草鱼出血病的病原研究

草鱼出血病的病原研究,始于50年代。1978—84年,分离到一种病原病毒,定名为草鱼呼肠孤病毒或鱼呼肠孤病毒。本文报道从出血病病鱼组织的电镜研究中发现两种病毒颗料,一种即是呼肠孤病毒,另一种是20-30nm大小的病毒。经病毒的核酸分析,前者是双股RNA病毒;后者为单股RNA病毒。用分离到的这两种病毒分别注入1足龄健康草鱼,可发生两类不同症状的出血病;呼肠孤病毒主要导致“肠出血型”症状;另一种病毒(经初步鉴别属于小RNA病毒科病毒)主要导致“肌肉出血型”出血病。由此,可以证实两种病毒都是草鱼出血病的病原病毒,同时也初步解释出现两种不同症状出血病的原因。

草鱼出血病病原病毒在鱼类细胞中增殖的研究

应用电子显微镜和放射自显影术,观察草鱼出血病两种病原病毒——草鱼呼肠孤病毒(GCR)和草鱼小RNA病毒(GCP)在鱼类细胞中的形态及增殖过程的一些重要特征。着重描述GCR从“毒浆结构”发生和GCP的特殊装配形式以及两者RNA在细胞中的复制部位和转移过程,也对两种病毒的形态发生动态、释放形式与宿主细胞的病变效应作了观察和讨论。

几种污染物对草鱼细胞SCE的影响

1987年10月—1988年6月期间,以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)ZC-7901细胞株和1龄稚鱼作实验材料,选5种金属盐和4种农药作水体环境的污染物,对培养细胞和稚鱼进行处理,观察培养细胞和鱼体内肾细胞SCE的变化。结果表明:在每毫升培养基中分别含有104×10^(-7)mg的Cr^(6+),112×10^(-7)mg的Cd^(2+),74.9×10^(-7)mg的As^(3+),20l×l0^(-6)mg的Hg^(2+),207×10^(-4)mg的Pb^(2+)及216×10^(-4)mg的敌百虫等污染物,都能诱使培养细胞的SCE明显增加;稚鱼在每升分别含有15×10^(-7)g的Cr^(6+),15×10^(-7)g的Cd^(2+),13×10^(-7)g的Hg^(2+)的池水中喂养40天后,体内肾细胞的SCE也见增加;但是三环唑、甲胺磷、呋喃丹对细胞的SCE没有影响。本文认为,能够引起草鱼SCE变化的污染物的浓度,应该作为今后制定水质标准的参考;同时,草鱼培养细胞和体内肾细胞SCE的检测技术,可以发展成为一种监测水体环境污染的检测系统。

淡水鱼斯丹尼小球的光学与电子显微镜观察

斯丹尼小球(Corpuscles of Stannius)是真骨鱼特有的一个内分泌器官。1839年为Stannius首次描述。近年来,多数学者认为小球的功能是维持海、淡水洄游鱼类体内盐分的平衡。作者用淡水鱼鲫鱼、鲢鱼为实验动物,发现小球的组织形态出现与季节及性腺发育有密切关系的年周期变化。

我国动物分类思想的萌芽初探

对我国早期动物分类思想的研究,在近人中仅见邹树文先生从《尔雅》、《礼记》、《周礼》、《吕氏春秋》等古文献中所作的探索,时间是在春秋战国与秦汉之交。本文对我国动物分类思想的萌芽,追溯到甲骨文的记载,时间是在殷商时期。甲骨文中有不少动物名称的字,这些字明显的表现出:一。

鱼类免疫学研究进展

鱼类免疫学研究进展李亚南，陈全震，邵健忠，毛树坚王冀平（杭州大学生物与技术系杭州３１００１２）（浙江省测试技术研究所杭州３１００１２）关键词鱼类，免疫学，进展ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＲＥＳＥＡＲＣＨＯＦＦＩＳＨＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ￥Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｆｉ...

三角帆蚌瘟病的组织病理研究

对健康及患瘟病三角帆蚌的１３种脏器组织作了系统的形态结构观察和组织化学分析，结果表明，三角帆蚌瘟病的组织病理变化主要集中在病蚌的肝脏、胃和直肠等组织。病毒侵袭蚌体后，肝脏的吸收细胞、未成熟细胞以及胃、直肠的纤毛上皮细胞内出现病毒包涵体，ＤＮＡ和ＲＮＡ等正常代谢受到抑制，ＡＫＰ和ＡＣＰ酶的活性和分布发生异常，细胞内消化作用受阻，最后病变细胞解体，导致肝脏、胃和直肠等的广泛受损。病蚌因消化系统坏死和消化功能丧失而死亡。还就正常三角帆蚌消化系统的结构与功能作了探讨。

