大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及CM-DiI标记的实验研究

目的建立骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离纯化、扩增以及标记的方法,为后期体内实验提供依据。方法采用全骨髓培养和差速贴壁法分离纯化MSCs,培养期间观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记物,成脂成骨分化诱导鉴定。MSCs经氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-DiI)标记后,荧光显微镜观察荧光标记情况,流式细胞仪检测标记率,并通过绘制生长曲线明确CM-DiI对MSCs生长增殖的影响。结果 MSCs接种24～48 h后,贴壁细胞多为圆形、多角形、梭形,传至第3代时形态呈均一的长梭形。第3代MSCs高表达CD44,低表达CD106,不表达CD11b、CD45,85%以上细胞处于G0/G1期;成脂成骨诱导分别经油红O和茜素红染色均呈阳性。CM-DiI标记后荧光显微镜下细胞呈红色荧光,体外培养2周荧光未见明显减弱;流式细胞术检测显示标记率达95%以上,标记后细胞生长增殖不受影响。结论通过全骨髓贴壁法及其扩增后可获得大量纯度较高的间充质干细胞,CM-DiI标记是一种简单、稳定、无毒的细胞标记方法。

间充质干细胞在哮喘大鼠气道炎症及气道重塑中的作用

目的探讨间充质干细胞(MSCs)在哮喘大鼠慢性气道炎症及气道重塑中的作用。方法将18只SD雌性大鼠随机分为:正常对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只。卵清蛋白(OVA)致敏后,雾化吸入OVA制作哮喘模型。哮喘模型成功后,测定气道压力;通过HE染色、Image-Pro Plus图像分析软件分析大鼠气道平滑肌的嗜酸性粒细胞(ESO)浸润情况,测定支气管管腔的内周长、管壁面积,支气管平滑肌面积、平滑肌细胞核数;采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,通过流式细胞仪检测各组MSCs的含量,并分析其与哮喘气道炎症及气道重塑的关系。结果哮喘4周组、哮喘8周组大鼠的气道反应性、气道壁EOS计数、支气管管壁面积、支气管平滑肌面积、平滑肌细胞核数目、外周血中MSCs比例均较正常对照组显著增加(P<0.01,P<0.05);哮喘两组间上述指标差异均有统计学意义(P<0.01);Pearson线性相关显示:各组大鼠外周血单个核细胞中MSCs的含量与气道反应性、EOS浸润数、支气管壁面积、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数均呈正相关(P<0.01)。结论 MSCs在哮喘状态下含量增加,可能参与了哮喘的慢性气道炎症及气道重塑。

间充质干细胞与支气管哮喘

支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾患，同时也是一种免疫紊乱的变态反应性疾病，其发病机制复杂。间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，并且具有强大的免疫调节功能。MSCs这些独特性能将赋予它们在支气管哮喘治疗中的潜在价值。