新形势背景下山东省CT设备合理配置规划研究

目的:探究分析新形势背景下山东省各地市大型影像设备配置使用现状,针对64排及以上CT被调出管理品目,预测分析其配置规划。方法:采用德尔菲专家咨询法确定调研问卷,通过山东省大型医用设备配置管理系统进行问卷定向发放,在山东省内进行大型医用设备摸底调研,基于卫生经济学理论对山东省各地市医疗机构现有CT设备配置及使用的经济性和检查的有效性进行分析,采用大型医用设备配置预测模型对各地市的配置规划进行预测。结果:山东省各地市医疗机构现有CT设备717台,其中三级医院427台,二级医院264台,其他医疗机构26台。山东省各地市医疗机构CT设备存在分布地域不均衡现象,人均台数最多的为济南(0.12台/万人),最少为菏泽(0.05台/万人);设备使用中患者平均等待时间最长为淄博(1.26 d),最短为东营(0.13 d);CT检查结果阳性病例数年均值为97.08万人次,年检查结果阳性病例人数最多的为济南(377.02万人次),阳性检查率为84.90%;CT日平均开机时间为17.22 h,日平均开机时间最长的为聊城(19.66 h),最短为青岛(14.93h)。基于预测模型需配置数量前3位城市分别为济南(169台)、临沂(151台)和青岛(136台)。结论:基于卫生经济学理论框架结合大型医用设备配置预测模型对新形势背景下山东省各地市的大型医用设备配置数量进行预测,能够为各医疗机构科学配置大型医疗设备和政府机构监管方案制定提供参考依据。

关于医学实验动物学教学改革趋势的几点思考

鉴于医学实验动物学教学的重要性，笔者依据教学组以往的教学经验并结合国际实验动物学发展趋势．从教学内容、教学方式、教学方法等方面对实验动物学教学改革趋势进行了思考，以期为我们以后的教学实践提供指导。

结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究

目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,抗酸染色观察胞内细菌形态,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总蛋白,Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3表达水平的变化。结果:雷帕霉素诱导巨噬细胞形成自噬后感染结核分枝杆菌可使胞内细菌局限化,加入Hsp16.3蛋白可明显抑制了自噬体的形成,影响了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的生存,显著增加了细菌的菌落形成单位,降低了自噬相关蛋白LC3的表达(P<0.05)。结论:Hsp16.3蛋白可能通过调节Atg8的表达水平抑制自噬体的形成。

近红外荧光染料IR-783介导的肿瘤成像

目的评估近红外荧光染料IR-783在犬自发性肿瘤中的特异性成像。方法将IR-783染料(5μmol/kg)腹腔注射荷瘤裸鼠,通过活体成像仪检测IR-783的代谢周期,在此基础上,将IR-783染料(1.5μmol/kg)通过后肢静脉注射入自发肿瘤犬体内,5 d后手术切除肿瘤组织,分别进行荧光成像、组织切片HE染色、冰冻切片荧光观察。结果 IR-783染料注射荷瘤裸鼠后可以在肿瘤部位检测到特异性荧光,连续观察8 d,仍有较强的荧光。IR-783注射自发肿瘤犬5 d后,可在肿瘤组织中检测到特异性荧光。结论近红外荧光染料IR-783能够被肿瘤组织特异性吸收,可用于犬自发性肿瘤的特异性诊断,具有重要的临床应用前景。

