大容量骨髓体外净化及初步临床应用

应用补体介导细胞毒法体外净化骨髓中残留白血病细胞后,对普通型急性淋巴细胞白血病(CALL)患者4例进行了自身骨髓移植(ABMT)。单个核细胞经单克隆抗体55(McAb 55)加兔补体两次处理后,CALL抗原阳性细胞清除率可达3个对数级,骨髓有核细胞及CFU-GM回收率分别为25.8％～64.8％和40.0％～62.4％,外周血白细胞于移植后第11～13天开始回升,15～29天升至10~9/L以上。第23～53天出洁净室,现无病存活时间分别为8^+、7^+,3^+和1.5个月,远期疗效仍在定期随访中。

核事故医学应急处理药箱简介

目前,各工业发达国家都在大力发展核电工业,核电在能源中所占的比例不断增加。由于核电技术在不断进展,核事故医学应急处理措施的研究受到普遍重视。我国已先后研究提出第一代核事故医学应急处理配套措施,包括“核事故医学应急处理药箱”、“核事故医学应急处理备用药物手册”、“急性辐射损伤诊治手册”、“核辐射事故的卫生防护和医学处理”(培训教材)等实用性措施。本文仅就核事故医学应急处理药箱的实际应用的主要问题作简要介绍。

切尔诺贝利核事故后十年:事故后果概述

1996年上半年,世界卫生组织、国际原子能机构等国际组织,召开了多次切尔诺贝利核事故十年后果研讨会。本文综合介绍切尔诺贝利核事故后头十年对人员伤亡、生态环境、民众健康、公众心理、社会经济等方面的影响和后果,并就加强核安全意识,做好核事故应急医学处理,重视心理效应等问题进行扼要的讨论。

γ辐射诱发的人AHH-1 T淋巴细胞凋亡及其调控机制

目的 :研究电离辐射诱发正常人AHH 1T淋巴母细胞凋亡的特点及其调控机制 ,为辐射免疫损伤的防治提供实验依据。方法 :用TUNEL、麦格 姬姆萨 (MGG)法、MTT比色法及碱磷酶免疫组织化学染色法 ,分别检测T细胞凋亡、细胞活存以及Bax、Bcl XL和caspase 3重要凋亡相关蛋白的表达及规律。结果 :①在一定照射剂量范围内随照射剂量的增加 ,AHH 1T细胞凋亡率持续升高 ,而细胞活的活存率则急剧下降 ,两者均呈现明显的剂量效应关系。②促凋亡蛋白Bax的表达随照射剂量的增加明显增强 ,而凋亡抑制蛋白Bcl XL则呈持续下降的趋势。③活化的凋亡执行蛋白caspase 3的活性随照射剂量的增加显著升高 ,与凋亡率呈现明显的相应关系。结论 :AHH 1T细胞的大量凋亡 ,可能是辐射导致淋巴细胞急剧减少、机体免疫功能降低的重要原因 ;Bax、Bcl XL和cas pase

造血因子与急性放射病

近十余年来,应用细胞因子来改善辐射造血损伤获得了良好的疗效,积 累了不少经验。然而,细胞因子治疗急性辐射损伤的用药对象、剂量、时机及合理的配 伍应用等问题尚未解决,疗效并非尽善尽美,短效、无效者绝非罕见,甚至出现滥用现 象。本文作者实验治疗研究结果表明,造血因子对急性辐射损伤有明显的治疗作用, 但宜尽早给药,极期给药的疗效不如早期给药好。使用细胞因子治疗的时间应有一个 时限,而不是越长越好。单纯应用rhTPO不能促进粒系造血恢复。单纯应用rhG-CSF不能促进巨核系造血的恢复,未见增加肿瘤细胞染色体畸变率,重复给药和二次 照射的结果未促进造血干/祖细胞库耗竭。rhGM-CSF促进粒细胞恢复的作用不如 rhG-CSF。rhIL-11可促进辐射损伤三系造血的恢复,以巨核系的恢复更为明显。在骨 髓型急性放射病的治疗中联合使用造血细胞因子,rhG-CSF+rhIL-11不失为较理想的 方案,可作为骨髓型急性放射病患者临床治疗的首选药物。

