祖师麻皮肤刺激性观察和基于生物信息学的机制预测

目的:观察祖师麻干浸膏粉及不同萃取部位的皮肤刺激性,并基于生物信息学预测其刺激性成分及作用机制。方法:将斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分为完整皮肤组和破损皮肤组,观察连续给药7 d和停药后3 d皮肤状况。运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)查询祖师麻刺激性成分和作用靶点。通过GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等数据库收集疾病靶点。运用Metascape平台进行基因本体(GO)富集以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,将核心靶点与祖师麻刺激性成分进行分子对接。结果:祖师麻干浸膏粉低、中剂量组对破损皮肤有轻微红斑、水肿反应;祖师麻干浸膏粉高剂量组、石油醚部位和二氯甲烷部位对完整皮肤和破损皮肤均有轻微红斑、水肿反应;乙酸乙酯部位和水层部位均无红斑、水肿反应。2)从祖师麻活性成分中筛选出7种刺激性成分,通路富集的主要通路为磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、细胞增殖的肉瘤基因(Ras)信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、端粒结合蛋白(Rap1)信号通路和松弛素(Relaxin)信号通路等。分子对接结果中瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚与核心靶点的结合最稳定。结论:祖师麻干浸膏粉高剂量下有轻微皮肤刺激性,可能是存在于石油醚和二氯甲烷部位中的瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚等通过多靶点、多通路的复杂作用促进炎症介质的生成,引起皮肤轻微红斑和水肿。

祖师麻膏药及不同萃取部位多次给药皮肤刺激性和过敏性试验研究

目的观察祖师麻膏药及其不同萃取部位多次给药对皮肤的刺激性和过敏性,并探索刺激性或过敏性成分存在部位。方法SD大鼠随机分为完整皮肤组和破损皮肤组,将祖师麻膏药及其不同萃取部位涂于右侧脱毛区,左侧为对照,连续给药7 d,观察给药7 d和停药后72 h皮肤状况并记录。白色豚鼠随机分为正常对照组、阳性对照组、祖师麻膏药组、石油醚组、二氯甲烷组、乙酸乙酯组、水层组,于第0、7、14天右侧脱毛皮肤给药致敏,第28天左侧脱毛皮肤给药激发,观察是否引起过敏性反应。结果祖师麻膏药、石油醚、二氯甲烷部位完整皮肤组和破损皮肤组均出现轻微红斑、水肿反应,乙酸乙酯部位、水层部位完整皮肤组和破损皮肤组均无红斑、水肿反应。豚鼠皮肤过敏性试验各组皮肤均未出现明显红斑、水肿等过敏性反应。结论祖师麻膏药具有轻微刺激性,无过敏性,刺激性成分可能存在于石油醚部位和二氯甲烷部位。

野生黄瑞香种子的休眠机制与破除方法

【目的】祁连山野生的黄瑞香生长在海拔2 500~2 600 m左右的半荫半阳的缓坡地带,为适应祁连山寒冷的冬季和凉爽的夏季气候,黄瑞香种子具有较强的休眠特性。探寻破除黄瑞香种子休眠的方法,可为其种子人工繁殖提供理论依据与技术支持。【方法】采用种子萌发抑制物的生物学鉴定、激素溶液浸种、低温层积、干藏等不同处理方法对黄瑞香种子的休眠类型、休眠原因及其破眠方法进行研究。【结果】1)新采收的黄瑞香种子生活力为84.6%,但不萌发,具有显著的休眠现象。种子吸水过程符合Logistic曲线,其种皮对种子吸水无严重阻碍作用。2)黄瑞香种子种皮和胚的醇提液、水提液对白菜种子的发芽率和胚根长均有不同程度的抑制作用。外种皮的水提液对白菜种子萌发和胚根长的抑制作用在相同浓度条件下比醇提液明显;种胚的醇提液和水提液在0.1,0.15 g·m L^(-1)的浓度下完全抑制白菜种子萌发,在0.05 g·m L^(-1)浓度下种胚的水提液对白菜种子萌发和胚根长的抑制作用显著低于醇提液;内种皮的醇提液在低浓度条件时已对白菜种子的萌发和胚根的伸长产生极其明显的抑制作用,但内种皮的水提液无论浓度高低对白菜种子的萌发抑制作用均较小。这些结果说明黄瑞香种子外种皮中存在的水溶性萌发抑制物、种胚中溶于有机溶剂和水的萌发抑制物、内种皮中溶于有机溶剂的萌发抑制物的共同作用是其种子休眠的主要原因。3)黄瑞香种皮的电镜结构显示未处理的种子的种皮表面细胞排列较规则紧密,种皮中长柱状细胞构成栅栏组织;经5℃温度条件下层积90天后,种皮表面已出现较多的"蚁穴"状孔洞,有利于种子萌发。【结论】将新采收的黄瑞香种子进行GA3和6-BA溶液浸种、低温干藏和暖温干藏处理,均不能有效提高黄瑞香种子的萌发,经5℃湿沙层积90天后黄瑞香种子萌发率近80%。新采收的黄瑞香种子为综合性休眠。

