用于定量ELISA方法的抗人β2微球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)特异性单克隆抗体并建立其双抗体夹心定量ELISA免疫检测方法。方法以高纯度的人β2-MG作为免疫原,采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法免疫纯系Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人β2-MG单克隆抗体并鉴定,以此为基础建立双抗体夹心ELISA检测方法。结果制备出5株稳定分泌抗人β2-MG的单克隆抗体,经鉴定5株单抗皆为IgG1类,均为β2-MG抗原特异性抗体。经抗体配对试验筛选出1对可用于ELISA检测的配对抗体,建立了定量ELISA检测方法。结论制备出抗人β2-MG单克隆抗体并建立了双抗体夹心定量ELISA免疫检测方法,与国外试剂盒检测结果相关性良好。

一种改进的分泌抗半抗原抗体杂交瘤细胞株筛选方法

目的:研究解决半抗原分子单克隆抗体制备技术路径中遇到的在阳性杂交瘤细胞株筛选时无法排除载体蛋白间交叉反应影响的问题,以半抗原去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)为例。方法:在NE完全抗原免疫小鼠实施细胞融合后,分别包被牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、BSA-NE、OVA-NE等4种不同抗原的酶标板平行检测细胞培养上清液;挑选BSA、OVA检测结果为阴性,BSA-NE、OVA-NE检测结果为阳性的孔内细胞进行克隆化筛选单克隆细胞。结果:本筛选方法可一次性从8板96孔板中筛选到13个符合要求的阳性孔,经3次克隆化后获得6株特异性强的杂交瘤细胞株。结论:本方法避免了载体蛋白间交叉反应对筛选的影响,改进了传统的单一指标筛选方法,筛选效率更高。

糖类抗原19-9单抗制备及DAS-ELISA的建立

目的：为制备糖类抗原19-9（Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）特异性单克隆抗体。方法：以免疫后小鼠血清效价及其IC50值确定融合用小鼠，融合、筛选获得阳性杂交瘤细胞株。制备、收集并纯化腹水抗体，紫外分光光度法测定抗体浓度；辣根过氧化物酶标记抗体后，筛选配对抗体建立DAS-ELISA检测方法，并与国外检测试剂盒进行对比验证检测性能。结果：细胞融合后获得3株单抗细胞株（ZJY1-2C8、ZJY2-7F10、ZJY3-1G9），筛选确定ZJY3-1G9作为包被抗体、ZJY2-7F10作为酶标抗体，成功建立DAS-ELISA检测方法，最低检测限为26.4 U/ml。线性范围为30～300 U/ml。通过检测病患血清33份，证实与国外试剂盒检测的相关系数r＝0.9504。结论：所制备的单抗可用于CA19-9试剂盒的研制。

去甲肾上腺素完全抗原的制备、鉴定及小鼠体内免疫效果的观察

目的制备鉴定去甲肾上腺素完全抗原为制备高灵敏度和特异性抗去甲肾上腺素（NE）单克隆抗体提供条件。方法分别用戊二醛法（GA）和碳化二亚胺法（EDC）在pH4．5和pH9．0条件下将NE与载体蛋白（BSA、OVA）耦联制备完全抗原，采用紫外全波长扫描、SDS．PAGE和FeCl，显色反应3种方法进行鉴定；完全抗原腹腔注射小鼠并监测血清抗体效价。结果3种方法鉴定结果表明NE完全抗原制备成功，与pH4．5相比，在pH9．0条件下随着耦联时间的延长，NE的耦联比增加显著。间接ELISA结果显示，“检测抗原”和“免疫抗血清”配组测定时，当包被的“检测抗原”测定同种耦联方法制备的“免疫抗原”免疫小鼠后获得的“免疫抗血清”时，血清抗体滴度观测值高于与“检测抗原”制备方法不同的免疫小鼠抗血清，如：A组（BSA-NE-GA）测定C组抗血清（OVA．NE．GA）时测定结果高于A组测定G组抗血清（OVA—NE—EDC）。结论用制备的NE完全抗原免疫小鼠成功产生了抗NE抗体。