(Z)-3-水杨酰肼羰基丙烯酸乙酯的合成

为进一步探讨双酰肼羧酸酯的合成方法,以水杨酸甲酯和水合肼为原料,首先合成了水杨酰肼,再与顺丁烯二酸酐反应,合成了(Z)-3-水杨酰肼羰基丙烯酸((Z)-H4shcpa).然后由(Z)-H4shcpa和FeCl3·6H2O进一步构造了金属冠醚体系.通过内部自催化反应,(Z)-H4shcpa发生酯化,经过SnCl2/HCl溶液还原体系处理,最终得到了乙酯化的产物(Z)-3-水杨酰肼羰基丙烯酸乙酯((Z)-H3eshcp).对目标化合物进行了IR、1H-NMR、13C-NMR和元素分析等表征,结果表明:通过内部自催化反应,经由金属冠醚体系,可以解决双酰肼羧酸乙酯的合成难题.

L-谷氨酸-5-乙酯及其金属配合物的合成、表征和催化活性

以L-谷氨酸为原料合成了L-谷氨酸-5-乙酯,并对其进行了X-射线单晶衍射测定.测量结果表明:L-谷氨酸-5-乙酯属单斜晶系,P2(1)空间群,其中a=9.691(3),b=5.2631(17),c=17.297(6);β=90.752(5)°.通过L-谷氨酸-5-乙酯分别与MgCl2.6H2O和Ca(OH)2反应,合成得到了Mg(II)和Ca(II)的金属配合物.比色法测试结果表明:L-谷氨酸-5-乙酯与镁和钙形成的配合物对三磷酸腺苷二钠的分解反应具有较好的活性.

N,N-二羧甲基-L-谷氨酸金属配合物的合成、表征和催化活性

以L-谷氨酸为原料合成了N,N-二羧甲基-L-谷氨酸(H2bcmga),并对其进行了元素分析、IR、UV-Vis和1HNMR表征.通过N,N-二羧甲基-L-谷氨酸与MgCl2.6H2O、Ca(OH)2、MnCl2.4H2O、NiCl2.6H2O、CoCl2.6H2O、CuCl2.2H2O、ZnCl2反应,分别合成了相应的金属配合物.用比色法测试了N,N-二羧甲基-L-谷氨酸和7种金属配合物对三磷酸腺苷二钠分解的催化活性,结果表明:N,N-二羧甲基-L-谷氨酸与镁、钙和锰形成的配合物对三磷酸腺苷二钠的分解反应具有较好的活性.

壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症肝X受体/核因子κB通路的影响

目的:基于肝X受体/核因子κB信号通路观察壮骨健膝方对兔膝骨关节炎滑膜炎症模型的影响,探讨其对滑膜炎症的作用及机制。方法:将24只新西兰大白兔随机分为正常组6只和造模组18只。造模组行膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎滑膜炎症模型。造模成功后将模型兔随机分为模型组、扶他林组和壮骨健膝方组,每组6只。扶他林组和壮骨健膝方组分别给予扶他林混悬液、壮骨健膝方药液灌胃,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃。观察干预前后各组兔膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分;膝关节液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13含量;滑膜组织评分;滑膜组织中LXRα、N-CoR、P50、P65 mRNA的表达情况。结果:与正常组比较,模型组兔一般情况差,膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分、膝关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、滑膜组织评分、P50和P65 mRNA表达均升高(均P<0.05),滑膜组织中LXRα和N-CoR mRNA表达降低(均P<0.05)。与模型组比较,壮骨健膝方组及扶他林组膝关节皮温、周径、Lequesne MG评分、膝关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、滑膜组织评分、P50和P65 mRNA表达均较低(均P<0.05),壮骨健膝方组LXRα与N-CoR mRNA表达升高(均P<0.05),扶他林组LXRα与N-CoR mRNA表达差异无统计学意义(均P>0.05)。与扶他林组比较,壮骨健膝方组LXRα、N-CoR mRNA表达升高(均P<0.05),关节周径较小(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:壮骨健膝方可能通过调控肝X受体/核因子κB信号通路的转导,减少下游炎症介质分泌,达到抑制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。