结核分枝杆菌肝素结合血凝素与人IL12融合基因重组耻垢分枝杆菌的构建及鉴定

目的构建表达肝素结合血凝素与人IL12融合基因的重组耻垢分枝杆菌并对其进行鉴定。方法通过RT-PCR从人淋巴细胞获得hIL12基因模板,采用PCR技术克隆hIL12的P40和P35两个亚基及结核分枝杆菌的HBHA基因,通过酶切鉴定及DNA测序证实连接的基因片段均正确后,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pSMT3-HBHA-hIL12,并用电穿孔法将重组质粒转到耻垢分枝杆菌中。分别用HBHA单克隆抗体和hIL12多克隆抗体检测HBHA和hIL12蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达,并测定重组耻垢分枝杆菌生长状态的改变。结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,通过HBHA单抗和hIL12多抗进行免疫荧光法检测证实HBHA和hIL12均有表达,并且重组的耻垢分枝杆菌的生长速度比正常组有较大的提高。结论成功构建了表达结核分枝杆菌HBHA基因和人IL12的重组耻垢分枝杆菌,为构建一种结核病的候选疫苗提供了实验基础。

表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用

评价表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果。结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠4周后,用表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗,检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化。重组耻垢分枝杆菌可有效控制感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量,减轻病理损伤。但在降低肺部荷菌量方面不如化疗药物。表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌可有效控制结核分枝杆菌在小鼠体内的增殖,可能成为联合化疗药物控制结核病的有效候选疫苗。

结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响

目的研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western blot方法检测自噬相关基因(atg)分子水平和蛋白表达水平。结果ESAT6-CFP10融合蛋白可抑制小鼠巨噬细胞自噬体的形成,并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显。结论MTB ESAT6-CFP10融合蛋白通过调控atg分子表达水平影响小鼠巨噬细胞自噬功能。

裸鼠荷瘤实验中常见问题的解析和总结

目的探讨裸鼠荷瘤过程中的出现的常见问题,提高裸鼠荷瘤的成功率。方法通过分析实验过程中影响裸鼠荷瘤的各种因素,寻求裸鼠荷瘤常见问题的解决方案。结果总结了在裸鼠荷瘤实验中的各种影响因素,并提出了合理的建议。结论裸鼠肿瘤模型的制备是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础,本文为制备良好的裸小鼠肿瘤模型提供合理的建议。

大、小鼠微生物检测质量控制探讨

实验动物质量直接影响科研数据的准确性,通过定期微生物检测,可对实验动物质量进行控制,因此对检测结果进行质量控制是对检测工作进行日常管理和监督的有效和必要的手段。实验室通过总结近年检测工作经验,对微生物检测质量控制工作进行探讨,为实验动物质量检测提供相关资料。

结核分枝杆菌Hsp16.3单克隆抗体的制备及其特性鉴定

制备抗结核分枝杆菌Hsp16.3的单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。将含目的基因的表达载体pProEXHTb-Hsp16.3,通过E.coli DH5α诱导表达,获得含有6×His的Hsp16.3蛋白,采用Ni-NTA纯化试剂盒进行目的蛋白的纯化,并用透析方法进行蛋白复性。将复性的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株。将获得的Hsp16.3阳性杂交瘤细胞株分别利用间接ELISA法和Western blot方法进行效价、相对亲和力及特异性的测定。获得了三株Hsp16.3的单克隆抗体,分别命名为3H6F9、1D5E1和4H8G6,其效价分别为1:1×107、1:1×106和1:1×106,相对亲和力分别为0.000 1 mg/mL、0.001 mg/mL和0.001 mg/mL,并且无交叉反应性。所获得的结核分枝杆菌Hsp16.3的单克隆抗体效价高、特异性强,为进一步研究Hsp16.3在结核分枝杆菌潜伏感染中的作用提供了有效的工具。

表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力

目的:测定表达肝素结合血凝素(HBHA)和人白细胞介素12(hIL-12)融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌在小鼠体内诱导产生的免疫应答及对结核分枝杆菌感染的保护作用。方法:将表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌采用同源加强免疫的方法免疫小鼠,检测小鼠外周血中IFN-γ、IL-2和IL-12的表达水平;用结核分枝杆菌感染免疫小鼠,检测小鼠肺部荷菌量和组织病理变化。结果:表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌诱导小鼠产生以IFN-γ、IL-2分泌量增加为主的Th1型免疫应答,并能有效减少感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量和病理损伤。结论:表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠可诱导产生与卡介苗相当的保护作用,可能成为控制结核病的有效疫苗。

