甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与血浆同型半胱氨酸水平及冠心病的关系

目的:探讨甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与血浆同型半胱氨酸水平及冠心病的关系。方法:对298例经冠脉造影证实为冠心病的患者及136例无冠心病者的对照组进行研究,检测血浆同型半胱氨酸水平,多项血脂含量及甲基四氢叶酸还原酶基因多态性。结果:基因型与冠心病严重程度不相关,对照组及有3支血管病变的冠心病病人A型及V型等位基因频率无显著性差异。VV型纯合子的血浆同型半胱氨酸含量明显高于AA型纯合子（P<0.005）。高同型半胱氨酸血症者V等位基因频率明显高于低同型半胱氨酸血症者（P<0.01）。血脂含量与同型半胱氨酸基因型无关。结论:血浆同型半胱氨酸含量与甲基四氢叶酸还原酶基因变异相关,其VV纯合子血浆同型半胱氨酸水平最高。此基因变异与冠心病严重程度无关。

Ad-VEGF_(121)和Ad-VEGF_(165)重组腺病毒的构建和制备

目的:以pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统为载体构建用于实验动物模型基因治疗的Ad-VEGF121和Ad-VEGF165重组腺病毒。方法:采用RT-PCR方法从人心肌组织中扩增获得VEGF121、VEGF165cDNA片段,分别插入pUCm-T载体构成pUC-VEGFs;限制性内切酶SalⅠ、KpnⅠ切下目的基因片段,插入pAdTrack-CMV载体相应的多克隆位点构成pAdTrack-CMV-VEGFs。电转法将被PmeⅠ切成线性的pAdTrack-CMV-VEGFs转入E coli BJ5183,与其中的pAdEasy-1同源重组成pAdEasy-VEGFs。阳离子脂质体法将被PacⅠ线性化的重组子转染293T细胞进行腺病毒包装。转染后7～11d可在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白(GFP)呈彗星状,收集细胞反复冻融获得含重组腺病毒的上清液。感染293T细胞3～4次,待细胞出现细胞病变效应(CPE)时收获腺病毒(Ad-VEGFs),并用CsCl密度梯度超速离心进行纯化。结果:重组腺病毒在电镜下呈多面体,形态完整;Ad-VEGF121和Ad-VEGF165病毒滴度分别达到1.155×1012和1.281 5×1012 V.P/mL。结论:利用pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统构建携带目的基因的重组腺病毒方法较简便,易掌握。获得的重组腺病毒纯度高、滴度高,适用于实验动物模型和体外培养细胞的基因治疗。

重组变异纤维蛋白原体外表达及对凝血功能的影响

目的:采用基因重组技术和细胞培养方法制备纤维蛋白原（Fbg）β链K 318E/D 320 S变异蛋白,观察此变异蛋白对凝血反应的影响。方法:用Site-directed mutagenesis方法构建变异重组质粒;磷酸钙法将此质粒转染CHO细胞;经细胞培养表达变异蛋白;硫酸铵沉淀法和免疫亲和层析法获取蛋白。进行纤维蛋白多肽A、B释放实验和在3种Ca2+浓度下的纤维蛋白聚合实验,并评价此变异蛋白的功能。结果:变异与正常Fbg纤维蛋白多肽A、B释放实验无差异。纤维蛋白聚合实验显示,在不同Ca2+条件下两者间Lag period,Vmax和最终光密度均有显著性差异（P<0.05）。结论:B β链变异蛋白可能引起Fbg D区结构的变化,使纤维蛋白聚合位点和Ca2+结合位点不能发挥正常功能,致使纤维蛋白聚合反应速度减慢及纤维蛋白纤维粗细出现异常。

载脂蛋白A-I基因启动子区域G→A置换对血浆HDL水平的影响

采用ＰＣＲ扩增法和限制性片段长度多态性分析法，对１１５例正常人和１１８例冠心病患者的载脂蛋白Ａ－Ｉ基因启动子区域－７８ｂｐ位点腺嘌呤与鸟嘌呤置换进行检测，并观察此位点基因变异对血浆ＨＤＬ－ｃｈ和ａｐｏＡ－Ｉ含量的影响。结果显示，血浆 ＨＤＬ－ｃｈ和 ａｐｏＡ－Ｉ含量在三种基因型中无显著性差异（Ｐ＞０．０５），基因型在正常 ＨＤＬ－ｃｈ和低ＨＤＬ－ｃｈ水平中的分布差异亦无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：ａｐｏＡ－Ｉ基因启动子部位－７８ｂｐ位点基因变异不影响血浆ＨＤＬ含量，Ａ等位基因与升高的ＨＤＬ水平无相关性。

