茶尺蠖羧酸酯酶EoCarE592的重组表达及其对农药的降解能力测定

【目的】原核表达茶尺蠖Ectropis obliqua羧酸酯酶(carboxlesterase,CarE)基因EoCarE592,并探讨重组蛋白对农药的降解能力。【方法】构建原核表达载体pET-32a-EoCarE592,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21异源表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,并对包涵体蛋白变复性;通过固蓝B盐比色法的含量标准曲线测定重组EoCarE592酶活性以及温度、pH和金属离子对酶活性的影响;利用气相色谱检测EoCarE592在30℃pH 7.0和0,4,8,12,16,20及24 h时对200 mg/L的高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、甲基对硫磷(methyl-parathion)和异丙威(isoprocarb)降解能力。【结果】通过大肠杆菌异源表达得到重组EoCarE592包涵体蛋白,经尿素变复性后得到酶活性29.8 U的重组EoCarE592,其最适温度30℃左右、最适pH 7.0~8.0左右、Mg^(2+)和K^(+)对酶活有促进作用;重组EoCarE592能在30℃,pH 7.0,24 h内对初始浓度为200 mg/L的高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威降解率分别为81.30%,83.94%和79.83%。【结论】羧酸酯酶EoCarE592能降解高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威,可能参与茶尺蠖的解毒过程。本研究为环境和果蔬中农药残留的降解奠定了基础。

昆虫抗冻蛋白的分离纯化及特性分析

昆虫抗冻蛋白具有很高的热滞活性,可保护机体免受结冰引起的伤害。昆虫抗冻蛋白的分离纯化多采用凝胶过滤层析、离子交换层析及HPLC等技术,已用于鱼类抗冻蛋白纯化的冰亲和纯化(IAP)技术也可考虑应用于昆虫抗冻蛋白的分离提纯。昆虫抗冻蛋白具有高活性,规则的一级结构及类似的冰晶结合表面等特性。

择期手术病员的择优心理护理

通过对1680例骨折择期手术病员的择优心理护理,取得了较好的效果。提示手术病员的择优心理普遍存在,做好耐心细致的心理护理是解决问题的关键,提倡廉洁行医的风范,以树立本科良好的总体形象也是必不可少的。

对抗牵引复位架治疗不稳定性胫腓骨骨折52例围术期护理

通过对52例不稳定性胫腓骨骨折患者使用我院自行设计制造的对抗牵引复位架进行治疗的护理观察和护理配合,完成了护理工作并取得了较好的效果。我们的体会是:1、心理护理是保证治疗成功的必要条件;2、术前良好的配合能使手术顺利完成;3、术后细致的护理观察能减少和消除并发症,为骨折早期愈合提供有利帮助。

饲用纤维素酶活力测定方法的改进

探讨和分析了影响3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定饲用纤维素酶活力的几个因素,研究表明,测定条件对测定结果影响较大,因此进行纤维素酶活力测定时,必需规定测试条件.通过对饲用纤维素酶的实验表明:在40℃,pH4.8,反应时间30min,底物为0.8%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)以DNS法测定酶活较为合适,同时待测酶液的浸提时间为室温下1h,空白对照样的酶液灭活时间应大于15min.

利用毕赤酵母表达外源蛋白的研究

综述了毕赤酵母表达系统的优越性、表达受体菌和表达载体、酵母转化、分泌信号、翻译后加工和修饰等特点 ,以及广泛的医用、商业用途 ,在理论研究特别是蛋白质结构与功能方面的潜在应用价值。

昆虫抗冻蛋白的研究

抗冻蛋白是具有热滞活性 ,能结合并抑制冰晶生长和抑制冰的重结晶的一类蛋白质。近几年来 ,昆虫抗冻蛋白的研究取得了较快的发展 ,本文通过分析昆虫抗冻蛋白的结构特点、抗冻活性、作用机制 ,并讨论了抗冻蛋白在食品工业、医学、基因工程方面的应用。结果表明 ,昆虫抗冻蛋白虽然结构呈多样性 ,但有很多关键的残基具有保守性 ,对维持抗冻蛋白结构和功能的完整性发挥着重要的作用 ;抗冻蛋白是由多基因家簇编码的。其作用机制主要是吸附 -抑制机制 ,抗冻蛋白依靠氢键吸附到冰晶格 ,抑制冰晶生长 ;

