SLC7A11在肝癌中的研究进展

原发性肝癌因其易转移性、高复发性及耐药性导致患者预后较差,故寻找肝癌治疗的特异性分子靶标至关重要。SLC7A11是铁死亡的关键抑制因子,通过介导胱氨酸摄取促进谷胱甘肽合成,保护细胞免受氧化应激损伤。近期有文献报道了SLC7A11在肝癌发生、发展,介入栓塞治疗,免疫治疗,放射治疗,靶向药物耐药等方面的生物学作用。本文对此作一综述,旨在为肝癌分子靶向治疗提供新的思路与方向。

槲皮素调控肝缺血-再灌注损伤的研究进展及应用

由于肝切除或肝移植手术需要进行一定时间入肝血流阻断,导致发生肝缺血-再灌注损伤(HIRI)不可避免,尤其伴有脂肪肝、肝硬化时,严重影响手术预后。槲皮素是一种来自大自然的类黄酮化合物,具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗癌等药理活性。近年来的研究表明,槲皮素在心、脑、肾、肝等多器官的功能失调保护机制中发挥重要作用,且其抗HIRI的肝保护作用逐渐成为目前研究的热点。总结文献发现,槲皮素在抗氧化应激、减轻炎症反应以及抗细胞凋亡与自噬等方面均能发挥不错的作用,这使得其用于临床改善HIRI具有良好的潜力。

肝细胞癌中泛凋亡相关长链非编码RNA预后风险模型的构建与评估

目的利用生物信息学对癌症基因组图谱(TCGA)数据库进行挖掘并筛选对肝细胞癌(HCC)患者预后有显著影响的泛凋亡(PANoptosis)相关长链非编码RNA(lncRNA),构建HCC中PANoptosis相关lncRNA(PANRlncRNA)的预后风险模型。方法在TCGA数据库下载377例HCC患者临床数据,在多种数据库中检索关键词"PANoptosis"并从文献中获取泛凋亡相关基因(PANR-Gs),通过对PANR-Gs和lncRNAs进行共表达分析确定PANRlncRNAs,在癌组织及癌旁组织中进行差异性分析。对377例患者的临床数据预处理后筛选到符合标准的343例样本(全集),将全集随机分组为训练集(172例)和测试集(171例),通过单因素Cox、LASSO、多因素Cox风险回归分析建立训练集的预后风险模型,得到每个患者的风险评分,按风险评分的中位值将其分为高、低风险组,采用Kaplan-Meier方法对两组患者进行生存分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线对模型进行效能评估。分析高、低风险组的生存时间和免疫功能,通过Wilcoxon检验完成两组间比较。结果共筛选到147个PANRlncRNAs,108个差异表达的PANRlncRNAs,最终确定4个PANRlncRNAs构成HCC预后风险模型,该模型在训练集患者的1年、3年和5年生存预测性能曲线下面积(AUC)值分别为0.740、0.774和0.791;高风险组患者的总生存期明显低于低风险组(P<0.05),测试集和全集中也呈现出良好的预测效能,进一步分析表明在高、低风险组中,免疫细胞及其功能差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于4个PANRlncRNAs建立预后风险模型有良好的预测能力,可有效预测HCC患者的生存预后,其风险评分可能成为HCC独立的预后因素。

