猪伪狂犬病诊断方法与疫苗研究进展

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)可引起妊娠母猪繁殖障碍和新生仔猪神经症状,可感染人类并引起脑炎,使感染者出现严重的神经症状,直接危害人类健康,因此对该病的研究具有重大意义。近年该病在世界范围内广泛分布,对世界养猪业造成了巨大的经济损失,受到国内外学者的高度关注,对该病的研究也日益深入,在诊断方法及防控机制等方面取得了重要进展。论文就近年来猪伪狂犬病诊断方法及疫苗的发展进行综述,以期为在猪伪狂犬病诊断方法和疫苗选择上提供参考。

猪伪狂犬病病毒感染及复制影响因素的研究

猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起猪的病毒性传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失。猪作为PRV唯一的自然宿主,可引起母猪产死胎、木乃伊胎和屡配不孕;公猪睾丸萎缩、精液质量下降,丧失种用功能;新生仔猪高热、出现神经症状且两周龄以内的仔猪病死率可达100%[1]。2011年之前,由于Bartha-K61株疫苗在我国的广泛使用,PR在我国得到了较好的控制。但自从2011年PRV出现变异之后,现有的PR商品化疫苗只能对动物机体提供部分的免疫保护作用并且尚无特效药物治疗[2]。基于此,本文对影响PRV感染与复制的各类因素的最新研究进展作综述,以期为开发高效抗PRV的新型药物或疫苗提供参考依据。

日本脑炎病毒免疫逃逸分子机制研究进展

日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的一种蚊媒性人兽共患传染病,虽然已有商品化疫苗,但疫苗的预防具有一定的局限性且至今尚无有效药物治疗,一旦暴发将威胁人们的生命健康和公共安全,造成重大经济损失。JEV含有数量众多具有免疫逃逸功能的编码蛋白,这些蛋白逃逸宿主免疫功能的机制多样且复杂,但其机制仍不完全清楚。同时,JEV复杂的免疫逃逸机制可能是阻碍疫苗免疫保护效果的关键因素。因此,本文主要对JEV通过抑制干扰素反应,调节细胞凋亡、焦亡、自噬及宿主miRNA等多种途径逃逸机体先天免疫和适应性免疫机制进行概述,以期为JEV致病机理的研究和疫苗研发提供思路与理论基础。

中西结合治疗摩拉斗牛哮喘兼前胃弛缓

牛哮喘病是养牛生产中常见的一种病症,多发于抵抗力较差的犊牛或瘦弱牛,主要由于天气寒冷、环境恶劣、机械因素以及呼吸道感染(病毒、细菌、支原体、寄生虫等)导致呼吸道黏膜发生炎症而发病,严重时可引起牛的死亡。牛前胃驰缓是神经体液调节机能絮乱。

JEV感染对小鼠睾丸间质细胞信号通路、炎症因子及睾酮分泌影响的研究

为探究日本乙型脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞(LC)后对其信号通路、炎症反应和睾酮分泌水平的影响,本研究以MOI 1的JEV感染小鼠LC(TM3细胞)后不同时间采用荧光定量PCR(qPCR)检测TM3细胞中Toll样受体3(TLR3)、维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-I)、NF-κB及干扰素调节因子3(IRF3)信号通路相关蛋白基因mRNA的转录水平并确定JEV的最佳感染时间。结果显示,与空白对照组相比,JEV感染后12 h各蛋白基因mRNA的转录水平均显著升高(P<0.05),随着JEV感染时间的延长各蛋白基因mRNA转录水平逐渐降低至与空白对照组无显著差异,因此选择12 h作为后续JEV感染细胞的最佳时间。将JEV感染TM3细胞12 h后,采用western blot检测TM3细胞中TLR3、RIG-I、其下游信号通路相关蛋白NF-κB、IRF3及NF-κB和IRF3的磷酸化水平;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测TM3细胞中NF-κB和IRF3蛋白的入核;通过间接ELISA检测TM3细胞中睾酮的分泌水平。Western blot结果显示,JEV感染TM3细胞后12 h TLR3、RIG-I、NF-κB、IRF3蛋白的表达及NF-κB、IRF3的磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。IFA结果显示,空白对照组细胞核形态完整,绿色荧光均弥散分布于细胞和细胞质之中,而JEV感染后12 h出现CPE的TM3细胞核溶解和破碎,有些细胞核变形,绿色荧光出现在细胞核中,且荧光信号明显增强。ELISA结果显示,JEV感染后12 h TM3细胞上清中IL-6、IFN-β分泌水平极显著升高(P<0.01),睾酮分泌水平显著下降(P<0.05)。利用TLR3和RIG-I siRNA转染TM3细胞,以干扰TLR3和RIG-I的表达,采用western blot检测这两个siRNA分别对TLR3和RIG-I的干扰效果;干扰TLR3和RIG-I表达后以MOI 1的JEV感染TM3细胞,12 h后经ELISA检测细胞上清中IL-6、IFN-β和睾酮的分泌水平。SiRNA干扰试验结果显示,与空白对照细胞及转染siNC的细胞相比,目的基因siRNA转染的TM3细胞中TLR3和RIG-I蛋白的表达水平均极显著降低(P<0.01);ELISA结果显示,与JEV感染的细胞相比,siRNA+JEV组细胞中IL-6和IFN-β的含量显著或者极显著降低(IL-6:P<0.05;IFN-β:P<0.01),睾酮分泌水平显著升高(P<0.05)。上述结果表明JEV感染TM3细胞后能够通过刺激TLR3、RIG-I的表达,激活NF-κB和IRF3信号通路,诱导NF-κB和IRF3的磷酸化并入核,刺激细胞炎症因子和干扰素的分泌并降低睾酮的分泌水平。本研究为深入探究JEV感染LC后引起雄性动物生殖障碍的机制奠定了基础。