家蚕抗菌肽的特性与应用

家蚕抗菌肽是在抗菌、抗病毒和抗肿瘤方面具有重要的潜在应用价值的活性肽。家蚕抗菌肽抗菌谱广 ,由于抗菌肽具有普通抗生素所不具有的一系列优点 ,其研究已经成热点。该文综述了家蚕抗菌肽理化性质、结构与功能、作用机理以及应用前景。

黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础。根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,同时检测生物活性。结果表明我们成功构建了重组质粒pET-30a-TmAMP3,大部分目的蛋白呈可溶性分泌表达。经Ni2+亲和层析,获得较纯融合蛋白HIS-TmAMP3,诱导表达的融合蛋白使BL21转化菌生长受到一定程度的抑制。融合蛋白在100℃煮沸10h、与pH2～12的缓冲液混匀后,依然保持稳定的抗菌活性,具有较强的稳定性。同时检测了融合蛋白对5种菌株的最小抑菌浓度(minimun inhibitory concentration,MIC)。本研究为具有稳定活性抗菌肽进行大规模生产发酵提供了理论基础。

新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中表达及活性研究

目的:在毕赤酵母中表达新疆家蚕抗菌肽基因(Cecropin-XJ)并检测其活性。方法:根据作者实验室已克隆获得的新疆家蚕抗菌肽Cecropin-XJ基因设计引物,通过PCR方法扩增Cecropin-XJ,将PCR产物和表达载体pPIC9K用EcoRⅠ及NotⅠ双酶切,构建重组表达质粒pPIC9K-Cecropin-XJ,酶切及测序正确后,电转化到毕赤酵母GS115,对分泌表达的重组蛋白进行活性检测。结果:PCR扩增获得192 bp Cecropin-XJ,成功构建pPIC9K-Cecropin-XJ,优化诱导条件证明在pH 6的BMMY培养液中,0.5%甲醇诱导约48h后,获得的表达产物活性较强,对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抗菌活性,在100℃条件下,其活性可维持100min以上。结论:新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中分泌表达,为大规模发酵生产奠定了基础。

新疆家蚕抗菌肽基因突变及其抗菌活性的研究

为了改变抗菌肽的结构参数,探讨其结构与活性的关系,采用PCR扩增和人工合成基因的方法,对新疆家蚕抗菌肽基因进行改造及原核表达蛋白的抑菌活性研究。结果表明,α-螺旋、两亲性、疏水性、净正电荷数和关键氨基酸的替换等参数是相互依赖、相互影响,协同发挥作用,任何一个参数的改变都会影响抗菌肽整体的活性。α-螺旋是抗菌肽功能有效性的结构基础,但其所处的位置可能并不影响抗菌活性;两亲性结构是抗菌肽与生物膜相互作用的重要结构;疏水性程度必须保持在一定的范围内;在一定范围内增加多肽的阳离子能够增加抗菌活性,但正电荷数和抗菌活性之间无绝对正相关性;色氨酸的存在及抗菌肽的C-末端酰胺化能增强抗菌活性。

细菌诱导光滑鳖甲幼虫抑制差减cDNA文库的构建与分析

本研究以光滑鳖甲幼虫的cDNA为材料,应用抑制差减杂交（Suppression Subtractive Hybrriization,SSH）技术构建细菌诱导的光滑鳖甲幼虫抑制差减cDNA文库,并利用反向Northern杂交技术获得差异基因.结果表明,随机挑取的阳性克隆的大小均为20（0～750 bp,符合差减文库PCR产物片段的大小.通过斑点杂交技术共筛选出940个差异基因片段,对其克隆、测序及同源性分析后鉴定出70种编码蛋白的基因ESTs序列,所得ESTs序列主要涉及免疫防御、代谢过程、生长发育类等相关基因.细菌诱导光滑鳖甲幼虫抑制差减cDNA文库的构建,为进一步克隆光滑鳖甲免疫抗菌相关基因及其免疫防御机制的研究奠定了基础.

