卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1对卵巢颗粒细胞的调控

目的探讨卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1(SIRT1)对卵巢颗粒细胞的调控。方法本研究纳入行IVF/ICSI-ET助孕的女性共60例,其中卵巢低反应(POR)组和卵巢正常反应(NOR)组各30例。采用密度梯度离心法分离纯化卵泡液中的颗粒细胞。分别使用SIRT1激动剂白藜芦醇(RESV)或抑制剂EX527处理POR组颗粒细胞,对照组为不使用药物处理的颗粒细胞。采用qPCR检测颗粒细胞SIRT1和类固醇激素合成关键酶(StAR、CYP19、CYP17)的mRNA水平。采用Western blot检测颗粒细胞SIRT1、类固醇激素合成关键酶蛋白和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3)的水平。TUNEL法检测颗粒细胞的凋亡率。化学发光法检测颗粒细胞培养液中雌二醇水平。结果POR组颗粒细胞SIRT1 mRNA和蛋白水平低于NOR组(P=0.003,P<0.001)。RESV上调SIRT1 mRNA和蛋白水平(P<0.001),上调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平(P<0.05),EX527下调SIRT1 mRNA和蛋白水平(P=0.023、0.001),下调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平(P<0.05)。RESV作用颗粒细胞后,细胞凋亡率降低(P=0.000),Bcl-2蛋白水平上升(P<0.001),Caspase-3蛋白水平下降(P<0.001);EX527作用颗粒细胞后,细胞凋亡率升高(P<0.001),Bcl-2蛋白水平下降(P=0.003),Caspase-3蛋白水平上升(P<0.001)。结论POR女性颗粒细胞SIRT1水平低于NOR女性。RESV增加SIRT1表达。SIRT1抑制颗粒细胞凋亡,提高类固醇激素合成关键酶水平,促进颗粒细胞合成雌二醇。因此,SIRT1激活剂如RESV可能成为改善POR女性卵巢反应性,增加获卵数的治疗药物。

IVF-ET中注射HCG后不同授精时间对受精结局的影响

目的:研究在IVF-ET中HCG注射后的授精时间对胚胎发育和临床结局的影响,分析最佳授精时间,为优化IVF-ET实验室操作规程和改善临床妊娠结局提供基础和实验依据。方法:选取2016年1月~2018年8月期间,女方年龄≤38岁、因输卵管因素不孕在本中心行IVF-ET助孕的1140例周期进行回顾性分析。根据HCG注射后不同的授精时间分组:注射HCG后38~39 h授精为A组、注射HCG后39~40 h授精为B组、注射HCG后40~41 h授精为C组、注射HCG后41~42 h授精为D组,对各组一般情况、实验室指标(2PN卵裂率、正常受精率、优质胚胎率、可利用胚胎率)和临床指标(胚胎着床率、早期流产率、临床妊娠率)进行比较分析;同时分析在最佳授精时间内进行IVF-ET助孕患者的促排方案对其受精结局的影响。结果:分析各组2PN卵裂率、胚胎着床率、可利用胚胎率、早期流产率和临床妊娠率,差异均无统计学意义(P>0.05);正常受精率:A组(65.9%)<B组(67.8%)<C组(70.1%)<D组(71.6%),其差异有统计学意义(P<0.05);优质胚胎率:A组(33.9%)<B组(39.5%)<C组(41.8%)<D组(44.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。在D组患者促排方案中正常受精率:拮抗剂方案(78.1%)>超长方案(72.3%)>长方案(69.6%),其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)本中心行IVF-ET助孕患者的最佳授精时间为HCG注射后41~42 h,此时患者受精有较高的临床妊娠率和较低的流产率,可获得更好的临床结局;且正常受精率和优质胚胎率随注射HCG后授精时间延长而呈现上升的趋势;(2)本中心IVF-ET助孕患者在HCG注射后41~42 h范围内,其拮抗剂方案优于长方案和超长方案。

海南地区718例男性不育患者AZF基因微缺失研究

目的研究Y染色体AZF基因微缺失与男性不育的关系。方法应用多重PCR对718例男性不育患者进行Y染色体AZFa、AZFb、AZFc和AZFd基因的18个位点进行检测。结果 228例特发性无精症患者中有4例缺失,占1.7%;209例严重少精子症患者中有17例缺失,占8.1%;其余281例少弱精子症患者中有8例缺失,占2.8%。结论在男性不育症患者中,Y染色体AZF基因微缺失是男性不育发生的重要原因之一,基因检测可为患者的诊断、治疗及遗传咨询提供理论依据。

处理后前向运动精子总数对夫精宫腔内人工授精结局的影响

目的研究处理后前向运动精子总数(TPMSC)对促排卵周期夫精宫腔内人工授精(IUI)的临床结局的影响。方法回顾性分析行促排卵周期IUI治疗的4 179例患者的临床资料,分析临床妊娠率与处理后TPMSC的关系。结果所有患者的临床资料中TPMSC偶见活精至100×10~6。TPMSC<0.15×10~6有15例,有1例妊娠(IUI日精液处理后偶见活精);TPMSC>60×10~6有10例,均未妊娠。对TPMSC(0.15~60.00)×10~6的共4 154例病例进行分析。各组女性年龄、不孕年限、卵泡数、子宫内膜厚度的比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床妊娠率为13.5%(576/4 154),最高的组为(5.00~<10.00)×10~6(16.0%),各组的临床妊娠率比较差异无统计学意义(P=0.133)。结论处理后TPMSC在(0.15~60.00)×10~6行IUI均可达到较好的妊娠率。

环孢素A改善滋养细胞轻度受损小鼠囊胚的着床

目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)是否可以改善滋养细胞轻度受损的小鼠胚胎的着床。方法①将30只ICR小鼠腹腔注射CsA 5 mg/kg,采用化学发光法检测注射后1 h、3 h、4 h、6 h、8 h、10 h、13 h、14 h、16 h、20 h鼠体内CsA血药浓度变化情况;②将36只小鼠随机分为对照组和实验组,实验组腹腔注射CsA 5 mg/kg,对照组相同体质量下注射同等剂量橄榄油,根据Gardner评分结合实验需要将移植胚胎分为A、B、C三类,分类后胚胎分别移植至两组小鼠子宫,于交配后(days postcoitum,dpc)5.5 d时采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠胚胎着床率及着床部位白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)mRNA的表达情况。结果①小鼠体内CsA血药浓度在给药后6~10 h达到高峰;②B类胚胎在实验组小鼠中着床率[73.9%(34/46)]高于对照组[50.0%(23/46),P=0.018];③两组小鼠着床部位LIF mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论CsA给药剂量为5 mg/kg时,CsA可以改善滋养细胞形态上存在轻度受损的小鼠胚胎的着床;CsA可能成为提高IVF成功率的潜在药物。