祖师麻膏药质量标准的提高研究

目的提高祖师麻膏药的质量标准。方法采用薄层色谱法对祖师麻膏药中祖师麻甲素和7-羟基香豆素进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对祖师麻膏药中祖师麻甲素和7-羟基香豆素进行含量测定，色谱柱为AgilentEclipsePlusC18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0．1％磷酸水溶液（15：85，v／v），流速为1mL／min，检测波长为327nm，柱温为30℃。结果样品中检出祖师麻甲素和7-羟基香豆素的特征斑点，图谱斑点清晰、专属性强，阴性对照无干扰。祖师麻甲素和7-羟基香豆素分别在0．180～1．800μg和0．100～1．00μg范围内与其峰面积呈良好线性关系（r=0．9991，r=0．9992），平均加样回收率分别为98．99％、101．48％，RSD分别为1．43％、1．32％（n=9）。结论所建立的提高标准方法简便准确，专属性强，可用于该制剂的质量控制。

层积时间和深度及贮藏年限对黄瑞香种子萌发的影响

为了找到探索有效打破黄瑞香种子休眠、提高种子发芽率的方法,以黄瑞香种子为试材,研究3种不同层积期、4种不同层积深度以及不同贮藏年限对黄瑞香种子发芽率的影响。结果表明,贮藏1 a或2 a对黄瑞香种子发芽率的影响差异不显著;不同层积期、不同层积深度对黄瑞香种子发芽率有显著影响。层积期10月20日发芽率最高,11月9日发芽率最低;层积深度80 cm效果最好,40 cm发芽率最低;黄瑞香种子生理休眠属深度生理休眠。由于各因素间对打破种子休眠无交互作用,因此层积期为1 0月20日至10月30日、层积深度为60~100 cm,可获得较高的发芽率。

祖师麻(黄瑞香)种子休眠原因初探

研究祖师麻(黄瑞香)种子抑制物质的存在部位和吸水规律,以期为种子人工繁育祖师麻(黄瑞香)提供依据。结果表明,黄瑞香果实各组分中所含抑制物不同,果肉中抑制物含量最高,对白菜种子发芽抑制作用最为明显,其他部位含量较少,对白菜种子发芽没有明显的抑制作用;破除种皮的祖师麻(黄瑞香)种子吸水表现为明显的S型吸水曲线,22h后吸水逐渐平稳,吸水率达48.1%。CK的吸水一直低而平稳,没表现S型吸水规律,22h后吸水率仅为33.4%。

赤霉素、6-苄氨基腺嘌呤浸种对祖师麻原植物黄瑞香种子萌发的影响

目的探讨赤霉素(GA3)和6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)促进祖师麻原植物黄瑞香种子萌发的最佳浓度与时间,为黄瑞香人工栽培提供理论依据。方法以黄瑞香种子为试材,在不同质量浓度的GA3(0,100,200,300,400,500 mg/L)与不同浸种时间(8,16,24 h)和不同质量浓度的6-BA(0,25,50,75,100,125 mg/L)与不同浸种时间(8,16,24 h)下,测定黄瑞香种子的发芽率和发芽势。结果 200 mg/L的GA3溶液浸种16 h时,黄瑞香种子发芽率最高,为7.33%,比对照增加了5.33%,和其他处理组合比较差异有统计意义;25 mg/L的6-BA溶液浸种16 h时,黄瑞香种子发芽率最高,为6.33%,比对照增加了4.66%,和其他处理组合间比较差异有统计意义。结论 200 mg/L的GA3溶液浸种16 h或25 mg/L的6-BA溶液浸种16 h时,黄瑞香种子发芽率最高。

不同沙藏时间和发芽床对祖师麻原植物黄瑞香种子萌发的影响

研究不同沙藏时间、发芽床对黄瑞香种子萌发的影响,为黄瑞香驯化栽培提供理论依据.采用完全随机设计,在5-10℃低温条件下分别沙藏20d、35d、50d、65d、80d、95d,沙藏后用穴盘进行发芽试验;选用平纸床、皱纸床、沙床、穴盘四种不同的发芽床,在200μL.L-1GA3和25μL.L-16-BA混合液中浸种16h后进行发芽试验.结果表明:低温沙藏80d发芽率最高为20.47%,20d最低为0%;平纸床的发芽率最高为7.8%;沙床中的发芽率最低为0%.

