柚皮苷通过调控RAW264.7细胞功能影响MC-3T3-E1细胞的成骨分化

背景:柚皮苷作为一种中药单体,具有抗炎、促进成骨和抗癌等作用;RAW264.7巨噬细胞在骨破坏过程中发挥重要作用。有研究发现降低炎症水平可以促进MC-3T3-E1细胞的成骨分化,所以通过抑制炎症相关通路,可能对成骨细胞分化具有促进作用。目的:观察柚皮苷通过调控RAW264.7细胞功能是否会影响MC-3T3-E1细胞的成骨分化。方法:采用CCK-8法检测不同浓度柚皮苷对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的毒性。将RAW264.7细胞分成7组:即对照组(DMEM培养基)、炎症模型组(1 mg/L脂多糖)和柚皮苷组(1 mg/L脂多糖+50,100,150,200,250μmol/L柚皮苷),通过RT-PCR检测炎症因子m RNA水平变化,筛选出抗炎浓度较好的3组(150,200,250μmol/L柚皮苷组)数据用于后续实验。将RAW264.7细胞分成4组:炎症模型组、150,200,250μmol/L柚皮苷组分别取各组的上清液制备炎症上清液。最后将上述制取的炎症上清液与成骨诱导培养基1∶1比例混合共同培养MC-3T3-E1细胞并分为5组:对照组、炎症模型组、150,200,250μmol/L柚皮苷组,培养7,14 d进行成骨相关基因的检测,并进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性实验。结果与结论:①1 mg/L的脂多糖对巨噬细胞无毒性作用,200μmol/L柚皮苷对脂多糖诱导的巨噬细胞有细胞毒性作用(P<0.05);②筛选药物抗炎浓度过程中,与对照组相比柚皮苷浓度为150,200,250μmol/L时抗炎效果较好(P<0.05),此3组浓度用于后续实验;③碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比柚皮苷浓度200μmol/L时染色效果最好,且14 d比7 d染色效果更佳;④与对照组相比,200μmol/L柚皮苷组的成骨基因mRNA表达水平最接近对照组,成骨效果最差的为炎症模型(P<0.05);⑤碱性磷酸酶活性实验中,7 d时与对照组相比,柚皮苷浓度为200μmol/L时碱性磷酸酶活性最强(P<0.05);与炎症模型组相比,柚皮苷浓度为200μmol/L时最佳(P<0.05);14 d时,与对照组相比,200μmol/L组无显著差异;与炎症模型组相比,200μmol/L组活性最强;⑥以上结果证明,柚皮苷通过调节RAW264.7巨噬细胞功能可改善炎症状态下MC-3T3-E1细胞的成骨分化。

猪丹毒的流行、危害与防控

基于2006年—2017年5月国家农业部兽医公报和安徽农业大学猪病检测中心的数据统计,分析了猪丹毒在我国及安徽省的流行情况,阐述了猪丹毒的危害性,并提出相关的防控措施,特别是目前防控猪丹毒不可忽视的重要性。

安徽省猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其主要毒力基因分子特征

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)引起的一种急性、热性传染病。自2011年底以来,PRV发生了变异,传统的PRV弱毒疫苗已不能对PRV变异株提供完全保护,这给我国PR防控带来了巨大挑战。为了解安徽省PRV流行特征及其主要毒力基因遗传变异情况。利用PCR技术、细胞接种试验、电子显微镜观察、间接免疫荧光试验及兔体接种试验等方法,对安徽省临诊病例中疑似PRV感染的病猪进行病原检测及PRV分离鉴定,并通过设计6对特异性引物对PRV分离株主要毒力基因(gE、gI、TK、gB、gC、gD)进行克隆及测序分析。2016—2018年安徽省临诊病例中共分离鉴定15株PRV;PRV分离株主要毒力基因序列均与2011年后国内PRV变异株同源性较高;与2011年前国内PRV经典株序列比对,PRV分离株gE、gB、gC及gD基因存在多个位点的一致性替换、插入或缺失,且gE、gC基因多位点突变位于其重要的抗原表位区。本研究分离的15株PRV均为变异株,变异株已成为安徽省主要的流行毒株。15株PRV分离株的gI、TK基因序列较为保守,而gE、gC蛋白抗原表位区域氨基酸的突变可能导致其毒力及抗原性发生改变。部分PRV分离株与邻近地区PRV序列同源性均为100%,可能与频繁跨省调运生猪、跨区引种等原因有关。

猪链球菌2型制苗用菌株的筛选

为筛选出致病力强、抗原性优良、遗传性状相对稳定的猪链球菌2型(Streptococcus suis 2,SS2)制苗用菌株。以6株临床分离SS2强毒株为受试菌株(编号为HF1、XC1、HF2、HF3、BZ1、BB1),通过改良寇氏法测定菌株半数致死量(LD 50),利用ELISA检测新西兰大白兔和昆明鼠血清的抗体效价测定反应原性,昆明鼠及斑马鱼免疫攻毒试验测定免疫原性,同时连续传代培养受试菌株,检测第10代、20代和30代菌株的半数致死量(LD 50)、血清抗体效价和免疫保护率。结果显示,BB1、BZ1、XC1、HF1、HF2和HF3对昆明鼠的LD 50分别为3.72×10^9、3.31×10^8、1.58×10^9、1.00×10^9、5.01×10^8和3.24×10^8 CFU·mL^-1;对斑马鱼的LD 50分别为3.31×10^3、0.93×10^2、6.03×10^3、3.39×10^4、0.62×10^2和2.34×10^3 CFU·mL^-1。ELISA抗体效价测定和免疫攻毒试验结果显示,HF2、HF3和BZ1的反应原性和免疫原性均优于HF1、XC1、BB1。HF2、HF3、BZ1在第10代均出现致病力减弱,其中BZ1传至20代、30代时仍呈现下降趋势,而HF2和HF3则趋于稳定。灭活全菌体HF2、HF3的血清抗体效价均由第10代1∶51200下降至第30代的1∶12800,而BZ1则由1∶12800下降至1∶6400。HF2、HF3、BZ1对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为100%~80%、80%~60%、80%~40%和66.7%~60%、80%~60%、60%~53.3%。结果表明,HF2和HF3具备毒力强、抗原性好、遗传稳定的特性,可作为SS2制苗用菌株。