一株长颈鹿金黄色葡萄球菌感染的分离鉴定

最近几年来葡萄球菌感染现象急剧升高引起人们的广泛关注,自然环境中极为广泛地分布着葡萄球菌,细菌能透过多个途径传染,裂开、受损皮肤,黏膜是主要的入侵途径。严重时可造成菌血症、败血症。在葡萄球菌属中,金黄色葡萄球菌是一种最主要的病原体。

一例长颈鹿支原体感染的诊断

支原体又称霉形体,天然无细胞壁,细胞柔软,高度多形性,其大小介于细菌和病毒之间,具有三层膜结构,可通过200~450纳米孔径的滤膜,以二分裂方式生长繁殖,在液体或固体培养基中生长较慢,一般在5%CO_(2)细菌培养箱中培养3~7天,染色其形状呈典型的“油煎蛋”样,革兰氏染色阴性但着色效果不佳,姬姆萨染色良好。支原体于1961年在美国首次于病牛患有乳腺炎的病料中分离出,我国在1983年首次在患有牛乳腺炎的牛奶中分离到牛支原体。

日本脑炎病毒复制及感染影响因素的研究进展

日本脑炎(Japanese encephalitis,JE)是一种蚊媒传播的自然疫源性人畜共患传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失,还能感染人类。日本脑炎简称“乙脑”,其病原为日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),是动物疫病防控中最重要的传染病之一。目前,防控JEV的有效措施为生物预防及疫苗免疫。然而,由于JEV存在猪-蚊-人的传播途径,给该病的防控带来严峻挑战,现有的JE商品疫苗只能对动物机体提供部分保护。目前也无有效的抗JEV的药物,抗JEV的有效药物开发成为研究的热点。基于此,本文对影响JEV复制与感染的各类因素的最新研究进展进行综述,以期为开发高效防制JE的新型药品提供参考依据。

猪日本乙型脑炎病毒新型检测方法研究进展

日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是人兽共患病日本乙型脑炎的病原,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。因此,建立快速可靠的JEV检测方法,有利于及时检测JEV和采取措施防控日本乙型脑炎。本文总结了近年来检测JEV的新型方法,包括分子生物学检测、免疫学检测、生物传感器检测等技术,以期为有效诊断及防治JEV感染提供技术指导。

检测PRRSV及鉴别HP-PRRSV毒株的二重PCR与二重TaqMan荧光定量PCR方法

为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M基因和HP-PRRSV Nsp2基因设计特异性引物和探针,优化反应条件建立二重TaqMan荧光定量PCR方法,并评估这2种方法的敏感性、特异性、重复性。敏感性试验结果显示:二重PCR方法的检测下限分别为0.058 ng/μL(PRRSV)和4.7 ng/μL(HP-PRRSV);二重TaqMan荧光PCR方法的检测下限分别为10 copies/μL(PRRSV)和100 copies/μL(HP-PRRSV)。这2种方法与其他猪病病原均不发生非特异性反应,重复性试验结果良好。经131份临床样品检测,可得到PRRSV的阳性率约12.2%(16/131)、HP-PRRSV的阳性率约17.6%(23/131)、二者的混合感染率约8.4%(11/131)。证实,本研究成功建立了二重PCR和二重TaqMan荧光定量PCR检测方法,可为临床上猪繁殖与呼吸综合征的防控提供技术支持。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对宿主细胞信号转导通路影响的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的病原,能够引起猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病,目前尚未完全了解其致病机制。近年来,人们对于PRRSV感染后引起的相关信号通路变化进行了深入研究,许多信号通路传导机制不断被阐释,但仍缺乏系统性的探究,通过对PRRSV感染宿主后引起的相关信号通路变化研究做综述总结,以期为PRRSV研究提供新的思路。