PRRSV不同Nsp2基因缺失型毒株混合感染的鉴定

从疑似猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪的肺、淋巴结提取样本RNA,针对PRRSV的部分Nsp2基因进行了RT-PCR扩增。结果显示,扩增得到大小不同的2种(HW1和HW2)DNA条带。对PCR产物进行序列分析的结果表明,HW1和HW2都是Nsp2基因的扩增产物,HW2大小为1 062 bp,相对于经典PRRSV缺失90 bp,HW1为975 bp,缺失177 bp,二者之间的核苷酸同源性为98.2%;氨基酸同源性为96.6%。这说明病猪混合感染了2种Nsp2基因不同程度缺失的PRRSV。

高质量鸭肝脏组织总RNA的提取及稳定性测试

为获得高质量的鸭肝组织RNA样本,通过优化提取方案,从1 g超低温(-80℃)的冻存组织中提取RNA,以紫外分光光度计对RNA的含量进行了测定,并对其纯度进行了分析;通过琼脂糖凝胶电泳对RNA的完整性进行了检测,并对所得样本的稳定性进行了测试。结果表明:试验得到了1 528μg RNA,样品OD260/OD280=1.93,电泳得到的28 s和18 s RNA条带清晰可见,没有发生降解,样品在室温条件可保存24 h以上,在-20℃可保存8 d以上。提取的RNA质量较高。

PRRSV特种野猪分离株NSP2基因序列分析和疫苗免疫效果

为了解流行于特种野猪群的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进化特征,对发病猪场PRRSV流行毒株的NSP2基因进行序列分析,结果发现该流行现场毒株NSP2基因缺失90个核苷酸,与国内近年广泛流行的高致病性PRRSV进化地位接近。对发病猪群进行疫苗接种试验,猪场疫情逐渐平息,接种30 d后,猪群PRRS血清抗体阳性率从35%上升到55%。

三带喙库蚊携带猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步证实

从3个临床发病猪场采集三带喙库蚊提取RNA样本,采用针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2基因设计的引物进行RT-PCR检测,并进行克隆、测序和序列分析;同时取三带喙库蚊匀浆上清接种Marc-145细胞进行PRRSV的分离与鉴定。结果表明:从三带喙库蚊提取的3份RNA样品均扩增出大小约为1 060 bp的特异性DNA条带,其序列与从相应猪场病猪分离得到的猪源PRRSV毒株高度同源,与国内参考株CH-1a株相应序列比较均缺失90个碱基。将3份三带喙库蚊匀浆上清接种Marc-145细胞后,均可观察到明显的细胞病变;以间接免疫荧光试验进行检测,可观察到培养细胞内的特异性荧光;采用RT-PCR反应可检出培养细胞内的PRRSV核酸。上述试验证实,三带喙库蚊可携带PRRSV,可能是引起PRRS传播与流行的重要途径之一。

大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR检测方法的建立

为探索减毒胞内侵袭菌介导的粘膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,以大肠杆菌与葡萄球菌16S rRNA基因拷贝数为研究对象,采用实时定量技术(Real-time PCR)对2种细菌进行定量检测,建立大肠杆菌与葡萄球菌数量快速检测方法。结果表明:扩增出的2种细菌核苷酸序列与GenBank上已知目的菌种同源性为100%,构建的2条标准曲线相关系数均接近1,误差较小,熔解曲线显示均成单一峰值。成功构建了大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR标准曲线,可为进一步研究减毒沙门氏菌介导的粘膜免疫奠定基础。

贵州省规模化养猪场繁殖障碍性疾病的血清学调查

采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT),对贵州省4个地区6个规模化猪场240份血清进行猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪圆环病毒2型(PCV2)抗体水平检测。结果:CS-FV、PPV和PRV免疫抗体阳性率分别为64.2%、77.9%和59.2%;PRRSV、PCV2抗体阳性率分别为10.4%和32.5%。上述结果表明,猪细小病毒病、猪伪狂犬病和猪瘟免疫效果比较理想,但6个规模场存在PRRSV和PCV2混合感染,应引起各养殖场高度重视。

人工感染雏鸭体内DEV强毒的荧光定量PCR检测

将鸭肠炎病毒(DEV)强毒GZ株经腿部肌肉注射感染15日龄雏鸭后,应用建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法检测病毒在雏鸭体内各组织的动态分布。结果显示,感染后3 h即可在肝、脾、脑、胸腺、肾和肺6种组织中检出病毒核酸;感染后6 h,除上述组织外还可在十二指肠和盲肠检测到;感染后10 h又可在胸肌和心肌等检测到。不同受检组织病毒核酸检出量有所不同,由高到低依次为脑、肝、脾、胸腺、肾、十二指肠、盲肠、肺、胸肌和心肌。为阐明DEV的致病机理提供了重要的试验数据。