从“筋骨、痹痿、虚实、动静、刚柔”谈膝骨关节炎功能障碍的特点

膝骨关节炎(KOA)属于进展性骨关节病,其功能障碍主要表现为膝关节疼痛、僵硬、屈伸行走不利或受限,以及关节失稳、运动控制下降和本体感觉低下等。我国KOA患者众多,且还在逐年增加,引起的功能障碍严重影响着患者健康与生活质量,因此对其开展康复的研究与实践至关重要。中医康复着眼于功能,注重辨证康复,是我国康复医学的固有特色及优势。前期的研究基于KOA功能障碍的中医证候表现,本研究经大量文献梳理及多年临床实践,从“筋骨、痹痿、虚实、动静、刚柔”5个角度为切入点,提出KOA功能障碍具有“筋骨同病、痹痿并见、虚实错杂、动静失衡、刚柔失常”5个基本特点。鉴于KOA功能障碍具有早、中、晚三期的阶段性特点,在该病发生发展的不同阶段,其功能障碍在“筋骨、痹痿、虚实、动静、刚柔”之间的表现又各有所侧重。本研究从“筋骨同病、痹痿并见、虚实错杂、动静失衡、刚柔失常”5个方面分别阐释了KOA功能障碍的特点:“筋骨同病”侧重于病位,是KOA所致功能障碍的基本病机特征,贯穿于其发病的始终;“痹痿并见、虚实错杂”偏重病性,是KOA功能障碍的基本特点;“动静失衡”偏重病因,是引起KOA病情反复及加重的重要因素;“刚柔失常”则是兼具病状与病因,是膝关节失去“骨正筋柔”的表现方式,也是KOA功能障碍的重要特征。本研究旨在进一步完善KOA的中医康复理论,为其康复治疗提供参考。

微生物菌肥对干旱矿区土壤的改良效果

为了提高干旱矿区土壤肥力,丰富植被重建及生态修复理论,通过盆栽试验,种植紫花苜蓿、披碱草和冰草3种干旱矿区常见草本植物,并结合施用不同浓度的微生物菌肥处理,利用双因素方差分析揭示施肥水平和植物种类对土壤生物及理化性质的影响,采用因子分析和聚类分析进行综合评价,以筛选土壤改良效果的最佳组合。结果表明:(1)试验组较对照组土壤中细菌、真菌、放线菌、微生物总数量、微生物量碳、氮、有机质和速效氮磷钾均显著增加(p<0.05),而微生物量碳氮比和pH显著减小(p<0.05)。(2)施肥水平和植物种类对细菌、真菌、放线菌、微生物总量、微生物量氮和碳氮比有显著交互作用。(3)因子分析和聚类分析的结果基本一致,土壤改良效果最佳的为种植紫花苜蓿并施入20 g/kg的微生物菌肥;施用微生物菌肥能有效改良水肥贫瘠的干旱矿区土壤,随着微生物菌肥施用量的增加,土壤的改良效果逐步提升。

软骨下骨重塑与骨关节炎综述

骨关节炎(OA)是一种常见的慢性退行性病变,软骨下骨重塑异常在OA的发生发展过程中起着重要作用。本文从OA软骨下骨重塑异常的表现、生物力学机制、分子生物学机制及软骨下骨重塑异常的中西医治疗研究等方面做一综述,以期为OA的防治提供新思路。

壮骨健膝方含药血清对经IL-1β诱导的大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子蛋白表达的影响

目的观察壮骨健膝方含药血清对大鼠膝关节退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Dkk-1、sFRP-3蛋白表达的影响,揭示该方保护膝关节软骨细胞的可能分子机制。方法取清洁级2周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养,干预24 h后制备退变软骨细胞模型,模型鉴定成功后随机分为空白血清组和含药血清组,分别采用含10%大鼠空白血清、10%壮骨健膝方大鼠含药血清的DMEM进行干预,干预24、36、48、72 h时分别采用Western blot法检测软骨细胞Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平。结果空白血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐下降,干预48 h和78 h均显著低于24 h(P均<0.05);含药血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平随着干预时间延长而逐渐增强,其中干预36 h高于24 h(P<0.05),干预48 h和72 h显著高于24 h(P均<0.01),干预48 h和72 h高于36 h(P均<0.05);与空白血清组同一时间点比较,含药血清组DKK-1、sFRP-3蛋白表达水平在干预36 h、48 h和72 h时均显著增高(P<0.05或0.01)。结论壮骨健膝方含药血清可能通过提高Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对经IL-1β诱导退变的大鼠膝关节软骨细胞起保护作用,其效果在一个细胞培养换液周期内随培养时间延长而增强。