结核分枝杆菌RpfA蛋白的表达、纯化与鉴定

目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)RpfA的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达、纯化和鉴定。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出编码RpfA蛋白的Rv0867c基因,通过克隆载体pMD18-T构建质粒载体pMD18-T-Rv0867c。经酶切和DNA序列测定证实正确后,将Rv0867c基因克隆到pET32a(+)载体并在大肠杆菌BL21中诱导表,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化。结果双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致。Western-blot结果显示,在相对分子量约102 kDa处有分别与Anti-His单抗、Rpf结构域单抗和TB病人血清特异性结合带。结论成功表达、鉴定和纯化了RpfA蛋白。

ESAT6和CFP10融合蛋白抑制巨噬细胞自噬体形成的实验研究

目的观察ESAT6和CFP10融合蛋白对感染MTB的巨噬细胞自噬体形成的抑制作用。方法雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞自噬体形成后,用MTB毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用25μg/mL的ESAT6-CFP10融合蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总RNA和蛋白,以RT-PCR和免疫印迹方法检测自噬相关基因(atg)表达水平的变化。结果 ESAT6-CFP10融合蛋白后可抑制巨噬细胞中自噬体的形成,显著提高CFU指数(P<0.05),并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显(P<0.05)。结论 ESAT6和CFP10融合蛋白可通过调控atg表达水平影响巨噬细胞自噬功能。

结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10的表达、纯化和鉴定

克隆结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出CFP10基因片段,克隆至pMD18-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pGEX-4T-1并在大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白。成功克隆了CFP10基因,并对其在E.coli中进行了表达,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。通过GST纯化系统获得36 kD纯化蛋白,与文献报道相符,该蛋白可与CFP10 mAb特异结合,并且同时与活动期结核病人血清发生反应。成功获得了纯化的CFP10蛋白,为进一步研究CFP10蛋白的致病机理提供了实验依据。

小鼠结核分枝杆菌感染模型用于评价重组HBHA疫苗免疫效果的实验研究

目的通过复制小鼠结核病模型评价重组HBHA疫苗的免疫效果。方法将重组肝素结合血凝素(HBHA)疫苗接种BALB/c小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答水平,并以MTB H37Rv毒株攻击免疫小鼠,研究重组疫苗诱导的保护力。结果重组HBHA免疫BALB/c小鼠后可诱发细胞毒作用,将体内MTB裂解。重组疫苗不仅能刺激CD4+T,CD8+T增殖、活化,还可诱导脾细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子。H37Rv毒株攻击后,被免疫小鼠的组织病理学症状减轻。结论本研究通过检测小鼠体内细胞免疫应答和肺脏组织病理学改变等指标,客观的反映了重组疫苗免疫小鼠结核模型的保护效果。

胰岛素抵抗:结核感染新的标志物

当前控制结核病流行的措施主要集中于活动期结核患者的快速诊断及治疗方面。虽然这一策略取得了巨大成功,但是肺结核仍然是威胁全球公共卫生安全的一大隐患。这就要求我们尽可能地去寻找引发结核感染的风险因素及早期标志物,以便早期预防、早期诊断并治疗。胰岛素不仅在调节细胞代谢方面发挥关键作用,并且能够影响其吞噬结核分枝杆菌的能力。胰岛素抵抗伴发于诸多疾病进程中,但是至今还没有评估胰岛素抵抗与结核感染风险关系的研究。我们认为,胰岛素抵抗可以增加结核感染风险,并且可以作为评判其发展为活动期结核的一种标志物。