祖师麻膏药质量标准研究

目的:建立祖师麻膏药质量标准。方法:采用TLC法鉴别祖师麻膏药中祖师麻药材;采用HPLC法测定紫丁香苷的含量。色谱条件:Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-水(8∶92)为流动相,流速1.0ml/min,柱温为室温,检测波长223nm。结果:定性鉴别薄层色谱特征明显;紫丁香苷在0.064～1.28μg范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为99.2%,RSD为1.59%(n=6)。结论:本法可以准确地进行定性、定量检测,有效地控制该制剂的质量。

不同种子破眠方法对黄瑞香出苗的影响

[目的]研究种子不同破眠方法对黄瑞香出苗的影响,为黄瑞香种苗人工繁育提供理论依据。[方法]试验设4个处理,分别为种子窖内沙藏层积80 d(T1)、浓硫酸酸蚀种子60 min后用200 mg/L赤霉素溶液+25 mg/L 6-BA浸种8 h(T2)、种子深埋沙藏层积170 d(T3)、用清水浸泡种子16 h(CK)。种子处理后在温室内用穴盘进行育苗试验。[结果]T3成苗率最高,为51.27%,其次为T1,T2成苗率较低,分别为39.34%和7.79%,CK的成苗率最低为0。[结论]深埋沙藏层积是打破黄瑞香种子休眠最有效的方法。

黄瑞香种子生活力测定技术研究

根据种子生活力的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色机理,探讨了染色温度、时间、种子处理方式对黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)种子胚染色效果的影响,并对不同采种时间的黄瑞香种子生活力进行了测定与比较,以筛选鉴别种子生活力的最佳反应条件。结果表明:黄瑞香种子生活力检测可用如下方法:黄瑞香去除种皮,加入磷酸缓冲液配制成0.5%的TTC溶液,在45℃恒温条件下保持反应6 h,观察胚部染色状态,呈红色者为具有活力的种子,反之为失活种子。采用以上方法对不同采种时间的黄瑞香种子生活力变化情况进行初步研究,确定了当年采收的种子生活力可达到94.5%,贮藏1年和2年后,生活力分别下降了54%和72%。

浓硫酸处理对黄瑞香种子萌发的影响

将黄瑞香种子置于浓硫酸中分别酸蚀20、30、40、50、60、70、80 min,然后用200 mg/L赤霉素浸种24 h后置于穴盘中发芽,测定种子发芽率和发芽势,研究浓硫酸酸蚀时间对黄瑞香种子萌发的影响。结果表明,浓硫酸酸蚀对黄瑞香种子萌发有促进作用,不同酸蚀时间种子发芽率和发芽势均有明显差异,以酸蚀60 min效果最佳,发芽率达24.22%,发芽势达16.29%。

祖师麻抗炎、镇痛作用的谱效关系研究

目的:建立祖师麻色谱指纹图谱,探究祖师麻抗炎、镇痛作用的谱效关系,为祖师麻抗炎、镇痛作用的物质基础研究提供参考。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法建立祖师麻的指纹图谱,利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行色谱图相似度评价;与对照品比对确定7-羟基香豆素、木犀草素、芫花素、紫丁香苷、祖师麻甲素、7、8-二甲氧基香豆素在色谱指纹图谱中的位置。利用耳肿胀试验和冰醋酸扭体试验分别得到祖师麻的肿胀抑制率和疼痛抑制率,采用偏最小二乘回归分析法和灰色关联法分析祖师麻抗炎、镇痛作用的物质基础。结果:从祖师麻指纹图谱中共指认出19个共有峰。其中4号峰为7-羟基香豆素,9号峰为祖师麻甲素,11号峰为紫丁香苷,15号峰为7、8-二甲氧基香豆素,16号峰为木犀草素,19号峰为芫花素。偏最小二乘法分析表明,祖师麻发挥抗炎作用的物质是1、6、9、10、19号峰所代表的化合物,发挥镇痛作用的物质是1、7、9、12、16、17、18、19号峰所代表的化合物;灰色关联法分析表明,祖师麻发挥抗炎作用的物质是11和19号峰所代表的化合物,发挥镇痛作用的物质是8、9、11、14、18、19号峰所代表的化合物。结论:祖师麻发挥抗炎作用的主要物质基础为19号峰(芫花素),发挥镇痛作用的主要物质基础为9(祖师麻甲素)、19(芫花素)和18号峰化合物所代表的化合物。