基于NALP3炎性体的痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠抗炎作用量效和时效研究

目的观察痛风宁对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NALP3炎性体及相关炎症因子的影响,探讨其抗炎作用的量效与时效关系。方法将240只SD大鼠随机分为造模组200只和正常组40只。右后踝关节腔内注射尿酸盐混悬液制作大鼠AGA模型,成模大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及痛风宁低、中、高剂量组,每组40只。正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,其余组大鼠给予相应药物灌胃干预。首次干预后6、12、24、48 h各组随机取10只大鼠处死,收集右后踝关节液与滑膜组织,采用ELISA、Western blot和RT-qPCR分别检测白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,痛风宁中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与秋水仙碱组比较,痛风宁中、高剂量组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达无明显差异(P>0.05),痛风宁低剂量组大鼠明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论中剂量痛风宁在下调模型大鼠NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达及降低IL-1β、PGE2含量方面作用相对较佳,且首次干预后48 h抗炎作用相对明显。

考虑风电消纳的综合能源系统源荷协调运行优化方法

针对风电出力反峰特性导致综合能源系统消纳风电能力过低问题,在深入分析可转移负荷和风电消纳关系机理的基础上,提出考虑风电消纳的综合能源系统源荷协调运行优化方法。负荷侧将可转移负荷作为消纳可再生能源的主要手段,与微燃机和燃料电池等电源共同参与系统经济调度,形成源荷协调的运行优化模式。在该模式下,综合考虑系统运行约束条件以及设备约束条件,以风电消纳量最大和系统运行成本最小为优化目标,构建源荷协调的多目标优化模型,并利用NSGA-2算法对该模型求解。算例结果证明了所提方法的有效性。

痛风宁含药血清对尿酸盐刺激的THP-1炎症反应的时效观察

目的:观察痛风宁对尿酸盐刺激的人单核细胞THP-1炎症反应的影响,揭示痛风宁发挥最佳抗炎效应的时间。方法:将THP-1随机分为单钠尿酸盐(MSU)造模组和空白对照组,MSU造模组给予MSU混悬液刺激诱导建立细胞炎症模型,空白对照组不予干预。将造模成功的THP-1再随机分为模型组、痛风宁组及阳性对照组,分别用10%空白血清、10%痛风宁含药血清、10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,空白对照组给予10%空白血清干预。于干预后6、12、24、48 h,检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白、mRNA表达及IL-1β、前列腺素E_(2)(PGE_(2))含量。结果:干预后各时间点,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_(2)含量均高于空白对照组(P<0.01或P<0.05);各时间点痛风宁组所有指标水平明显低于模型组(P<0.01或P<0.05);各时间点阳性对照组IL-1β、PGE_(2)含量及Caspase-1蛋白表达均明显低于模型组(P<0.01或P<0.05),NALP3、ASC蛋白及3个mRNA表达差异无统计学意义(均P>0.05);干预后12、24、48 h痛风宁组所有指标水平均低于阳性对照组;痛风宁组各时间点间比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);在痛风宁首次干预达24 h时,炎性体相关蛋白及mRNA、炎症介质表达水平达到最低。结论:痛风宁干预尿酸盐刺激的THP-1后,于6 h、12 h、24 h、48 h均表现出显著抗炎效应,在首次干预后24 h抗炎效应达到高峰。

人工沸石草本对白云鄂博干旱矿区土壤养分的影响

针对我国矿区水土流失频发、土壤养分贫瘠等问题,开展干旱矿区土壤改良盆栽试验。试验以内蒙古白云鄂博矿区土壤为供试土壤,冰草、紫花苜蓿2种草本为研究对象,以改良剂人工沸石(设置0、5、10和20 g/kg 4个用量)为土壤修复材料,选取植物生物量、土壤微生物数量、微生物量碳氮和速效氮磷钾进行分析测定。结果表明:1)冰草联合沸石使用后,相比对照组,土壤中细菌、真菌、放线菌数量分别增加11.02%、15.25%和50.67%,土壤微生物量碳、微生物量氮分别是对照组的2.23和2.68倍;2)紫花苜蓿联合沸石使用后,微生物数量分别是对照组的1.31、2.29和9.55倍,土壤速效氮、磷和钾较施用前分别增加20.1%、97.9%和29.5%;3)主成分分析法及聚类分析法综合表明,人工沸石施用量为20、10 g/kg可分别作为冰草和紫花苜蓿改良剂的最佳用量。在同等人工沸石施用量下,栽植紫花苜蓿的土壤响应更强,紫花苜蓿可作为干旱矿区土壤改良的先锋草本植物。研究结论可以为干旱矿区改良剂施用、土地恢复提供一定依据,也为矿山绿化提供参考。

