵术临床教学中的应用价值

目的:探讨基于超声和CT影像融合数据的3D打印心脏模型用于模拟左心耳封堵术在临床教学中的应用效果。方法:2023年5月至2023年10月,选取空军军医大学第二附属医院心血管内科60名医师作为教学对象,根据随机分组的方式将受试者分为教学试验组和对照组,每组各30人。对照组采用理论授课的传统教学方法,教学试验组采用理论授课结合基于超声和CT影像融合数据的3D打印心脏模型模拟手术的教学方法。培训结束后,对全部医师进行理论考核、实践考核以及教学问卷调查评分,比较对照组与试验组的教学效果。结果:在理论考核方面,教学试验组医师的理论笔试成绩(93.37±2.17)分高于对照组(90.13±2.13)分,差异有统计学意义(P<0.0001)。在实践考核方面,试验组医师的实践操作成绩(90.03±1.85)分,高于对照组医师(84.73±3.76)分,差异有统计学意义(P<0.0001)。教学问卷调查结果显示,教学试验组评分(24.73±0.64)分高于对照组评分(20.60±1.75)分,差异有统计学意义(P<0.0001)。结论:与传统教学方法相比,应用3D打印心脏模型进行体外模拟左心耳封堵术的教学方法有助于激发临床医师的学习兴趣,帮助临床医师快速掌握新技术、新器械的操作要点,提高问题分析能力并积累手术实践经验,值得进一步推广应用。