原发性高血压患者血清脂联素及其基因多态性与冠心病的相关性研究

目的探讨原发性高血压患者血清脂联素水平及其基因单核苷酸多态性（SNP）rs266729、rs7649121、rs1501299、rs3774262与冠心病及冠脉病变程度的关系。方法以高血压患者414例（其中单纯高血压患者180例，高血压合并冠心病患者234例）和正常对照组185例为研究对象，应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清脂联素水平，聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法检测脂联素rs266729、rs7649121、rs1501299、rs3774262位点多态性。结果高血压合并冠心病组脂联素水平较对照组和单纯高血压组显著降低。脂联素rs7649121位点杂合子AT基因型较AA基因型可降低冠心病风险（校正OR=O．566，95％CI0．346～0．925，P=0．023）。多元Logistic回归分析显示年龄、LDL—C为冠心病的危险因素，脂联素为冠心病的保护因素。随着病变支数增加，脂联素水平呈逐渐降低趋势。脂联素SNP位点基因型对血清脂联素水平无明显影响。结论脂联素水平降低是高血压患者发生冠心病的独立危险因素，且随着冠脉病变程度的加重，脂联素水平逐渐降低。脂联素rs7649121位点多态性可能与高血压患者并发冠心病有关。

基质金属蛋白酶基因多态性与冠心病的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶基因MMP-3、MMP-9和MMP-12启动子基因多态性与冠心病及其血浆水平的关系。方法:对经冠状动脉(冠脉)造影证实的急性心肌梗死患者59例(AMI组)、稳定性心绞痛患者58例(SAP组)和99例经冠脉造影证实无冠状病变的对照组进行了研究。ELISA法检测血浆MMPs的水平,多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性法(PCR-RFLP法)分析MMP-3、MMP-9、MMP-12启动子的3个部位基因型变异状况和等位基因分布频率。结果:AMI组和SAP组血浆MMP-9水平明显高于对照组(P<0.05)。各组基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。未检出MMP-12启动子的-82A/G变异的基因型。不同基因型之间血浆MMPs的水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MMP-3和MMP-9启动子区域两个位点的基因变异不影响其血浆水平的表达。未发现天津地区MMP-12的-82位A/G变异的基因多态现象,血浆MMP-9水平升高与冠心病发病有关。

亚甲基四氢叶酸还原酶A1298C多态性与高同型半胱氨酸血症的相关性

目的探讨天津市汉族老年心血管病人群5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因A1298C多态性与高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)的相关性。方法选择2015年1月~2016年7月在天津市胸科医院心内科就诊的患者841例,根据同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平分为HHcy组261例和对照组580例。采用PCR-RFLP技术对入选对象行A1298C多态性基因分型,并进行比较。结果 HHcy组与对照组A1298C多态性的基因型分布比较,差异有统计学意义(P=0.046),等位基因频率比较,差异无统计学意义(P=0.100)。全体研究对象AA、AC和CC基因型携带者Hcy水平和HHcy发生率比较,差异有统计学意义(P=0.007,P=0.040)。在调整了年龄、性别等危险因素后,logistic回归分析显示,携带AC基因型(OR=0.60,95%CI:0.41~0.87,P=0.008)及C等位基因(OR=0.64,95%CI:0.44~0.92,P=0.015)均与HHcy的发生独立相关。结论 MTHFR基因A1298C多态性的AC基因型可能是天津市汉族心血管病人群发生HHcy的一个保护因素。

西拉普利和缬沙坦对大鼠心肌梗死后心肌间质成分水平的干预研究

细胞外基质（ECM）是血管壁的主要成分，这些成分的合成和降解与动脉粥样硬化的发生发展密切相关，合成过多可造成血管狭窄，降解过多可诱发斑块破裂。心脏间质细胞（又称ECM成分）主要由Ⅰ型和Ⅲ型胶原构成的纤维网络组成，基质成分合成和降解的平衡受成纤维细胞分泌的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的调节。