考虑功率分布特性的微网风电功率预测模型

针对微网中风电功率预测模型输入数据分布不均匀特性导致其预测精度低的问题,在不改变原始数据的情况下,提出一种混合归一化方法改善输入数据的分布特性。目前风电预测模型主要使用的是单一的BP神经网络模型,考虑到该模型有容易陷入局部最优、预测精度低等缺点,提出混沌遗传-BP神经网络风电功率预测模型,采用混沌遗传算法优化神经网络权值与阈值,因而该模型在全局区域内能保证较好的预测精度且不会陷入局部最小。算例结果表明:该混合归一化方法能够有效地改善输入数据的分布特性,且所提预测模型有更优的预测性能。

自噬对糖皮质激素作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响

背景:目前,糖皮质激素(GCs)作用下成骨细胞自噬与其增殖能力的关系尚存争议。目的:探讨自噬对GCs作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖能力的影响。方法:不同浓度(0、10-8 M、10-6 M、10-4 M)的地塞米松(DXMS)分别作用于MC3T3-E1成骨细胞,CCK-8检测不同时间(12 h、24 h、48 h)的细胞增殖能力;以Western Blot、细胞免疫荧光法检测细胞培养24 h的Beclin-1和LC-3表达水平,透射电镜法检测自噬小体数目,明确不同浓度DXMS作用下成骨细胞自噬变化特点;在10-6 M DXMS培养的成骨细胞中加入自噬激活剂雷帕霉素(RAP),以上述同样的技术检测自噬及细胞增殖能力的变化,以明确GCs作用下自噬对MC3T3-E1成骨细胞增殖能力的影响。结果:CCK-8结果示,DXMS浓度越高,对MC3T3-E1成骨细胞增殖能力的抑制作用越强,其中10-8M DXMS对细胞增殖能力无明显影响(P>0.05),10-6M DXMS对细胞增殖能力抑制较明显,10-4M DXMS对细胞增殖能力抑制作用最为明显。Western Blot、细胞免疫荧光法及透射电镜法检测结果示,随着DXMS浓度的增加,Beclin-1和LC-3B的表达水平均明显提高,自噬小体数量明显增加;在10-6M DXMS培养的成骨细胞中加入自噬激活剂RAP后,Beclin-1和LC-3B的表达水平及自噬小体数量进一步提高,而成骨细胞增殖能力变强。结论:GCs作用下自噬对成骨细胞增殖起保护作用,随着GCs浓度的增高自噬水平明显增加但相对不足,不能抵抗高浓度GCs对细胞增殖的抑制作用,提高自噬水平有助于促进成骨细胞增殖。

高尿酸血症脾虚湿盛证病证结合小鼠模型的建立及其肠道菌群特征分析

目的:建立一种契合临床高尿酸血症(HUA)脾虚湿盛证患者发病特点的病证结合小鼠模型,分析其肠道菌群特征,探究病证结合造模对肠道菌群的影响。方法:40只SPF级2月龄雄性KM小鼠按随机数表法分为正常组、HUA组、脾虚湿盛证组、病证结合组(HUA脾虚湿盛证),每组10只。分别予普通饲料+0.9%氯化钠溶液、普通饲料+次黄嘌呤联合氧嗪酸钾、高脂高糖饲料联合劳倦过度+0.9%氯化钠溶液、高脂高糖饲料联合劳倦过度+次黄嘌呤联合氧嗪酸钾灌胃干预。通过各组小鼠血尿酸水平、脾虚湿盛证候积分评价模型建立的效果,并于干预结束后收集各组小鼠粪便,采用16SrRNA测序技术检测粪便中菌群结构,分析模型小鼠肠道菌群特征。结果:与正常组及HUA组比较,病证结合组小鼠血尿酸水平、脾虚湿盛证候积分显著升高(P<0.01,P<0.05);肠道菌群结构发生明显改变,拟杆菌门、放线菌门相对丰度显著上升,厚壁菌门相对丰度显著下降,肠道有益菌乳杆菌属相对丰度显著下降(P<0.05)。与脾虚湿盛证组比较,病证结合组小鼠血尿酸水平显著升高(P<0.05);拟杆菌门相对丰度显著上升,厚壁菌门相对丰度显著降低(P<0.05);两组脾虚湿盛证候积分差异无统计学意义。结论:高脂高糖饲料联合劳倦过度+次黄嘌呤联合氧嗪酸钾灌胃可较好构建HUA脾虚湿盛证病证结合小鼠模型,并导致小鼠肠道菌群结构发生显著变化,提示HUA脾虚湿盛证的发生可能与肠道菌群的改变高度相关。