朱鹮低致病性禽流感病毒的分离与鉴定

为了掌握朱鹮禽流感病毒流行情况,利用鸡胚分离方法从病死朱鹮脑组织标本中分离出禽流感病毒毒株,并将所分离的病毒进行血凝试验、血凝抑制试验、鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)、半数致死量(LD50)及1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)试验。结果表明,所分离的病毒均能够凝集鸡、肉鸭、绵羊、山羊、猪、人、兔等的红细胞,且这种血凝性可被H9型标准抗体血清所抑制,所分离毒株的MDT为48 h,LD50指数为50%,ICPI为1.544。以上结果表明所分离的病毒为低致病力禽流感毒株。

GST融合蛋白包涵体纯化方法的探索

探讨GST融合蛋白包涵体纯化的方法。将表达Rpfd与GST融合蛋白的质粒PGEX-4T1-Rpfd转入大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达目的蛋白。通过比较盐酸胍裂解和Novagen蛋白折叠试剂盒预处理,及调整不同类型蛋白复性液,观察上述因素对GST融合蛋白包涵体纯化效果的影响。结果:超声后先去除可溶性表达,再使用20 mmol Tris-HCl和0.1 mmol DTT进行复性,可获得高效纯化,具有活性的GST融合蛋白。对于GST包涵体蛋白进行纯化时,去除可溶性表达蛋白,改变蛋白复性液的成分,可有效提高蛋白纯化效果。

山东省脑卒中救治医疗资源配置现状及需求研究

目的:调研山东省脑卒中救治医疗资源配置情况,为脑卒中防治网络构建与规划提供数据资料。方法:使用德菲尔法进行问卷设计,通过问卷网系统对山东省内二级甲等医院和三级医院(三级甲等,三级乙等)的脑卒中救治相关专业人员数量和脑卒中诊断相关影像设备配置情况等进行调研分析。结果:共回收有效问卷101份,>50.00%的医院神经介入专业医师数量<5名;二级甲等医院与三级医院在神经内科专业医师、神经内科专业护士、神经外科专业医师、神经介入专业医师、急诊科医师和急诊科护士的人员配置上差异有统计学意义(χ^(2)=23.037,χ^(2)=20.572,χ^(2)=36.022,χ^(2)=16.128,χ^(2)=24.814,χ^(2)=17.726;P<0.05);二级甲等医院与三级医院医疗设备配置基本齐全,在CT、磁共振成像(MRI)和数字减影血管造影(DSA)配置中差距较为明显,差异有统计学意义(χ^(2)=37.631,χ^(2)=37.444,χ^(2)=34.874;P<0.05);CT及MRI等大型影像设备进口配置数量明显多于国产数量。结论:脑卒中医疗资源存在专业诊疗团队人员不足和医疗设备资源配置不均衡现象,需通过宏观调控方法进行协调。

山东省MRI配置的经济性与有效性评估研究

目的利用卫生技术评估技术分析山东省MRI配置的经济性与有效性,为山东省“十四五”期间MRI配置方案优化提供理论参考意见。方法通过德尔菲专家咨询法设计调研问卷,然后通过山东省大型医用设备配置管理系统,对山东省内16个地市的二甲及以上相关医院MRI的单台采购价、日开机时间、患者等待时间、单台维修成本、单台年保费用以及单台年均利润总额等参数进行调研分析,最后通过Excel 2019对MRI的分布情况、经济性、有效性等参数进行描述性统计分析。结果本研究共调研680台MRI,多数分布在三甲医院。通过分析发现,山东省内MRI明显存在分布地域不均衡现象,MRI人均台数最多的为济南,最少的为菏泽;患者平均等待时间最长的为青岛1.65 d,最短的为日照0.46 d;各地市MRI单台年均投资收益率为158.01%,最高的为滨州216.97%;年均检查结果阳性病例数为34.15万人次,最多的为济南80.89万人次;日平均开机时间为12.25 h,最长的为东营14.33 h;MRI日平均检查病例数为27.79例,日最大检查病例数最高的为济宁50.58例。结论本研究可为管理部门从总体上对医疗设备配置进行宏观调控提供参考借鉴,为医疗设备的合理配置研究提供相关参考数据,以及为区域内医疗资源的均衡发展发挥积极作用。