留置导尿生理性自动计量排放器的研制和临床应用

为使截瘫等病人的膀胱仍能象在生理情况下贮存和排放尿液，有效的训练膀胱，并自动准确统计尿量，利用传感、微电脑技术研制出一留置导尿生理性自动计量排放器。初步用于临床50例病人的观察，减少人力，方便护理，效果满意。此仪器还可用于大手术术中、术后及休克等病人的尿量监护。可减少道行性尿路感染，可推广使用。

建立微机网络后的成效评价

计算机的应用对90年代生命科学研究,21世纪医疗保健事业的变革和发展将产生重要的影响。我院应用计算机技术处理护理领域的各项工作,标志着护理专业发展进入了一个新阶段。它的运行,大大减少了护士的事务性工作。

骨科出院病人的健康教育

随着医疗制度的改革，住院患者的康复护理从高消费的医院转向家庭。骨折病人病期长，有的需要二次手术，治疗护理和功能锻炼是持续渐进的，患者病情基本稳定后，便要求出院回家休养，但仍存在着现有的或潜在的护理问题。我们对1999．8～2000．8月我科82例在市区内居住的骨折患者给予完善的康复教育并跟踪采访，使患者的康复护理连续进行，取得了较好的效果，现将体会报告如下。

增加规则重复序列对光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914热滞活性的影响

旨在探究光滑鳖甲抗冻蛋白Ap AFP914结构与热滞活性(Thermal hysteresis activity,THA)的关系。采用基因合成的方法,在光滑鳖甲抗冻蛋白基因Ap AFP914中增加单个规则重复序列并进行蛋白原核表达及热滞活性测定。结果显示,增加单个重复序列的Ap AFP-C914为312 bp,融合蛋白Trx A-Ap AFP-C914经SDS-PAGE及Western bolt分析表明,分子量为34 k D。差示扫描量热法(Differential scanning calorimetry,DSC)测定表明,在50μg/m L的浓度下,增加单个重复序列显著提高了Ap AFP的THA活性。光滑鳖甲抗冻蛋白Ap AFP914增加一个重复序列可显著提高其热滞活性。

差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 TXT基序对抗冻活性的影响

研究光滑鳖甲抗冻蛋白Ap AFP914及其突变体的原核表达及活性,推测TXT基序的突变对昆虫抗冻蛋白抗冻活性的影响。通过定点突变新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白apafp914基因TXT基序的规则位点个数,并亚克隆至p ET32a原核表达载体,转化大肠杆菌,Ni-NTA纯化得到融合蛋白Trx A-Ap AFP914及3种突变体蛋白;利用Swis S-Model服务器预测分析了Ap AFP914蛋白的三维结构;通过差示扫描量热法测定Trx A-Ap AFP914及其突变体的热滞活性。结果显示,4种融合蛋白分子量均在30 k D左右;且突变蛋白Trx A-A19T具有最高的热滞活性,而突变体Trx A-T33F和Trx A-T33&45F的热滞活性显著低于未突变的Trx A-914。研究结果表明昆虫抗冻蛋白的TXT基序越规则其具有的热滞活性越高。

小学语文作文教学方法的创新研究

创新小学语文作文教学方法,是提高语文写作教学质量,培养小学生写作兴趣的重要手段。但是近几年,小学作文教学中普遍存在作文教学质量不高、学生写作水平低下的情况。因此,在作文教学中,如何让写作教学的质量得到提高,创新教学方法,从而完善写作教学的备课内容和课堂氛围,进一步提高小学生的写作水平,培养其自主写作的兴趣,则是教育者重点研究和分析的话题。