胶体金法结合涂片形态学特征快速鉴别结核分枝杆菌复合群的应用评价

目的探讨结核分枝杆菌抗原胶体金法结合涂片形态学特征鉴别结核分枝杆菌复合群的应用价值。方法采用涂片形态学特征和结核分枝杆菌抗原胶体金法对853株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并与传统菌种鉴定结果进行比较。结果涂片法鉴别结核分枝杆菌的敏感度为98.4%(750/762),特异度为96.7%(88/91);胶体金试验鉴别结核分枝杆菌的敏感度为99.0%(754/762),特异度为98.9%(90/91);两种方法均为阳性,可报告菌株中含有结核分枝杆菌复合群(MTC),其阳性预测值为100.0%(741/741);两种方法均为阴性,可报告非结核分枝杆菌(NTM),其阴性预测值为100.0%(87/87)。结论结合涂片形态和结核分枝杆菌抗原胶体金两种方法鉴别结核分枝杆菌可以提高检测的准确性,是一种快速、简便,适于各级实验室使用的方法。

表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术在结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌差异蛋白分析中的应用

目的对比分析结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白、分泌蛋白指纹图谱,评价表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在结核病快速诊断中的价值。方法结核分枝杆菌和胞内分枝杆菌标准菌株经BACTEC960仪培养30d,灭活菌株,离心沉淀物提取菌体蛋白,上清液提取分泌蛋白。利用SELDI-TOF-MS进行蛋白质/多肽谱分析。结果结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白指纹图谱存在差异,有33个差异蛋白峰;结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌分泌蛋白指纹图谱存在差异,有51个差异蛋白峰;结核分枝杆菌有其特征性蛋白峰。结论结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白、分泌蛋白指纹图谱有明显的差异蛋白峰,应用SELDI-TOF-MS技术可以早期、快速、简便地诊断结核病。

TB-RNA、TB-DNA、基因芯片技术检测BALF对儿童涂阴肺结核的早期诊断价值

目的评估结核菌核糖核酸(tuberculosis bacterium ribonucleic acid,TB-RNA)、结核菌脱氧核糖核酸(tuberculosis bacterium deoxyribonucleic acid,TB-DNA)、基因芯片技术检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)对儿童涂阴肺结核的早期诊断价值。方法收集2019年1月至2022年8月于福建省福州肺科医院住院的227例0~17岁疑似涂阴肺结核患儿的BALF,进行TB-RNA、TB-DNA、基因芯片检测,分析三种检测方法的诊断效能。结果诊断为肺结核168例,非肺结核59例。以临床综合诊断(composite reference standard,CRS)为金标准,三种方法单独检测及联合检测BALF的敏感度分别为40.48%、39.29%、38.69%、56.55%,特异度分别为98.31%、96.61%、100%、94.92%,曲线下面积(Area under the curve,AUC)分别为0.694、0.679、0.693、0.757,单独检测的敏感度与培养法(44.64%)比较,差异均无统计学意义(χ^(2)分别为1.24,1.73,2.53,P均>0.05),联合检测的敏感度高于培养法及单独检测,差异均有统计学意义(χ^(2)分别为9.52,25.04,27.03,28.03,P均<0.05);三种方法检测的敏感度BALF明显高于痰,差异均有统计学意义(χ^(2)分别为41.33,24.92,28.17,P均<0.05)。以培养结果阳性为金标准,BALF进行三种方法单独检测及联合检测的敏感度分别为76.00%、69.33%、72%、85.33%,特异度分别为98.31%、96.61%、100%、94.92%,阳性预测值(Positive predictive value,PPV)分别为98.28%、96.30%、100%、95.52%,阴性预测值(Negative predictive value,NPV)分别为76.32%、71.25%、73.75%、83.58%,Kappa值分别为0.72、0.64、0.69、0.79,AUC分别为0.872、0.830、0.860、0.901。结论TB-RNA、TB-DNA、基因芯片检测BALF可快速诊断涂阴肺结核,联合检测可以提高儿童涂阴肺结核的病原学诊断率。

实时荧光定量聚合酶链反应在肺结核诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在肺结核诊断中的应用价值。方法应用FQ-PCR对临床诊断肺结核及其他肺部疾病患者的临床标本进行结核分枝杆菌DNA定量检测,同时与涂片抗酸染色、BACTEC 960培养法作比对。结果 189例临床诊断肺结核患者FQ-PCR检测123例阳性,提示敏感度为65.1%(123/189),而涂片抗酸染色、BACTEC 960培养法分别为40.2%(76/189)、63.5%(120/189)。94例其他肺部疾病患者及20例健康对照者FQ-PCR检测均为阴性,特异度为100.0%。结论 FQ-PCR敏感度和特异度均高,检测过程简单、易标准化、全过程仅需4～5h,可用于结核病的快速诊断。

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究

目的探讨结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)在临床快速诊断结核病中的应用价值。方法利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率。同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对。结果164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为94.5%(155/164),显著高于其他方法。60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8%(75/80)。结论T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别。

SELDI-TOF-MS分析对结核分枝杆菌诊断价值的研究

目的分析对比结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)分泌蛋白指纹图谱,寻找检测MTB的蛋白标志物。方法经BACTEC 960仪培养出结核分枝杆菌标准菌株,提取分泌蛋白,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测MTB蛋白表达,和NTM标准株、临床MTB及其他肺部炎症细菌蛋白指纹图谱进行对比分析。结果分枝杆菌分泌蛋白共检出83个蛋白峰,3145、3895m/z在所有分枝杆菌均高表达,其他肺部炎症分离株未见表达。NTM与MTB标准株比较,有51个蛋白峰分泌蛋白存在差异,MTB有5个特征性蛋白峰(2930、3878、4103、4902、5804m/z)。结论分枝杆菌有其特征性分泌蛋白,有助于分枝杆菌快速鉴定。应用SELDI-TOF-MS技术对BACTEC 960阳性培养液的上清液蛋白组成进行分析,有助于MTB的快速鉴别。