痛风宁对高尿酸血症脾虚湿盛证模型小鼠肠道菌群及肠道尿酸代谢的影响

目的 探讨痛风宁治疗高尿酸血症(HUA)脾虚湿盛证的可能作用机制。方法 60只小鼠中随机选取10只作为正常组常规饲喂,其余50只予高脂高糖饲料联合劳倦过度+次黄嘌呤联合氧嗪酸钾混悬液构建HUA脾虚湿盛证病证结合动物模型。造模成功后为更好地观察痛风宁对模型小鼠肠道菌群的影响,在维持病证结合造模的基础上,采用混合抗生素混悬液灌胃,诱导加重模型小鼠肠道菌群紊乱。造模成功的50只小鼠随机分为模型组、痛风宁组、别嘌醇组、益生菌组、别嘌醇+益生菌组,每组10只。痛风宁组以19.11 g/(kg·d)痛风宁药液灌胃,别嘌醇组以78 mg/(kg·d)别嘌醇混悬液灌胃,益生菌组以3 g/(kg·d)双歧杆菌乳杆菌三联活菌片混悬液灌胃,别嘌醇+益生菌组以78 mg/(kg·d)别嘌醇及3 g/(kg·d)双歧杆菌乳杆菌三联活菌片混悬液灌胃,正常组、模型组以19.11 ml/(kg·d)生理盐水灌胃;均连续干预21天。为了维持稳定的高血尿酸状态,除正常组外,其余各组小鼠在给药干预的同时均继续进行造模。比较各组小鼠脾虚证候积分,血尿酸水平,菌群结构的变化,肠道灌洗液中乙酸、丁酸含量,小肠组织中腺苷脱氨酶(ADA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)含量,三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2 (ABCG2)、葡萄糖转运体9 (GLUT9)蛋白及mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组脾虚证候积分、血尿酸水平、厚壁菌门相对丰度、厚壁菌门/拟杆菌门值,副拟杆菌属、克雷伯菌属、肠球菌属丰度,肠道灌洗液乙酸含量,小肠组织中ADA及XOD含量、GLUT9蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);肠道菌群操作分类单元(OTU)数目、拟杆菌门相对丰度,乳杆菌属、未培养拟杆菌属丰度,肠道灌洗液丁酸含量,小肠组织中ABCG2蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,痛风宁组、益生菌组、别嘌醇+益生菌组小鼠脾虚证候积分、血尿酸水平、厚壁菌门相对丰度、肠道灌洗液乙酸含量,小肠组织中ADA及XOD含量、GLUT9蛋白及mRNA表达明显降低,肠道菌群OTU数目、杆菌门相对丰度、肠道灌洗液丁酸含量、小肠组织中ABCG2蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05);益生菌组厚壁菌门/拟杆菌门值降低;痛风宁组乳杆菌属、未培养拟杆菌属丰度显著升高,副拟杆菌属、克雷伯菌属、肠球菌属等丰度显著降低(P<0.05)。与痛风宁组比较,益生菌组、别嘌醇组血尿酸水平、副拟杆菌丰度,小肠组织中ADA及XOD含量、GLUT9 mRNA表达升高,厚壁菌门相对丰度、乳杆菌丰度、ABCG2 mRNA表达显著降低;益生菌组小肠组织GLUT9蛋白表达升高;益生菌组、别嘌醇+益生菌组小鼠脾虚证候积分明显较高,小鼠肠道灌洗液丁酸含量较低;别嘌醇组小鼠肠道菌群OTU数目、拟杆菌门、肠道灌洗液丁酸含量相对丰度,小肠组织中ABCG2蛋白表达降低,肠道灌洗液乙酸含量、克雷伯菌丰度,GLUT9蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 痛风宁治疗高尿酸血症(HUA)脾虚湿盛证可能与其调整肠道益生菌(乳杆菌等)与致病菌(克雷伯菌等)的丰度及菌群代谢产物乙酸、丁酸的生成;降低肠道内ADA及XOD表达、减少肠道尿酸生成;上调肠上皮尿酸盐转运体ABCG2表达、下调GLUT9表达,促进肠道尿酸排泄三方面因素相关。