致死剂量γ射线照射小鼠脾淋巴细胞凋亡特征及与Bax和Bcl-X_L表达的关系

目的 观察致死剂量 γ射线照射后小鼠脾淋巴细胞凋亡特征及其与 Bax和 Bcl XL 表达的关系。方法 清洁级 C5 7小鼠 2 2 5只 ,随机分为 0、6、9、12、15和 2 0 Gy6个组 ,经 γ射线全身一次照射 ,于照射前和照射后 6 h～ 2 8d活杀取材 ,用原位末端标记法 (TU NEL)和 Annexin V流式细胞术 (FCM)检测淋巴细胞凋亡和坏死情况 ,用碱性磷酸酶免疫组化技术检测 Bax和 Bcl XL 蛋白的表达。结果 1各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后 6 h出现一过性升高 ,以后迅速下降。 6 Gy照射后 7d降至最低 ,至照射后 2 8d基本恢复到正常水平。 2不同剂量照射后 6 h脾淋巴细胞凋亡率达高峰 ;照射后 6～ 2 4 h,≤ 12 Gy照射后凋亡率随照射剂量的增加而升高 ,≥ 15 Gy照射后凋亡率下降。 3FCM检测结果证实 ,6～ 12 Gy照射后 6 h,脾淋巴细胞凋亡率呈现出量效关系 ,≥ 15 Gy照射后凋亡率下降 ,而坏死率明显升高。DNA凝胶电泳图谱分析支持上述结果。 4照射后 6 h,6 Gy照射后脾淋巴细胞 Bax蛋白表达增加 ,至 12 Gy达峰值 ,显示出量效关系 ;≥ 15 Gy未显示出量效关系 ;Bcl XL 蛋白随照射剂量增加而持续降低 ,在 6～ 12 Gy也显示出较好的量效关系。结论 6～ 12 Gy照射后脾淋巴细胞死亡方式以凋亡为主 ,≥ 15

大剂量γ线照射对小鼠免疫功能近期、远期的影响

目的 :观察大剂量γ线照射对小鼠免疫功能近期、远期的影响。方法 :将 2 2 5只清洁级C5 7小鼠 ,随机分为 0、6、9、12、15和 2 0Gy 6个剂量组 ,经γ线全身 1次照射后 ,于照后 1～2 8d和 3～ 12月活杀取材 ,用原位末端标记 (TUNEL)和May Grunwald Giemsa(MGG)染色 ,检测细胞凋亡并观察其与照射剂量的关系。用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群的变化。结果 :(1)照后早期 (1～ 14 )d外周血淋巴细胞的凋亡率即出现明显升高 ,随着照射剂量的增加凋亡率的升高更为显著 ;而T细胞亚群经不同剂量照射后持续下降 ,剂量为 2 0Gy时降至最低 ,其中以CD8+ T细胞对辐射的敏感性最高 ,因而推测早期的严重损伤是急性辐射免疫损伤的重要特点之一。 (2 )照射后 1月淋巴细胞的凋亡率降低 ,T细胞及其亚群也逐渐恢复。然而直至照后 6～ 12月 ,无论是淋巴细胞的凋亡率还是CD3+ T细胞及CD8+ T细胞亚群 ,均未恢复到对照的水平 ,提示大剂量辐射对机体免疫系统的损伤呈现较重的远期效应。 (3)本实验还发现 ,12≤Gy照射后 ,外周血淋巴细胞的凋亡率与照射剂量呈明显的剂量效应关系 ,15～ 2 0Gy照射后未观察到明显的量效关系。结论 :照射后早期外周血淋巴细胞的大量凋亡 。

急性放射损伤小鼠血清蛋白质组分析

为寻找急性放射病早期诊断指标和新的治疗靶点,探讨辐射损伤的发病机理,采用蛋白质组学的双向电泳和蛋白质氨基酸序列分析技术研究了 8Gy γ 射线照射后 24h 小鼠血清蛋白质的变化,鉴定有差异的蛋白质,并用蛋白质印迹(Western blotting)方法进行验证。结果显示,双向电泳发现 8Gy 照射后 24h 小鼠血清有一显著变化蛋白点,分子量约为 15ku,经氨基酸序列分析发现为结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)的 α 亚单位。Western blotting 方法进一步验证了双向电泳的结果。结果表明,经 8Gy γ 射线照射后 24h 小鼠血清中结合珠蛋白发生显著增加,可能在辐射损伤中发挥着一定的作用,此结果为探索急性放射损伤的发病机理提供了新的线索。