工艺变更对祖师麻关节止痛膏体外释放及经皮渗透的影响

目的:考察祖师麻关节止痛膏生产工艺由溶剂法改成热压法后对产品体外动力学行为的影响。方法:采用溶剂法和热压法制备3批中试以上规模的样品,采用改良Franz扩散池法考察祖师麻关节止痛膏中指标成分(祖师麻甲素、水杨酸甲酯)的体外释放和经皮渗透情况。结果:溶剂法样品中祖师麻甲素、水杨酸甲酯的质量分别为73.72,494.67μg/贴;热压法样品中二者质量则分别为159.21,2 638.99μg/贴。溶剂法样品中祖师麻甲素、水杨酸甲酯的24 h平均累积释放量分别为2.04,12.21μg;热压法样品中二者的24 h平均累积释放量分别为2.16,36.24μg。溶剂法样品中祖师麻甲素、水杨酸甲酯的24 h平均累积透过量分别为0.38,2.79μg;热压法样品中二者的24 h平均累积透过量分别为0.40,7.49μg。热压法样品中祖师麻甲素的24 h累积释放量、累积透过量与溶剂法样品接近,无统计学差异;热压法样品中水杨酸甲酯的24 h累积释放量、累积透过量显著高于溶剂法样品(P<0.05)。结论:热压法对祖师麻关节止痛膏中祖师麻甲素、水杨酸甲酯的保留优于溶剂法,工艺变更对该制剂中祖师麻甲素体外动力学影响不显著,但由溶剂法改成热压法后,祖师麻关节止痛膏中水杨酸甲酯具有更高的累积释放量和累积透过量。

不同处理对祖师麻基源植物黄瑞香种子萌发特性的影响

以黄瑞香种子为试材,通过对黄瑞香种子形态和萌发特性的研究,寻找打破种子休眠、提高种子萌发率的适宜条件。观察种子外部形态,对黄瑞香种子千粒质量、饱满度、含水量、生活力和吸水率等多项指标进行测定,对黄瑞香种子分别进行化学物质处理、低温层积和热水处理,分析不同层积时间、不同质量浓度化学物质、不同萌发介质处理对种子萌发率的影响。结果表明:黄瑞香种子含水量为7.12%,带外种皮的种子吸水率为33.4%,去除外种皮的种子吸水率为60.3%;化学物质处理和热水处理不能完全打破黄瑞香种子休眠;化学物质结合低温层积处理70d种子萌发率为64.93%;平纸床和皱纸床介质上的发芽率分别为65.8%和53.2%。种皮不是限制种子萌发的主要因素,用200mg/L GA3和25mg/L 6-BA混合溶液浸种10h后结合70d低温层积处理可显著提高种子萌发率,种子萌发最佳发芽介质为平纸床。

祖师麻基源植物黄瑞香种子休眠与萌发特性研究

研究祖师麻基原植物黄瑞香种子休眠与萌发特性,以期为黄瑞香种子人工繁育提供依据。以祖师麻基原植物黄瑞香种子为材料,研究了浓硫酸、GA3与6-BA对黄瑞香种子萌发的影响,不同层积时间对黄瑞香种子萌发的影响。结果表明,98%浓硫酸酸蚀60min时,黄瑞香种子的发芽率较高,达16.29%;6mg/L 6B-A+250mg/L GA3处理种子,发芽率最高,达17.527%;低温层积60d以后,随着层积时间的延长,黄瑞香种子发芽率大幅上升,层积125d时,发芽率高达33.64%。综合分析,GA3与6-BA及浓硫酸处理种子虽能释放休眠,但均不能有效的破除休眠;低温层积可有效打破黄瑞香种子休眠。黄瑞香种子休眠属复合休眠,低温层积处理可有效促进种子萌发。