痛风宁对高尿酸血症模型大鼠肾脏尿酸盐转运体表达的影响

目的:通过观察痛风宁对高尿酸血症(HUA)模型大鼠肾脏尿酸盐转运体蛋白及mRNA表达的影响,探讨该方促进尿酸排泄的机制。方法:将80只SD大鼠随机分为空白组20只和造模组60只。造模组行腹腔注射氧嗪酸钾(OAPS)联合盐酸乙胺丁醇(EMB)灌胃造模,于第21天时鉴定模型,确定造模成功后将60只造模大鼠随机分为模型组、痛风宁组和苯溴马隆组,每组20只。痛风宁组和苯溴马隆组分别予15. 3 g·kg^-1·d^-1痛风宁药液及5. 2 mg·kg^-1·d^-1苯溴马隆混悬液灌胃,空白组和模型组予等量生理盐水灌胃,于干预第14,21天分批采集大鼠尿液、血液、肾脏组织。采用酶比色法检测血尿酸(SUA),尿尿酸(UUA)含量,脲酶法检测血尿素氮(BUN)含量,肌氨酸氧化酶法检测血肌酐(CRE)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肾脏尿酸盐转运体蛋白和mRNA表达。结果:药物干预第14,21天,与空白组比较,模型组SUA,CRE,BUN升高,UUA显著降低(P<0. 01),尿酸盐转运体1(URAT1),葡萄糖转运体9(GLUT9)蛋白与mRNA表达明显升高(P<0. 05),三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2),有机阴离子1(OAT1),有机阴离子3(OAT3)蛋白与mRNA表达明显下降(P<0. 05);与模型组比较,痛风宁组及苯溴马隆组SUA,CRE,BUN明显降低,UUA明显升高(P<0. 05),URAT1,GLUT9蛋白与mRNA表达明显下降(P<0. 05),ABCG2,OAT1,OAT3蛋白与mRNA表达明显升高(P<0. 05),痛风宁组CRE,BUN明显降低(P<0. 05,P<0. 01),且明显优于苯溴马隆组(P<0. 05);干预第21天痛风宁组,除BUN外,其余指标改善趋势均更明显。结论:腹腔注射OAPS联合EMB灌胃可致HUA,并伴有肾功能异常;痛风宁可促进尿酸排泄,降低血尿酸,并下调肾脏URAT1,GLUT9表达,上调ABCG2,OAT1,OAT3表达,这可能是其促进尿酸排泄而降尿酸的作用机制之一;痛风宁对肾功能具有一定的保护作用。

痛风宁含药血清对尿酸诱导HK-2中尿酸盐转运体的影响

目的:从肾脏尿酸盐转运体角度探讨痛风宁降低血尿酸的机制。方法:将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为正常组,模型组,痛风宁低、中、高剂量组(7. 65,15. 3,30. 6 g·kg-1),苯溴马隆组(50μmo1·L-1),分别予不同培养液进行干预。于干预24 h后收集HK-2及上清液,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组HK-2中尿酸盐转运蛋白1(URAT1),葡萄糖转运体9(GLUT9),有机阴离子转运体1(OAT1),有机阴离子转运体3(OAT3)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达显著升高(P <0. 01),ABCG2蛋白及mRNA表达显著下降(P <0. 01);与模型组比较,痛风宁各剂量组和苯溴马隆组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达均明显下降(P <0. 01),且痛风宁各剂量组优于苯溴马隆组,痛风宁各剂量组ABCG2蛋白及mRNA表达显著升高(P <0. 01);与痛风宁中剂量组比较,痛风宁低、高剂量组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达明显升高,ABCG2蛋白及mRNA表达明显下降(P <0. 01)。OAT1和OAT3蛋白及mRNA于各组均无表达。结论:痛风宁可通过下调HK-2中URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达,上调ABCG2蛋白及mRNA表达,调节肾小管对尿酸的重吸收和分泌,促进尿酸在肾脏的排泄,降低血尿酸水平。提示对肾脏尿酸转运体蛋白的调节可能是痛风宁发挥利湿排浊功效而降低血尿酸的具体机制之一,OAT1和OAT3蛋白及mRNA在体外培养的HK-2中无表达。