ETS-2转录因子与启动子的+1^+40区结合是肝癌相关基因HCCS1的转录所必需

目的:阐明HCCS1基因启动子的转录调控机制。方法:引物延伸法确定HCCS1基因的转录起始点,通过限制性内切酶酶切介导对HCCS1基因全长启动子做进行性的5'缺失,用瞬时转染/双荧光素酶报告系统确定最小启动子,连接体扫描突变分析来确定启动子功能的关键顺式序列区,电泳迁移率实验并附以抗体介导超迁移实验来确定关键的反式因子。结果:HCCS1基因的转录起始点被定位于-177/-178处的C残基(ATG为+1)。最小启动子位于-60^+148区(转录起始点为+1)之中。在关键的调控区(+1^+40)所含的已知顺式序列中有2个ETS转录因子识别序列,而不是p53或NF-κB,识别序列与其相应的转录因子(ETS-2)的结合有着重要的功能内涵。结论:ETS-2转录因子与启动子的+1^+40区中相应的顺式序列结合,在肝癌相关基因HCCS1的转录活性中起着关键作用。

人蛋白激酶Bγ基因的cDNA克隆、组织表达谱分析及染色体定位

蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）是受第二信使调控的一类蛋白激酶，在细胞周期调控、葡萄糖吸收和促进细胞分化等生命活动中具有重要作用由于其活性在某些人类肿瘤组织中有明显提高，且参与了Ｒａｓ信号传导通路，提示其在某些肿瘤的形成过程中起介导作用以小鼠Ｐｋｂγ基因的核苷酸序列为探针，用同源筛选方法，从人肝ｃＤＮＡ文库中步移获得一个长１９９８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，包含一段长１４４０ ｂｐ的ＯＲＦ，它编码了 ４７９个氨基酸残基．而后用“电子步移”筛选法，将该ｃＤＮＡ的３’端延伸至２ ７８８ ｂｐ，并用 ＰＣＲ扩增法予以证实．该基因与已知的人ＰＫＢα， β的氨基酸序列的同源度分别高达８３％和７８％．表达谱分析发现该基因有两个转录本，其表达丰度基本相同，大小分别为 ６．５和８．５ ｋｂ．该基因在人脑组织中表达量最高，在另１５种组织也有不同量的表达．经过 ＲＨ制图分析，发现人ＰＫＢγ基因位于染色体１ｑ４３区带的Ｄ１Ｓ３０４和Ｄ１Ｓ２６９３位标之间，这对于候选克隆已连锁定位于该区带的前列腺癌，右心室扩张性心肌病， ＮＫ细胞缺陷和甲状旁腺功能减退性身材矮小、智力低下及癫痫发作综合征等疾病基因亦将具有重要的参考价值。