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达的影响。方法:人脐静脉内皮细胞CRL-1730融合至90%分别加入不同浓度Hcy:空白组0mmol/L、生理剂量组0.01mmol/L、病理剂量组0.1mmol/L、非毒性药理剂量组1.0mmol/L。毒性药理剂量组5.0mmol/L,分别刺激细胞6h,用1.0mmol/LHcy刺激内皮细胞1、6、24h;收集细胞提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Hcy对MCP-1mRNA的表达情况。结果:不同浓度Hcy刺激CRL-17306h,细胞内MCP-1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。与生理剂量组相比,非毒性药理剂量组MCP-1mRNA表达升高,毒性药理剂量组表达降低;1.0mmol/LHcy刺激CRL-1730不同时间后,MCP-1mRNA表达随刺激时间延长呈逐渐降低的趋势,24h表达量最低(P<0.01)。结论:Hcy可以影响人脐静脉内皮细胞MCP-1mRNA的表达,在动脉粥样硬化的发生过程中发挥重要的作用。

冠心病患者血管性血友病因子基因多态性及其血浆蛋白水平的研究

目的 :探讨血管性血友病因子 (vWF)基因Thr789Ala多态性及其血浆水平与冠心病的关系。方法 :应用限制性片段长度多态性分析法 ,分析201例汉族患者vWF基因Thr789Ala多态性特征和用免疫浊度法测血浆vWF水平。结果 :(1)冠心病组vWF水平高于非冠心病组 ,用配对资料比较排除冠心病的相关危险因素对vWF的影响后 ,vWF水平在两组差别无统计学意义。 (2)vWF基因多态性分析201例 ,其中Thr789纯合子型177例 ,Thr789Ala杂合子型24例 ,未见Ala789纯合子型。基因型分布、等位基因频率在冠心病组与非冠心病组差别无统计学意义。结论 :冠心病患者血浆vWF水平升高不是vWF -Thr789Ala单位点变异的结果 ,可能与高血压、糖尿病、高脂血症、高纤维蛋白原血症、性别、吸烟及其他基因因素等综合作用有关。

高浓度Hcy致血管内皮损伤的机制

目的:探讨高浓度同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)CRL-1730一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达的影响。方法:用不同浓度Hcy(0～5.0mmol/L)刺激HUVEC CRL-1730,分别作用1～24h,收集细胞,提取总RNA,逆转录得到cDNA,PCR扩增eNOS基因片段,2%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,计算相对含量。结果:随着Hcy浓度增高HUVEC CRL-1730eNOS mRNA表达逐渐降低;随着Hcy作用时间的延长,HUVEC CRL-1730eNOS mRNA表达降低。病理浓度(0.1mmol/L)及毒性药理浓度(5.0mmol/L)Hcy与生理浓度Hcy(0.01mmol/L)相比可显著降低HUVEC CRL-1730eNOS mRNA的表达。结论:高浓度Hcy可能通过降低eNOS水平,减少NO合成,导致血管内皮功能损伤。

载脂蛋白AI基因多态性与冠心病和血脂关系的研究

目的 :探讨冠心病患者载脂蛋白(apo)AI基因多态性及其对血脂的影响。方法:应用聚合酶链反应对196例正常人和240例冠心病患者apoAI基因启动子多态性进行分析,扩增含apoAI基因启动子 -75bp 和第一内含子 +83bp的DNA片段,限制性内切酶MspI酶切此片段,琼脂糖凝胶电泳分离基因多态性。结果:2组apoAI基因 -75bp 位点均为G/G基因型占优势,但冠心病组中A/A基因型显著低于对照组(P<0.05) ,2组间 -75bp 位点A、G等位基因频率差别无统计学意义。在男性冠心病患者中 ,A/A基因型携带者血清高密度脂蛋白(HDL)水平显著低于G/G基因型携带者(P<0.05)。2组 +83bp 位点中基因型与等位基因频率差别均无统计学意义。结论:apoAI基因启动子( -75bp)MspI酶切位点的突变与冠心病有一定关联,在冠心病男性患者中,A/A基因型携带者与血清HDL的降低有一定相关性。

血清炎性细胞因子与急性冠脉综合征的临床相关性

目的:探讨血清炎性细胞因子在急性冠脉综合征(ACS)发生发展中的作用及相互关系。方法:入选对象经临床及冠状动脉(冠脉)造影检查明确诊断后分为急性心肌梗死(AMI)组、不稳定心绞痛(UAP)组、稳定型心绞痛(SAP)组及非冠心病对照组,应用美国BIO-RAD生物科技有限公司的Bio-Plex细胞因子检测仪器系统分别检测各组血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度并进行统计学分析。结果:与SAP组及对照组比较,AMI组血清MMP-9、TNF-α水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);AMI组血清hs-CRP水平高于UAP组、SAP组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01);UAP组、SAP组和对照组之间比较,血清hs-CRP、MMP-9水平差异均无统计学意义(P>0.05);Pearson相关性分析显示3种细胞因子之间呈正相关关系。结论:冠心病与炎症反应密切相关,多种细胞因子参与了动脉粥样硬化斑块的形成和进展。TNF-α、CRP及MMP-9等血清细胞因子水平与冠心病病情严重程度密切相关,其升高是动脉粥样硬化斑块不稳定的标志。