江淮地区猪链球菌和肠球菌分离株的鉴定、分型及药物敏感性分析

为了解江淮地区猪链球菌(SS)和肠球菌分离株的血清型或基因型分布特征及临床耐药性,本研究对江淮地区临床病例196株分离菌进行SS与肠球菌的鉴定,采用PCR方法进行SS及其1、2、7、9血清型和mrp、ef、sly毒力基因型鉴定;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析SS和肠球菌基因型;K-B法测定其药物敏感性。结果显示,在196株分离菌中,鉴定出112株SS,40株肠球菌。血清型2型SS 44株(39.3%)为优势血清型,ef^-/mrp^-/sly^-型SS 36株(32.1%)为优势毒力基因型,Ps28 18株(16.1%)和Ps27 14株(12.5%)为优势PFGE基因型。肠球菌中屎肠球菌21株(52.5%)为优势菌,Pe12 9株(22.5%)和Pe7 7株(17.5%)为肠球菌优势PFGE基因型。SS和肠球菌对20种药物均表现出不同程度的耐药,耐8种以上药物的菌株数分别占85.7%(96/112)和95%(38/40)。结果表明,江淮地区SS和肠球菌种型复杂,已经成为引起猪细菌性疾病的重要致病菌。分离菌株PFGE基因型均呈多态性,在传播过程中可能存在遗传变异。SS PFGE基因型与血清型、毒力基因型不呈现相关性。菌株耐药现象严重,多重耐药普遍,且耐药谱越来越广。本研究为江淮地区SS和肠球菌的分子流行病学研究及相关疫病防控提供科学依据。

猪链球菌2型灭活疫苗对小鼠的免疫效果评价

在前期筛选出2株毒力强、抗原性好、遗传稳定的猪链球菌2型(SS2)疫苗菌株(HF2、HF3株)并分别制成灭活疫苗(采用ISA 201 VG矿物油佐剂)的基础上,进一步与SS2商品化灭活疫苗(HA9801株,铝胶佐剂)同步免疫小鼠,利用间接ELISA、流式细胞术、免疫攻毒试验、细菌定植试验和病理组织学观察等方法测定小鼠血清中IgG抗体效价,细胞因子含量(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1),外周血中CD4^+/CD3^+、CD8^+/CD3^+ T细胞亚群含量,攻毒保护率,组织荷菌数和病理组织变化等指标。结果显示,二免7 d后,HF2、HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组的血清IgG抗体效价分别为1∶25 600、1∶12 800、1∶25 600;HF2灭活疫苗组的IL-4、IL-10含量显著高于HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组,IFN-γ、TNF-β含量显著高于HF3灭活疫苗组,但MCP-1含量显著低于HF3灭活疫苗组;HF2和HF3灭活疫苗组的CD4^+/CD3^+ T细胞比率均显著低于HA9801商品化灭活疫苗组,但CD8^+/CD3^+ T细胞比率差异不显著;HF2、HF3灭活疫苗和HA9801商品化灭活疫苗对小鼠的攻毒保护率均为100%;HF2灭活疫苗组小鼠的肺、脾脏组织荷菌数显著低于HF3灭活疫苗组;HF2灭活疫苗组小鼠的肺、肾、脾脏病理变化较HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组轻微。综合结果表明,由SS2(HF2株)制备的ISA 201 VG佐剂灭活疫苗免疫小鼠后不仅可产生较强的免疫应答,还可完全抵抗强毒株的攻击。

江苏省人力资源管理专业人才需求分析

在经济发展的转型时期如江苏这种经济强省,人力资源流动频繁,则对人力资源管理的专业人才有了更多的需求。本文以2008—2016年江苏省数据为本,从经济发展水平和行业发展水平等方面选取了四个解释变量建立多元回归模型进行分析,分析影响该专业人才需求的因素。经过研究发现,区域经济总量、行业规模、工资水平对该专业人才的需求有着重大的影响。因此,促进人力资源管理人才培养,加强人才资源的流通,提高人力资源管理的投入,对区域经济发展有着相当的促进作用。

一例猪伪狂犬病毒与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断

为了对2017年3月份安徽省六安地区某猪场40~50日龄发病保育猪所患疾病进行诊断,试验采用病史调查、临床观察、病理剖检、细菌分离鉴定及PCR/RT-PCR检测的方法,对送检病猪进行诊断。结果表明:从病猪肺脏组织分离到一株革兰氏阴性杆菌,经PCR鉴定为多杀性巴氏杆菌,同时病原检测伪狂犬病毒也为阳性。说明该病例为猪伪狂犬病毒与多杀性巴氏杆菌的混合感染。

猪链球菌2型溶血素基因的表达及其免疫原性

【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型(SS2)危害最为严重。研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素(Suilysin,SLY)可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势。【目的】获得SS2安徽强毒株(AH10-8株)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析。【方法】根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有Bam HI、XhoI酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率。【结果】重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应。SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:6 400、1:204 800 (以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原)和1:102 400、1:51 200 (以SLY为包被抗原);SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40%、80%和84%、92%;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。【结论】成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分。