超声介导载药微泡靶向药物释放联合藤黄酸对兔结肠癌皮下移植瘤疗效分析

目的探讨超声介导载药微泡靶向药物释放(UTMD)技术联合藤黄酸(GA)治疗兔结肠癌皮下移植瘤疗效。方法将兔结肠癌VX2细胞株植入兔右侧大腿构建兔结肠癌皮下移植瘤模型,通过干预方式的不同将24只荷瘤兔随机分为对照组、单用GA组、单用超声辐照组、GA+超声辐照组、GA+微泡组、GA+微泡+超声辐照组6组,每组4只,施加干预后取出瘤块,测量肿瘤体积与重量并行病理检测及透射电子显微镜检查,比较各组抑瘤疗效,两组间样本均数比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果干预后超声辐照组肿瘤体积与重量略低于对照组[(4.30±0.32) cm^(3)比(4.54±0.73) cm^(3)、(4.49±0.32) g比(4.74±0.72) g,t=0.597、0.613,P>0.05],抑瘤率为5.27%;单用GA组移植瘤体积及重量低于对照组[(3.50±0.40) cm^(3)比(4.54±0.73) cm^(3)、(3.70±0.38) g比(4.74±0.72) g,t=2.502、2.521,P<0.05],抑瘤率为21.94%;GA+微泡组移植瘤体积及重量低于对照组[(3.16±0.41) cm^(3)比(4.54±0.73) cm^(3)、(3.32±0.41) g比(4.74±0.72) g,t=3.319、3.394,P<0.05],抑瘤率为29.96%;GA+超声辐照组移植瘤体积及重量低于对照组[(2.99±0.27) cm^(3)比(4.54±0.73) cm^(3)、(2.99±0.45) g比(4.74±0.72) g,t=4.005、4.093,P<0.05],抑瘤率为36.92%;GA+微泡+超声辐照组移植瘤体积及重量低于对照组[(2.30±0.33) cm^(3)比(4.54±0.73) cm^(3)、(2.27±0.37) g比(4.74±0.72) g,t=5.618、6.077,P<0.05],抑瘤率为52.11%。将GA+微泡+超声辐照组与单用GA组、GA+超声辐照组及GA+微泡组比较,其移植瘤体积与重量明显降低,差异均有统计学意义(t=4.605、5.399;3.225、2.478;3.248、3.821,P<0.05)。病理检测结果提示:对照组肿瘤组织无明显坏死,坏死评分0分;随着干预条件改变,超声辐照组、单用GA组、GA+微泡组、GA+超声辐照组以及GA+微泡+超声辐照组均有不同程度坏死,坏死评分分别为1分、2分、3分、3分、4分,坏死程度逐组递增。最后通过透射电子显微镜观察各组移植瘤细胞显微结构,其结果和病理检测结果保持一致。结论 UTMD联合藤黄酸可有效抑制兔结肠癌皮下移植瘤的生长。

通腑泄热法对兔肝部分切除术后肝功能的影响

目的观察通腑泄热法中药对兔肝部分切除术后肝功能的影响。方法选用新西兰白兔25只,以随机数字表法随机分为3组,即中药组(TCM组,n=10),对照组(Control组,n=10),假手术组(Sham组,n=5),制备兔肝部分切除模型20例和假手术模型(切开腹壁后关腹)5例,分别于术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天,检测各组兔血清中过氧化氢酶(CAT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)的含量水平。多组间样本比较采用单因素方差分析,组间两样本比较采用独立样本t检验。结果术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天,中药组CAT的含量分别为(6.34±0.61)、(4.44±0.72)、(5.09±0.36)、(6.18±0.62)U/ml;对照组CAT的含量分别为(6.08±0.80)、(4.48±0.72)、(4.64±0.49)、(5.05±0.39)U/ml;假手术组CAT的含量分别为(6.34±0.64)、(6.31±0.52)、(6.33±0.42)、(6.36±0.31)U/ml。中药组ALT的含量分别为(25.67±2.97)、(38.65±3.14)、(33.30±2.33)、(26.95±1.74)U/L;对照组ALT的含量分别为(26.04±2.13)、(36.02±4.08)、(35.70±1.96)、(32.55±4.68)U/L;假手术组ALT的含量分别为(25.13±2.19)、(25.22±2.87)、(25.06±2.21)、(24.04±1.39)U/L。中药组AST的含量分别为(18.61±1.79)、(29.31±2.78)、(25.95±3.33)、(19.76±1.91)U/L;对照组AST的含量分别为(17.32±2.21)、(28.00±3.76)、(27.29±2.78)、(26.05±2.41)U/L;假手术组AST的含量分别为(18.27±2.15)、(18.92±2.41)、(18.87±1.89)、(18.54±2.28)U/L。中药组ALB的含量分别为(51.31±5.43)、(41.08±1.96)、(45.40±2.43)、(48.74±3.26)g/L;对照组ALB的含量分别为(52.14±4.36)、(42.99±4.16)、(45.33±3.71)、(43.74±2.95)g/L;假手术组ALB的含量分别为(50.05±4.23)、(51.18±4.11)、(51.10±2.93)、(51.50±3.34)g/L。CAT、ALT、AST、ALB的含量变化,术前各组间差异无统计学意义(CAT,t=0.815、-0.003、-0.633;ALT,t=-0.322、0.357、0.775;AST,t=1.443、0.325、-0.798;ALB,t=-0.377、0.451、0.881,P值均>0.05)。术后第1天中药组和对照组ALT、AST水平明显升高,CAT、ALB水平明显下降,与假手术组比较,差异有统计学意义(ALT,t=8.017、5.257;AST,t=7.095、4.870;CAT,t=-5.119、-5.024;ALB,t=-6.589、-3.612,P<0.05),中药组和对照组间差异无统计学意义(CAT,t=-0.136;ALT,t=1.617;AST,t=0.883;ALB,t=-1.314,P值均>0.05)。术后第5天中药组和对照组ALT、AST都有所下降,CAT、ALB都有所升高,中药组变化更为显著,中药组和对照组间差异有统计学意义(ALT,t=-3.548;AST,t=-6.478;CAT,t=4.896;ALB,t=3.601,P值均<0.05)。结论通腑泄热法中药可明显减轻兔肝部分切除后术后肝损伤,可能是通过升高CAT水平,减少肝部分切除术后氧自由基的产生,从而保护兔肝部分切除术后肝功能。