醛糖还原酶基因多态性与2型糖尿病视网膜病变的关系

目的：探讨醛糖还原酶（ AR）基因启动子-106 C/T多态性与糖尿病视网膜病变（ DR）的关系。方法提取161例并发DR的2型糖尿病患者（病例组）和213例未并发DR的2型糖尿病患者（对照组）的DNA，PCR反应扩增含-106 bp位点的DNA片段，限制性内切酶BfaⅠ酶切，测定-106 C/T基因多态性。结果病例组AR基因CC型和C等位基因频率分别为53．42％、71．12％，高于对照组的39．91％、36．15％（P均＜0．05）。单因素Logistic回归分析结果显示，AR基因型中的CT/TT与DR发病有关（OR＝0．579，95％CI：0．383～0．876）。携带T等位基因的糖尿病患者发生DR的危险性降低（OR＝0．717，95％CI：0．525～0．980）。结论 AR基因启动子-106 C/T多态性与DR发病有关，携带T等位基因和CT/TT基因型的2型糖尿病患者发生DR的危险性降低。

阿托伐他汀对肾功能不全大鼠造影剂诱导的急性肾小管损伤的保护作用

目的探讨非离子低渗造影剂碘海醇对轻度肾功能不全大鼠肾小管的急性损伤作用,以及不同剂量的阿托伐他汀对肾小管损伤的保护作用。方法 36只轻度肾功能不全模型大鼠随机分为模型组、碘海醇组、阿托伐他汀小剂量组(小剂量组)、阿托伐他汀大剂量组(大剂量组),每组9只。另选9只为假手术组。注射后24、72h、7d每组监测血尿素、肌酐、尿液中肾损伤分子1(KIM-1)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平,HE染色观察肾小管结构变化,并计算肾小管损伤危险评分,TUNEL染色检测肾小管细胞凋亡率。结果与模型组比较,碘海醇组72h尿素、各时间点肌酐、KIM-1、NAG、肾小管损伤危险评分、细胞凋亡率明显升高(P<0.05,P<0.01);与碘海醇组比较,大剂量组24h、7d肌酐明显降低(P<0.05),各时间点KIM-1、NAG、肾小管损伤危险评分、细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论在肾功能不全基础上注射低渗造影剂碘海醇能够对肾小管产生急性损伤作用,造影剂注射前连续给予阿托伐他汀能减轻该损伤,并且大剂量阿托伐他汀该保护作用更强。

冠心病患者小密低密度脂蛋白与胆固醇酯转运蛋白基因多态性的关系

目的 :探讨小密低密度脂蛋白(sLDL)和胆固醇酯转运蛋白(CETP)在冠心病发病中的作用。方法:测定经冠状动脉造影确诊的冠心病患者 (冠心病组 )及无冠脉病变者 (对照组 )血浆中sLDL在LDL中所占的比例 ,并分析CETP基因中TaqIB的基因多态性。结果:(1)冠心病组sLDL水平明显高于对照组 (P<0.01)。sLDL水平与冠状动脉病变程度 (冠脉狭窄分数 )呈正相关(r=0.452,P<0.01)。(2)CETPTaqIB基因突变可使高密度脂蛋白 (HDL)水平升高 (P<0.05)。B1B1 基因型的HDL水平明显低于B2B2 型 (P<0.05)。冠心病组甘油三酯水平较高 ,B2B2 型sLDL水平显著低于B1B1 型和B1B2 型 (P<0.05)。(3)2组CETP的基因型和等位基因频率分布无明显差异 (P>0.05)。结论 :(1)sLDL是冠心病发病的一个独立危险因素。 (2)CETPTaqIB基因突变可使HDL水平升高。高甘油三酯血症时TaqIB基因突变导致CETP活性下降进而影响sLDL水平。(3)CETPTaqIB基因多态性与冠心病的发病无显著相关 。