DEV-NP基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测

为构建鸭肠炎病毒(DEV)核衣壳蛋白(NP)基因酵母双杂交诱饵载体,采用PCR技术扩增出DEV-NP基因,克隆至酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7中,以PCR检测、限制性酶切和序列测定等方法进行鉴定;然后采用PEG/LiAc法将阳性质粒pGBKT7-NP转化酵母Y2HGold,在不同营养缺失型培养基进行自激活检测,结果显示,经PCR检测和EcoR I/BamHⅠ双酶切,可见到与预期相一致的目的片段;测序表明该片段含DEV NP基因全部序列;转化Y2HGold酵母菌后,在SD/-Trp/X-α-Gal固体培养基上长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA固体培养基上未见有菌落生长。无自激活作用的诱饵载体pGBKT7-NP的成功构建,为DEV NP宿主结合蛋白的筛选奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征和大肠杆菌病混合感染的诊断

贵州省某种猪场仔猪陆续死亡,为确诊病因,采用流行病学调查,临床症状及病理剖检观察,PRRS病原核酸RT-PCR检测,细菌分离培养等方法进行诊断。结果:此次疫病由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和大肠杆菌混合感染所致。

猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州流行株ORF5序列变异分析

通过RT—PCR扩增9株贵州省PRRSV流行毒株的ORF5基因，并将其连接到pMD18-T载体进行克隆测序得到目的基因序列。参考国内外毒株，分析其变异特点。结果表明，9株PRRSV贵州流行株都属于美洲型毒株，其ORF5序列之间同源性为99．5％～100．0％。以GZCJ株为贵州省代表毒株，与美洲型参考毒株之间的同源性为89．7％～98．7％，与近年流行的毒株遗传距离较近，与早期流行毒株遗传距离较远，其发生了大量点突变。

复合中草药制剂对肉仔鸡生长及免疫性能的影响

为中草药作为鸡饲料添加剂的开发应用提供科学依据,根据中兽医组方原则,以黄芪、大黄、党参、黄连等原料配制复合中草药制剂用于肉仔鸡饲养,测定了鸡的生长速度、饲料转化率、新城疫(ND)和H5亚型禽流感(H5N1)的免疫抗体滴度。结果表明:在饲料中添加0.1%的中草药制剂,鸡的生长速度极显著高于对照组和全价商品日粮组;能提高饲料转化率,与对照组间差异不显著,但与商品日粮组间差异极显著;能极显著提高鸡群ND和H5亚型禽流感的免疫抗体滴度。

猪圆环病毒2型感染对猪群生产性能的影响

为评估猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪生产性能的影响,在4个猪场利用本场流行毒株分别得到感染猪群并分阶段比较测定生长速度和饲料转化率。结果表明,PCV-2感染使猪群生长速度和饲料转化率在28d^58d分别下降13.54%~17.81%和3.94%~6.44%;58d^88d下降5.78%~8.06%和5.81%~8.94%;88d^118d下降6.30%~8.70%和2.63%~4.92%;118d^148d下降3.17%~4.80%和2.89%~5.76%;148d^178d下降2.74%~4.50%和2.68%~2.91%。差异显著性分析发现,PCV-2感染显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低了猪群生长速度和饲料转化率,造成的不利影响随着年龄增长有减弱趋势。

贵州不同宿主布氏杆菌分离与遗传关系

为了解贵州不同宿主布氏杆菌（Brucella）遗传关系,通过虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）和PCR对奶牛、肉牛、山羊、绵羊、猪、马、犬和鼠检测后,采集阳性者全血分离布氏杆菌,基于omp25基因分析菌株间遗传关系.结果表明：从3个奶牛群和1个肉牛群共分高到遗传距离介于0.000～0.002的牛流产布氏杆菌（B.abortus）9株、从1个B.abortus 感染奶牛群同时分离到遗传距离0.0000的猪布氏杆菌（B.suis）2株、从1个山羊群中分离到遗传距离0.000的山羊布氏杆菌（B.melitensis）2株;奶牛与肉牛源布氏杆菌间遗传距离介于0.000～0.002,牛源布氏杆菌与奶牛源猪布氏杆菌间遗传距离介于0.003 ～0.005,牛流产布氏杆菌与山羊源山羊布氏杆菌间遗传距高介于0.006 ～0.008,奶牛源猪布氏杆菌与山羊源山羊布氏杆菌间遗传距离0.006.说明,3种布氏杆菌流行于3种宿主动物,同一奶牛群存在2种布氏杆菌混合感染现象,不同种布氏杆菌omp25基因具有统一标志性点突变,但流行菌株间遗传关系较近.