应用Dot－ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。

从2000年高校招生看我省“十五”期间民办高校的发展

浙江省民办高校的发展速度是引人注目的,它为大力发展浙江省高等教育事业作出了积极的贡献。但是,从2000年浙江省高校招生的情况和趋势看,我省"十五"期间民办高校发展同样存在一些值得我们认真研究的问题。本文围绕这些问题进行了思考,并提出几点建议。

草鱼、青鱼体外培养细胞的属间、亚科间核移植

自King和Briggs 1952年首次报道了细胞核移植在两栖类上获得成功以来,这项卓绝的技术引起国内外学者的极大重视和兴趣,并逐渐应用到两栖类以外的其它动物。在我国,童第周教授等1963年首次应用此项技术于鱼类。他们在金鱼和鳑鮍鱼上的开拓性实验,证明鱼类细胞核同样可以进行核移植。七十年代起,我国在鱼类细胞核移植方面的研究得到迅速发展,并逐渐以理论研究走向实际应用。在鲫、鲤,鲢、草鱼、团头鲂等鱼类上进行研究,得到了几个不同组合的移核鱼或胚胎,其中某些移核杂交鱼是可育的。为了进行鱼类遗传改良研究,作者在草鱼、青鱼、团头鲂上着手进行了细胞核的移植,利用体外长期培养的体细胞作供体,在属间和亚科间鱼类上作移核实验,得到了不同发育期的胚胎。现将此工作作简要报道。

三角帆蚌十六种同工酶系统的表型及其在瘟病病蚌中的病理变化

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对我国三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)11种组织中16种同工酶系统的酶谱表型、组织分布、活性含量和迁移特征进行了分析,并就不同酶谱特征与基因表达状况作了讨论。证实酯酶和α-磷酸甘油脱氢酶的表型和活性含量在病蚌体内有明显的紊乱现象,表明三角帆蚌瘟病的病理机制与消化系统脂类代谢异常有密切关系。消化系统两种酶谱的特异性变化,可作为瘟病早期诊断的生化辅助指标。

草鱼外周血淋巴细胞体外转化诸因素的研究

于1993年3月-1993年11月，采用3H－TdR同位素掺入法，分别测定草鱼外周血中淋巴细胞在经两种特异有丝分裂原植物凝集素（PHA）与金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）刺激后发牛的T淋巴细胞与B淋巴细胞应答转化的平均刺激指数（SI）的值。经不同浓度的PHA与SPA刺激的T，B淋巴细胞转化实验表明，两种有丝分裂原促T，B淋巴细胞应答转化的最适剂量，PHA为500μg/ml，SPA为0.05％；用不同浓度的小牛血清培养试验表明，PHA组的最适浓度为10％，而SPA组的为15％；不同培养时间的试验显示，PHA最适刺激时间为1-2d，而SPA为2-3d.因此在采用鱼类淋巴细胞体外转化实验来进行鱼类的免疫机理等方面的研究中，必须考虑上述彼此相关的三个基本要素，即淋转刺激剂的最适剂量、培养液中的小牛血清的最佳浓度以及淋巴细胞转化应答所需的最适时间。

从草鱼细胞分离到一种抗出血病病毒蛋白因子的研究

从人工诱变筛选的草鱼抗出血病病毒AHZC88细胞中检测到一种高效的抗病毒因子,经(NH_4)_2SO_4沉淀,PAGE洗脱和HPLC分离,得到纯化的抗病毒蛋白。该蛋白在出血病病毒的敏感细胞株ZC7901和CP80上表现出很强的抗病毒活性,平均滴度Log_4CPEI_(50)/0.1 ml在7.10±0.10(±S)以上。理化性质研究表明,该因子100000g离心不沉降,抗酸,不耐热,等电点为5.2。转译后分子量为29kD,经糖基化修饰成为38kD和36kD两种糖肽,未检出明显的磷酸化修饰,其沆病毒作用依赖于细胞内RNA和蛋白质的合成,并存在一定的细胞或病毒特异性。该因子在鱼体中有明显的抗病毒感染作用,能降低发病率,延缓发病时间。

三角帆蚌瘟病病毒的精细结构与基因组及多肽的研究

从自然发病蚌分离的三角帆蚌瘟病病毒(Hyriopsis cumingii Plague Virus,HcPV)呈球形或多形态,直径40～210nm。病毒外被厚7.9nm的脂质囊膜,表面布满长12nm的棒状突起,内嵌有20nm的砂样颗粒。核衣壳由串珠状物构成。在包装入病毒前呈杆形核衣壳,直径约12nm,长度30～340nm不等。以后经3～5个圈的螺旋化,成为直径40～70nm的螺线管核衣壳,包装在病毒中。病毒基因组由33S,28S、22S、18S和5S等5个分节段的单链RN A组成,其中33S和22S RNA结合于核衣壳中,为病毒特异性基因片段。4个大片段RNA的分子量分别为2.4、1.9、1.2和0.7×10~6D。病毒多肽组分有4个,分子量为VP1 46kD,VP2 41kD,VP339kD,VP4 18kD。其中VP1为非糖基化的核蛋白,是核衣壳的多肽成分,VP2和VP3为糖肽,分别构成囊膜及囊膜外突起。VP4的含量较低。