脂蛋白脂酶基因多态性与冠心病和血脂水平的关系

目的:探讨脂蛋白脂酶LpL基因的限制性内切酶片段长度多态性与冠心病和血脂水平的关系。方法:选择181例冠心病(CHD)患者和100例与其年龄,性别相匹配的健康(对照)组进行研究,分别测定其有关血脂指标。并用PCR法扩增其染色体DNA中含第6内含子和第8内含子的不同片段,分别用限制性内切酶Pvu Ⅱ和Hind Ⅲ消化扩增产物,经琼脂糖电泳后,拍照并确定其基因型。结果:两组间P等位基因和H等位基因频率均无显著性差异。冠心病组的H基因型和P基因型与TG含量有关。其H^+H^+,H^+H^-和H^-H^-各基因型的TG含量分别为(2.31±1.60)、(1.59±0.89)和(1.46±0.43)mmol/L。P^+P^+,P^+P^-和P^-P^-各基因型的TG含量分别为(2.18±1.00)、(1.78±0.79)和(1.50±0.59)mmol/L(P<0.01)。二者均有一定的基因型剂量依赖关系。对照组基因型与TG含量无关。将全部研究对象以2.29 mmol/L为临界值分为低TG组和高TG组后,H^+等位基因在两组中分别为0.89和0.76(P<0.01)。P^+等位基因的分布在两组中差异没有显著性(P>0.25)。结论:天津地区脂蛋白脂酶Hind Ⅲ和Pvu Ⅱ基因多态位点以H^+和P^+为主,其等位基因频率分别为0.78和0.68。CHD的患者H^+基因型和P^+基因型对血浆TG含量有基因型剂量依赖关系。H^+等位基因在其它因素的参与下与血浆高TG水平的出?

血小板微颗粒对人脐静脉内皮细胞黏附因子表达的影响

目的:探讨血小板微颗粒(PMPs)对人脐静脉内皮细胞黏附因子表达的影响及PMPs在冠心病中的可能作用机制。方法:分离制备血小板微颗粒,与人脐静脉内皮细胞CRL-1730共培养,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术测定不同浓度PMPs作用不同时间的内皮细胞黏附因子E-选择素、细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞间黏附分子(VCAM)-1的表达。结果:当PMPs达到一定浓度,可促使内皮细胞(CRL-1730)表达E-选择素、ICAM-1和VCAM-1升高,差异有统计学意义(P<0.05);而PMPs刺激内皮细胞(CRL-1730)不同时间,E-选择素、ICAM-1的表达差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:PMPs可促使体外培养的人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)表达E-选择素、ICAM-1和VCAM-1升高,从一方面解释了PMPs在冠心病中的可能的作用机制。

高密度脂蛋白:影响血管内皮功能的双刃剑

在动脉粥样硬化病变的初始阶段,许多致动脉粥样硬化因素可损伤血管内皮,诱发内皮功能紊乱,内皮功能紊乱是动脉粥样硬化发病的重要机制。高密度脂蛋白(HDL)是由多种蛋白和脂质组成的功能复杂的脂蛋白。流行病学研究显示HDL与动脉粥样硬化呈负相关。HDL除参与胆固醇逆向转运、减少外周胆固醇堆积、防止泡沫细胞形成功能外,还可通过调节血管舒张功能、发挥抗氧化抗炎作用保护内皮功能,对抗动脉粥样硬化形成。但在冠心病患者体内存在失功能性HDL,其可能诱发内皮功能紊乱。本文就功能性HDL和失功能性HDL与内皮功能的关系进行综述。

胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性在冠心病发病中的作用

目的 :探讨胆固醇酯转运蛋白(CETP)TaqIB基因多态性在冠心病发病中的作用。方法:经冠状动脉造影确诊为冠心病的患者(冠心病组)234例及无冠脉病变的对照者(对照组)164例,以酶法检测血浆中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的水平,以多聚酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性(PCR RFLP)分析CETP基因中TaqIB的基因多态性。结果:(1)冠心病组TC、TG、LDL水平明显高于对照组(P<0.05),HDL水平明显低于对照组(P<0.05)。(2)CETPTaqIB基因突变可使HDL水平升高(P<0.01),在3种基因型中(B1B1、B1B2、B2B2),只有B2B2 基因型的HDL水平明显高于B1B1 基因型(P<0.05)。(3)冠心病组与对照组CETP的基因型和等位基因频率分布无明显差异(P>0.05)。结论:CETPTaqIB基因突变可使HDL水平升高,但对TC、TG、LDL无显著影响;