金荞麦草粉对贵州地方猪的育肥效果评价

试验旨在研究金荞麦草粉作为地方猪养殖育肥饲料原料的可行性。选取20头仔猪,随机分为1组、2组、3组和4组,每组5头猪。1组采用基础日粮,2组、3组和4组在基础日粮中分别添加20%、30%和40%的金荞麦草粉。试验期150 d。结果显示,与1组相比,2组试验育肥猪平均日增重和料重比均呈下降趋势,但差异均不显著(P>0.05);育肥饲料成本极显著降低(P<0.01);3组、4组育肥猪平均日增重极显著下降(P<0.01),料重比极显著提高(P<0.01)。研究表明,将金荞麦草粉作为地方猪的饲料原料具有一定可行性,从技术和经济方面考虑,以20%金荞麦草粉添加量最优。

猪链球菌感染的诊断与控制治疗

通过临床症状观察、病猪剖检、触片革兰氏染色镜检和细菌分离鉴定、病原核酸检测，确诊猪群发生急性猪链球菌病，通过利用安乃近、安痛定、肾上腺素、柴胡等肌肉注射，头孢噻呋钠、青霉素、链霉素、维生素B和c等耳静脉注射和（或）肌注，对未发生急性死亡的病猪进行治疗，同时利用阿莫西林粉拌料饲喂预防疫情扩散，加强圈舍卫生和消毒，取得良好的治疗控制效果。

规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测

为揭示规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌的耐药性，为生猪养殖选择用药提供借鉴，2012年至2014年期间，通过细菌分离鉴定，从贵州省贵阳市21家发生仔猪黄白痢的规模化猪场分离得到21株致病性仔猪黄白痢大肠杆菌。药物敏感性检测结果表明，分离细菌不同比例地对14种兽医常用抗生素表现耐药性，链霉素和氨苄青霉素耐药性最为严重；头孢噻呋钠和氟苯尼考是较为敏感的抗生素药物，但随着时间推移，头孢噻呋钠和氟苯尼考的敏感菌株比例在逐步下降。

花溪区兔球虫感染现状调查及药物防控措施研究

为了解花溪区兔球虫感染现状并制定相应的药物防控措施,通过麦克马斯特虫卵计数法对花溪区5个兔场（养殖户）共100份样本进行球虫感染调查,并筛选适合该地区抗兔球虫的有效药物。结果发现,5个调查兔场全部感染球虫,感染率55%-100%,平均感染率81%;感染强度OPG值（每克粪便中所含的卵囊数）介于0.8×10^4-3.3×10^4个,平均感染强度为1.96×10^4个。药物筛选结果表明,在3个兔场宜用地克珠利,连续用药10-13 d粪中卵囊消失;2个养殖场宜用盐霉素,连用11-14 d消灭卵囊。结果表明,花溪区兔球虫感染严重,在利用药物防控时应考虑药物有效性并需要足够的疗程。

不同亚群禽白血病病毒感染鸡群的鉴定及其致病特征分析

为了解不同亚群禽白血病病毒(ALV)对宿主的致病特征,通过病毒核酸检测和序列分析,对A、B和C发病鸡群进行ALV感染亚群鉴定,同时根据病理形态观察资料,分析了不同亚群ALV的致瘤型。结果表明,A鸡群感染ALV-A,发生淋巴细胞性禽白血病,病变组织中成淋巴细胞恶性增生;B鸡群混合感染了ALV-A和ALV-J,发生血管瘤型禽白血病,肝血疱区域红细胞恶性增生,皮肤血疱区域表现海绵状血管瘤,组织中未观察到成淋巴细胞或成髓细胞增生;C鸡群感染ALV-J,发生髓细胞瘤型禽白血病,成髓细胞恶性增生。序列分析表明,引起淋巴细胞性和血管瘤型禽白血病的ALV-A毒株间的遗传距离为0.963;引起髓细胞瘤和血管瘤型禽白血病的ALV-J毒株间的遗传距离为0.976。

贵州省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

为了解2007年4月至2008年7月贵州省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分子流行病学特征,在此期间基于PRRSV的Nsp2基因在全省33个发病猪场展开调查。结果表明,有3种不同Nsp2基因缺失类型毒株在贵州省流行。参考PRRSV经典毒株相应序列,根据Nsp2基因缺失的不同情况将PRRSV贵州省流行毒株分为3种类型,类型Ⅰ(3/33)缺失177个碱基,类型Ⅱ(29/33)缺失90个碱基,类型Ⅲ(1/33)缺失93个碱基。类型Ⅱ毒株与近年来国内广泛流行的高致病性PRRSV缺失情况一致,类型Ⅰ和Ⅲ是2种新发现的缺失型毒株,但其系统发生地位与高致病性PRRSV接近。

鸭肠炎病毒核衣壳蛋白受体的筛选与鉴定

为进一步阐明鸭肠炎病毒(DEV)致病机理,本研究通过构建DEV感染鸭肝组织cDNA文库及其文库质粒和DEV核衣壳蛋白(NP)基因"诱饵"质粒,利用酵母双杂交系统筛选DEV NP互作蛋白(受体)基因,并采用GSTpull-down试验进行验证,结果显示:所构建鸭肝组织cDNA文库的库容量为1×106 CFU,插入片段大小集中在0.5～1kb;"诱饵"质粒pGBKT7-NP无自激活现象;筛选并初步证实DEV NP在鸭肝组织细胞的受体蛋白为蛋白激酶C抑制蛋白(PKCI)。这些结果为进一步研究DEV致病机理提供新的线索。