细胞自噬对HTLV-1在HeLa细胞中复制动力学的影响

目的探讨成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后的复制动力学及其对宿主细胞状态的影响。方法将HTLV-1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、凋亡相关蛋白caspase-3/9、自噬相关蛋白LC3；real-time PCR检测病毒载量；荧光素酶活性检测3′长末端重复序列（3′-LTR）转录活性；免疫荧光检测自噬体数目。结果通过细胞共培养成功模拟了早期病毒感染；共培养后4 h、8 h、16 h、24 h、36 h，病毒核酸载量及长末端重复序列3′-LTR转录活性逐渐增加（P〈0.01），24-36 h达到平台期；而核心蛋白p19的表达4 h可以检测到，但8 h后降低，16 h后又升高，24 h和36 h差异无统计学意义；病毒感染后宿主细胞中caspase-3/7/9的活性及蛋白没有明显变化（P〉0.05），但是自噬相关蛋白LC3B/LC3A比例逐渐上升，伴有胞内自噬体数目的增加（P〈0.01）。结论HTLV-1病毒复制动力学与宿主细胞的自噬密切相关。

EGR1对HTLV-1病毒感染后宿主细胞自噬的影响

目的探讨早期生长反应基因1（EGR1）对成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后宿主细胞自噬的影响。方法获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、宿主细胞EGRl的表达：荧光素酶报告基因检测EGRl的5’端调控序列转录活性；筛选有效的EGRlsiRNA，将EGR1 siRNA转染HeLa细胞，随后HTLV．1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、EGR1、自噬相关蛋白LC3；real-timePCR检测病毒载量；免疫荧光检测自噬体数目。结果共培养后，宿主细胞EGR1蛋白表达和调控序列荧光素酶活性逐渐增强，且EGRl蛋白的表达与细胞自噬水平呈现正相关；筛选了有效的EGRlsiRNA，命名为siE2；共培养模型干扰EGRI的表达后，病毒核酸载量、核心蛋白p19的表达以及自噬相关蛋白LC3B／LC3A比例均下调，同时伴有胞内自噬体数目的减少（P〈0．01）。结论EGR1与HTILV-1感染后宿主细胞自噬水平和病毒复制密切相关。