通腑泄热法中药通过线粒体DNA/Toll样受体9/微小RNA-223通路抑制肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨通腑泄热法中药通过线粒体DNA(mtDNA)/Toll样受体9(TLR9)/微小RNA(miR)-223通路抑制肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的作用。方法随机数字法将80只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠分成通路正常组(NP组)、通路激活组(AP组)、通路正常中药组(NPT组)、通路激活中药组(APT组)4组,"通路激活"指在大鼠HIRI建模麻醉后采用TLR9激活剂50μg/只腹腔注射激活mtDNA/TLR9/miR-223通路,"通路正常"则腹腔注射对应剂量生理盐水;"中药"指手术处理前3 d以通腑泄热法中药按照5 ml/只/次剂量,每日2次给大鼠灌胃。每组20只,均建立肝脏HIRI模型,以分组要求施加不同干预后分别于再灌注后24、48 h两个时间点采集血清及肝组织标本,并进行相关生化指标、病理、蛋白质印迹法(Western blot)及聚合酶链反应(PCR)检测。采用多因素方差分析。结果"通路激活"及"中药干预"均是术后血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)变化的影响因素。通路激活可促进术后血清中ALT、AST、LDH升高,AP组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH高于NP组[ALT:(962.34±42.35)U/L比(747.33±40.04)U/L,F=11.446,P<0.05;AST:(1421.58±93.25)U/L比(1041.87±48.60)U/L,F=5.893,P<0.05;LDH:(2312.99±95.77)U/L比(1974.23±75.80)U/L,F=5.019,P<0.05];而中药干预可抑制术后血清中ALT、AST、LDH升高,NPT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT:(561.31±40.49)U/L比(747.33±40.04)U/L,F=688.807,P<0.05;AST:(792.38±44.03)U/L比(1041.87±48.60)U/L,F=838.255,P<0.05;LDH:(1702.75±62.32)U/L比(1974.23±75.80)U/L,F=514.608,P<0.05];通路激活及中药干预的交互作用呈现出抑制作用,APT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT:(437.88±47.88)U/L比(747.33±40.04)U/L,F=156.296,P<0.05;AST:(510.02±55.54)U/L比(1041.87±48.60)U/L,F=272.576,P<0.05;LDH:(1473.69±71.94)U/L比(1974.23±75.80)U/L,F=134.480,P<0.05];且术后48 h,NP组、AP组、NPT组、APT组4组大鼠血清ALT、AST、LDH均较术后24 h降低。术后24 h 4组大鼠肝细胞病理均呈现出不同程度坏死,以AP组坏死最严重,且术后48 h各组肝细胞坏死程度较术后24 h轻。术后24 h,各组大鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)及ICAM1的表达以NP组表达最高,APT组最低,而术后48 h各组NF-κB及ICAM1表达趋势同术后24 h,且各自较术后24 h表达有所下降。术后24 h,相对于NP组,AP组及APT组中miR-223、TLR9的表达明显升高,NPT组的表达明显降低;而NPT组、AP组及APT组中mtDNA的表达均明显降低,以APT组降低最显著,术后48 h各组三者表达量均较术后24 h降低,以APT组降低最显著。结论通腑泻热法中药可以通过mtDNA/TLR9/miR-223通路改善肝脏缺血再灌注损伤。

三结构域蛋白28通过上皮-间充质转化对肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒,对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,组间比较采用t检验。结果RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG20.84±0.02,HCCLM30.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG21.00±0.05,HCCLM31.00±0.07,t=5.488、7.240,P<0.01),差异有统计学意义。划痕实验结果显示,48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%],差异有统计学意义(t=22.971、5.780,P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个,明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个,差异有统计学意义(t=23.050、13.242,P<0.01)。Western blot结果显示,HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06,0.63±0.08,t=4.822、2.951,P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03,0.32±0.02,t=2.909、7.944,P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03,0.12±0.02,t=2.970、4.157,P<0.05)低于对照组,E-cadherin表达升高(0.25±0.05,0.27±0.07,t=3.242、5.021,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示,实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30,1.40±0.17,t=4.571、3.095,P<0.01),差异有统计学意义,N-cadherin(0.42±0.01,0.84±0.03,t=22.460、8.441,P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00,0.84±0.02,t=52.230、6.194,P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07,0.34±0.07,t=2.972、4.174,P<0.01),差异均有统计学意义。结论降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。