多聚半乳糖醛酸内切酶的固定化及其性质研究

棉花枯萎病菌多聚半乳糖醛酸内切酶在pH大于7时不稳定,故对它进行多种化学修饰而又不影响其活性,必须在pHd小于7的体系中进行。本文报道将PGAUase在还原剂存在下,与稀酸处理的Sepharose 4B交联,获得较高活力的固定化酶。固定化酶催化动力学表明,最适pH为4,4,最适温度为55℃,在pH1至8.0范围内稳定。和溶液酶比较,对热稳定性提高,但对碱稳定性下降。以多聚半乳糖醛酸为底物,Km为0.27mmol/L,Vmax为66.67nmol/L·min,均大于溶液酶(Km=0.07mmol/L,Vmax=28.00nmol/L·min)。在pH4.8,30℃,聚半乳糖醛酸在固相酶的柱中循环水解不同的时间降解产物经圆盘电泳和等电聚焦测定,得到不同大小的寡糖片段混合物,证明固相酶和溶液酶的作用方式相同,同时使以酶解法制备一定大小的有生物活性的寡糖分子成为可能。

寡聚半乳糖醛酸对2,4-D引起的黄瓜下胚轴伸长的抑制(简报)

10多年来的研究认为寡聚糖作为信号分子激发了植物的抗病基因的表达,如能调节生产植物蛋白酶抑制物和植保素,触发过敏反应。近期研究还发现寡聚糖具有调节植物生长、发育的功能。

台湾大刮机器人教育风 岛内中低层劳工担心饭碗不保

通过比赛看实力今年7月20日至24日,在巴西举办了一场2014世界杯机器人足球赛（Robo Cup）,上场参赛的全部是由许多快速运动的机器人组成的球队,比赛的技能也不仅是看谁进球多,而是比谁设计的自主运动的机器人头脑更发达、智力更高、更擅长多人合作、人工智能实时推理、路径规划,以及集成传感器信息融合、策略获取等多项机器人学科技水平的高低。这是迄今全球最具规模的国际机器人赛事,今年共有500多支队伍参赛。

灰飞虱鞘氨醇激酶时空表达分析及其对杀虫剂胁迫的响应

【目的】明确灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallén)鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,SK)的分子特征,研究SK在携带水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)与健康灰飞虱两个种群的时空表达及其对杀虫剂胁迫的响应。【方法】利用PCR技术克隆灰飞虱SK(LsSK)基因序列;使用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析LsSK在带毒种群与健康种群灰飞虱1—5龄若虫及成虫期的表达差异,并检测该基因在雌雄虫头、唾液腺、中肠、马氏管、卵巢和精巢等组织中相对表达量;采用手动微量点滴仪将3种杀虫剂(吡虫啉、噻嗪酮和溴氰菊酯)点滴于灰飞虱4龄若虫中胸背板,确定3种杀虫剂的半致死浓度(LC_50);根据半致死浓度的3种杀虫剂处理试虫后检测LsSK的表达动态;采用注射双链RNA(dsRNA)的方法沉默带毒种群和健康种群4龄若虫体内LsSK后,用半致死浓度的3种杀虫剂处理试虫并分析死亡率。【结果】克隆得到一段长度为1 282 bp的LsSK基因片段(Gen Bank登录号:KT989975)。氨基酸系统进化树显示LsSK与其他半翅目昆虫SK聚在同一支。LsSK氨基酸序列包含SK酶的4个保守区域C1—C4,其中SK激酶的活性位点——DAG活性区域位于C1—C3区域。q RT-PCR结果显示LsSK在带毒种群4龄若虫中表达量最高,3龄次之;健康种群5龄若虫表达量最高,1、4龄次之。且LsSK在带毒种群3、4龄表达量显著高于健康种群同时期若虫(P<0.05);带毒成虫LsSK表达量显著高于健康成虫(P<0.05)。LsSK在带毒雄成虫各个组织中的表达量均显著高于同种群雌成虫和健康雌雄成虫的各相应组织,且在唾液腺和马氏管的表达量最高,头部次之。用半致死浓度的3种杀虫剂(吡虫啉LC_50为6.5 ng·μL^(-1),噻嗪酮为500 ng·μL^(-1),溴氰菊酯为37.5 ng·μL^(-1))处理带毒和健康种群的4龄若虫后,试虫LsSK含量变化与响应速度均不同。噻嗪酮处理后LsSK水平升高且响应最为迅速,溴氰菊酯处理后LsSK表达水平无变化(P>0.05)。用3种杀虫剂处理带毒和健康试虫,其死亡率分析结果表明,两种群注射dsSK组3种杀虫剂处理后死亡率均显著高于两种群注射dsGFP组和不注射组。【结论】克隆了LsSK基因片段且其在带毒灰飞虱4龄若虫中表达量最高。沉默LsSK后,带毒和健康种群灰飞虱在杀虫剂处理后的死亡率均显著上升,表明SK基因有利于灰飞虱抵抗杀虫剂胁迫。

水稻丝氨酸棕榈酰转移酶的分子克隆、特征及其与褐飞虱抗性相关的基因表达（英文）

为研究鞘脂质和鞘脂质代谢前体长链基团(long-chain bases,LCBs)对胁迫应答的调控机制,对编码水稻丝氨酸棕榈酰转移酶(serine palmitoyltransferase,SPT)的LCB基因进行克隆。通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增到3条LCB1和3条LCB2基因全长,蛋白质大小为481～497个氨基酸。生物信息学分析表明,LCB蛋白序列在细菌到人等多个物种中具有高度保守性。在褐飞虱(brown planthopper,BPH)的侵害作用下,水稻Os LCB2a1基因表达量上升。与其他水稻品种相比,抗性品种"Mudgo"和"IR64"中的基因表达量更高。基因表达量与褐飞虱危害指数呈负相关。在不同水稻品种的不同组织中,"IR64"叶片中的基因表达量显著升高,而"态平籼"叶鞘中的基因表达量显著升高。Os LCB2a1基因在抗褐飞虱水稻品种的最高分蘖期呈高表达,表明该基因可能在水稻营养期发挥作用。

人糖蛋白在哺乳动物重组细胞中的表达N-和O-连接的糖蛋白的基因工程

利用重组DNA技术,外源基因在不同的宿主系统中表达产生大量有医疗价值的人蛋白质已成为可能,大多数有临床意义的蛋白是糖蛋白,所以,它们的生物工程制备需要哺乳动物细胞为宿主,以产生具有正确翻译后加工的蛋白质。蛋白质上的糖的作用可从以下几方面加以讨论,其中包括:①糖对生物活性和在体内半寿期的影响;