鱼类细胞电融合条件的研究

1988—1989年,以草鱼(Ctenopharynoodon idellus)尾鳍组织HGC—87细胞为材料,应用自制BP—88型细胞电融合仪,对鱼类细胞的电融合条件进行研究.草鱼细胞电融合时,需要较高的脉冲场强,低于4KV/cm时,细胞很少发生融合.场强为10KV/cm脉宽60—100μs,连续3—7个脉冲,融合率可达80％,融合后存活率达85—90％。电场介质为3％甘露醇液,含一定浓度的CaCl_2和MgCl_2,Mg^(++)在1mmol/L浓度以下,能促进细胞的极化,但融合时细胞易被电击击破.Ca^(++)在1mmol/L浓度以下,有利于细胞极化成串.融合细胞经21天培养后仍存活,有细胞分裂.

紫外线诱变建立草鱼抗出血病病原病毒的AHZC88细胞株

通过UV对草鱼出血病病原病毒敏感的草鱼ZC 7901细胞株反覆诱变,获得了对出血病病原病毒具有抗性的AHZC 88细胞株。经生物学特性测定,AHZC 88细胞的染色体2n=48,温度适应范围4°～38℃,最适生长温度27℃,分裂指数在36小时时达最高值。经病原病毒的人工侵染等试验表明,AHZC 88细胞不受草鱼出血病病毒感染。在电镜切片观察中,细胞内不见病毒颗粒。LDH同工酶分析,比敏感细胞少1条酶带。

草鱼出血病两种病原病毒的分离和致病性的研究

通过PEG和鱼精蛋白沉淀等方法,从草鱼(Ctenopharynogon idellus)出血病病鱼组织分离纯化出两种病毒.一种是直径70—80nm的病毒颗粒,六边形,有双层衣壳,无囊膜;另一种直径仅20—30nm的小病毒颗粒,也呈六边形.前者是呼肠孤病毒(Reovirus),以前已有报道;后者拟初步鉴别为小RNA病毒科(Picornaviridae)病毒.将两者分别感染1足龄健康草鱼,能复制出典型症状的草鱼出血病而致鱼死亡.呼肠孤病毒主要导致肠道出血的出血病,而小病毒颗粒导致肌肉出血为主的出血病.由此可以初步解释生产上出现两类出血病的原因.

草鱼免疫相关细胞的超微结构的研究

以草鱼血液为样品作超微结构的观察。与哺乳动物相比较，草鱼血液中除红细胞、血栓细胞外，还有免疫相关细胞，包括淋巴细胞、单细胞、酸性白细胞、中性白细胞及巨噬细胞，但没有观察到碱性粒细胞。另发现草鱼淋巴细胞表面有较多突起，巨噬细胞形状不定。

草鱼染色体的包装(间期—中期)

以草鱼ZC7901细胞株为材料,观察鱼类细胞从间期染色质到中期染色体的包装过程。主要通过:(1)分裂期与间期细胞融合,诱导染色体早熟凝集;(2)染色体“伸长”处理;(3)培养细胞的低渗处理;(4)染色质铺展等方法,制作染色体标本,进行扫描和透射电镜观察。 观察表明,鱼类染色质的基本结构与哺乳类细胞相同,也是直径约10nm的核丝(Nucleofilament)。染色体的色装有两种形式:一种是多级螺旋化形成直径约300nm的染色单体,再经过一次绞合,形成约600nm的染色体;另一种是从30nm或60nm的螺线管直接折叠交联包装,其间也伴有部分不规则螺旋的纤丝形成染色体。本文认为:前一种螺旋化是草鱼染色体的正常包装,后一种折叠交联是染色体的快速早熟包装。

病毒诱导草鱼产生干扰素活性因子的研究

采用细胞病变抑制法测定了病毒诱导前后草鱼外周血中干扰素的活性变化。结果表明，经病毒诱导的草鱼血清中出现明显的干扰素抗病毒活性，２５℃水温下诱导３天，其活性达到高峰，在草鱼细胞中的效价（Ｌｏｇ２ＣＰＥＩ５０／０．１ｍｌ）可达１１．０８±０．５８以上。草鱼血清干扰素具有１０００００ｇ离心不沉降，耐热，在ｐＨ２．０－１０．０范围内活性稳定，抗ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ，对胰蛋白酶、糖苷酶和ＮａＩＯ４敏感等性质，其抗病毒作用依赖于细胞内ＲＮＡ和蛋白质的合成。在鱼类细胞中具有抑制不同病毒的能力，但在人、哺乳类、鸟类和贝类等细胞中无抗病毒作用，表现出抗病毒的广谱性和相对的种属特异性。