骨髓移植的临床应用

近年来,由于移植免疫学、组织配型技术,免疫抑制及照射方法等基础学科研究的进展,骨髓移植的临床应用有较大的发展。迄今,世界上已有骨髓移植中心160多个,累计骨髓移植病人已达两万多例。我国骨髓移植临床应用研究起步较晚,近年来有了较快的发展,目前已有十多个单位开展了骨髓移植临床应用研究,累计移植病人150多例,有了一个良好的开端。

rhIL-3和GM-CSF对γ线照射猴外周血淋巴细胞损伤的防护作用研究

目的 观察重组人白细胞介素 3(rh IL 3)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)单用与伍用对 3.0 Gyγ线照射猴外周血淋巴细胞损伤的防护作用 ,为造血生长因子用于急性放射病的治疗提供依据。方法 30只恒河猴随机分为 rh IL 3(2 0和 6 0 μg· kg- 1· d- 1 )、GM CSF(10 μg· kg- 1· d- 1 )、IL 3+GM CSF、照射对照及正常对照共 6个组。γ线全身照射 3.0 Gy连续给药 2 1d后 ,用碱磷酶免疫组织化学法检测 T细胞亚群、Bax和 Bcl 2蛋白 ,用原位末端标记方法检测淋巴细胞凋亡率。结果 1照射后外周血淋巴细胞数、T细胞及其亚群均显著低于正常组 ,照射对照组 T、TH 和 Ts淋巴细胞分别下降至正常对照组的4 2 %、4 1%和 5 7%。2单独给予 GM CSF和 GM CSF+IL 3后 ,外周血淋巴细胞数量及 T、TH 细胞的降低均受到明显抑制 ,两组的淋巴细胞数均相当于照射对照组的 1.4 8倍 ,GM CSF组 T、TH 细胞分别为对照组的 1.5 7和 1.76倍 ,GM CSF+IL 3组 T、TH 淋巴细胞分别为对照组的 1.4 8和 1.72倍。 3照射后淋巴细胞出现大量凋亡 ;用 GM CSF和 GM CSF+IL 3后能明显抑制照射引起的淋巴细胞凋亡 ,两组淋巴细胞凋亡率分别降低到照射对照组的 4 1%和 4 8%。结论 一定剂量的 GM CSF或 GM CSF+IL 3能明显抑制照射引起的?

绿色荧光蛋白基因mRNA反义寡核苷酸的筛选和应用

基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNaseH分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值.

宫血宁对小鼠骨髓细胞因子表达的影响

目的:探索宫血宁口服给药对小鼠骨髓造血细胞细胞因子表达的影响。方法:基因芯片法分析小鼠骨髓中细胞因子及其受体的表达。结果:通过比较给药组与对照组小鼠骨髓cDNA与80条基因片段的杂交信号强弱,发现有17条基因在给药组的小鼠骨髓细胞中表达升高,这17条表达差异的基因涉及到造血、炎症、免疫与应激四个方面。结论:重楼皂甙在体内不仅具有激活成熟造血细胞的作用(如诱导血小板聚集),还能增加骨髓细胞造血因子的表达,促进外周血白细胞和血小板的生成;参与局部炎症组织的修复;增强小鼠的体液免疫和细胞免疫作用。

10-23型DNA酶作为鉴定mRNA靶点有效性的新工具

10-23DNA酶是能主动切割mRNA的一类反义寡核苷酸.利用10-23DNA酶的直接切割作用验证mRNA结构靶点的有效性.对筛选的绿色荧光蛋白(GFP)基因mRNA的4个靶点平行设计了4条反义寡核苷酸和4条10-23DNA酶,对照组反义寡核苷酸将最佳靶点——靶点2的反义寡核苷酸突变2个碱基,对照组10-23DNA酶将靶点2的10-23DNA酶结合臂中央突变2个碱基.体外4条10-23DNA酶切割mRNA的结果和相应的4条反义寡核苷酸依赖的RNaseH降解结果完全相似,细胞内4条10-23DNA酶对绿色荧光蛋白的表达抑制作用与相应的4条反义寡核苷酸相似,表明10-23DNA酶显示的最佳作用靶点同样是最佳作用效果的反义寡核苷酸结合靶.10-23DNA酶可以作为评价mRNA结构靶点有效性的新工具.

丙型肝炎病毒特异性核酶对HepG2.9706细胞HCV5′NCR基因表达的抑制作用

为探讨锤头型核酶抗丙型肝炎病毒的作用 ,根据HCV 5′NCR及翻译起始区的二级结构 ,设计及合成了 1个锤头型核酶RzA .将其插入pCI neo表达载体的多克隆位点 ,构建了表达RzA的质粒pHCV RzA .采用转基因细胞模型HepG2 970 6细胞 ,评价了pHCV RzA质粒对HCV 5′NCR调控荧光素酶表达的抑制活性 .结果表明 ,在HepG2 970 6细胞中 ,pHCV RzA以序列特异性、剂量依赖性方式抑制荧光素酶基因的表达 ,抑制率达 80 % ,提示核酶有可能作为HCV感染基因治疗的一种有效途径 .

