Id3启动子/荧光素酶基因载体的构建及其在WEHI-231细胞中的活性表达

用PCR法从WEHI-231细胞基因组DNA扩增小鼠Ida（mId3）基因5’端含启动子序列的不同长度的DNA片段（mId3-pf）亚克隆至荧光索酶（Luc）报道基因载体PGV-B2，构建由mid3基因启动子片段控制的Luc报道基因重组载体mid3-pf／PGV—B2．用电穿孔术将mId3-pf／PGV-B2导人培养的WEHI-231细胞，用抗小鼠IgM抗体刺激转染后的WEHI-231细胞，24h后测定胞内Luc活性．结果表明，4种Luc报道基因重组载体转染细胞均表现较高的mId3启动子活性，与空载体转染细胞相比，启动子活性分别升高25-60倍．抗IgM抗体刺激细胞后，Id3启动子活性较未刺激细胞均呈明显增高趋势，增高幅度可达2倍左右．表明抗IgM抗体诱导WEHI231细胞Id3的上调表达与Id3转录活性的升高有关．