重组人粒细胞集落刺激因子对照射小鼠造血功能的影响

为研究重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对急性放射病的治疗作用，观察了不同剂量的ｒｈＧ－ＣＳＦ对６．５Ｇｙ照射小鼠造血恢复的影响。结果表明，予受照小鼠每日ｒｈＧ·ＣＳＦ１．２５、２．５０及５．００μｇ治疗后，外周血白细胞、红细胞及血小板的恢复明显加快，以５．００Ｖｇ剂量组效果为最佳；照射后１０ｄ骨＊及脾脏ＣＦＵ＋ＧＭ、暴增型红系祖细胞集落（ＢＦＵ－Ｅ）及混合型祖细胞集落（ＣＦＵ·Ｍｉｘ）含量及生成率均明显高于对照组，并具有剂量相关性；内源性脾结节数随给药剂量的加大而增加。表明ｒｈＧ－ＣＳＦ不仅能加速粒系造血恢复，而且对红系及巨核系造血恢复也有明显的促进作用，因而有希望成为放射病治疗药物之一。

干细胞因子信号传导的研究进展

干细胞因子 (stem cell factor,SCF)通过与其受体 c- kit结合发挥生物学作用。本文综述了 JAK/STAT家族的JAK2、STAT1、STAT3、STAT5 ,Src家族的 L yn、Fyn、L ck在 SCF信号传导的

基因药物研究现状和对策

生物技术药物以人类体细胞的基因组、转录本组和蛋白质组三个层次生物大分子为目标 ,基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两类生物大分子 .mRNA从结构上考虑是研发核酸药物的最理想靶标和策略之一 .反义寡核苷酸、特异水解基因mRNA的核酸酶(ribozyme和DNAzyme)以及具有干扰作用的双链RNA(siRNA)是药物设计的策略之二 .mRNA结构靶点研究是研发反mRNA基因药物的基础 ,mRNA分子具有高度折叠的二级及三级结构 ,阐明其可及性位点 ,筛选其结构靶位点序列是关键 .近年研究报道的靶点筛选有约 7种mRNA的实测新技术 ,以及计算机辅助软件预测分析 .但发展分子生物学实验新技术以分析、确认靶点是药物研发策略之三 .

蛋白质芯片的研究进展

蛋白质芯片是近年来兴起的生物检测技术。本文简要综述了该技术的发展概况、基本原理及在基础研究和疾病诊断中的初步应用 。

低分子量硫酸葡聚糖对小鼠造血干细胞动员作用的研究

给小鼠静脉注射低分子量（＜１０￣４ｕ）硫酸葡聚糖（ＤＳ）１５ｍｇ／ｋｇ后外周血中白细胞、单个核细胞（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｋ，ＭＮＣ）、ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ产率等指标出现时相性变化。给药后１ｈ开始升高，２ｈ达到高峰、分别为药前值的２．２、２．６、３．８、４．４和３．０倍，７ｈ时趋向正常。给药后２ｈ上述各类细胞在外周血中的含量随着ＤＳ的剂量增加而增加。白细胞、ＭＮＣ计数在ＤＳ１８０ｍｇ／ｋｇ时达到峰值，均为对照组的４倍。２４０ｍｇ／ｋ８时未见明显增加。不同剂量ＤＳ对各系祖细胞均有不同程度的动员作用，ＤＳ剂量１５－３０ｍｇ／ｋｇ效果最好，每升血中ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｍｉｘ的数量分别相当于对照组的５．０、１１．９和８．８倍。其峰值出现时间与白细胞、ＭＮＣ不同，表明ＤＳ对不同类型细胞的作用机制也不尽一致。经口给小鼠投以ＤＳ２４０和４８ｏｍｇ／ｋｇ后，未见外周血中白细胞、ＭＮＣ计数有显著性升高，提示对造血干细胞没有动员作用。

基因重组人血红蛋白的纯化

目的 :探索重组人血红蛋白的纯化方法。方法 :将α、β珠蛋白串联基因克隆进 pBV2 2 0表达载体 ,获得了高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 2 0 %左右。该表达产物以包涵体形式存在 ,包涵体经洗涤后 ,用 8mol/L尿素溶解 ,先用Q SepharoseFastFlow阴离子交换纯化后 ,又经Sephacryl 10 0凝胶过滤纯化。 结果 :经两步纯化后重组人血红蛋白的纯度达 90 %左右。纯化产物经复性 ,具有与氧结合的能力。结论