大棚繁育克氏原螯虾种苗对养殖水体营养盐的影响

为探讨利用温室大棚进行克氏原螯虾(Procambarus clarkia)种苗繁育对养殖水体的水质影响,文章通过对繁育期间的水样和表层底泥营养盐的定期监测,研究了整个育苗期间水质和表层底泥中营养盐的变化动态。结果表明,水体DO、WT变幅为5.75—6.33 mg/L、12.6℃—22.9℃,水温要高于同期外部水温5—10℃;受饲料投喂和虾活动等影响,上覆水中TN、TP和COD含量快速增加,在养殖期间的变幅分别为2.091—2.688、0.196—0.480和42.400—53.200 mg/L;表层底泥的TN、TP和有机质含量变幅分别为1032—1279、623—1004和12.00—14.28 mg/kg,其增幅分别为24%、23%和41%。受水体浊度较高、水体中亲本虾数量不明等影响,无法判定投入的饲料是否全部为虾子摄食,造成了短期内较高的饲料投入量带来养殖水体营养盐的急剧增加,较高的营养盐含量为后期养殖尾水的治理带来新的要求。

眼柄切除快速诱导甲壳动物生长发育研究进展

眼柄切除因对性腺发育具有显著的促进作用普遍应用于甲壳类动物的人工养殖中。眼柄切除通过直接影响眼柄中X-器官窦腺复合体(XO-SG)的神经内分泌功能发挥作用,眼柄XO-SG复合体是甲壳动物的重要内分泌器官,是甲壳动物内分泌学的重点研究内容。简述了眼柄XO-SG复合体的生物结构及其生理功能,对眼柄内分泌的分子机制进行归纳,为进一步揭示眼柄神经内分泌系统的调控机理提供理论参考。

不同土壤深度对宁夏石嘴山盐碱地细菌菌群多样性的影响

宁夏自治区是我国受到土壤次生盐渍化危害的重点区域,然而对该地区盐碱化形成机制及影响因素的研究资料较少。在宁夏石嘴山地区采集土壤样本,采用基于16S rRNA的PCR-DGGE技术对不同深度土壤的细菌群落多样性和优势种群进行分析,以期从土壤生态角度探索该地盐渍化成因及改良措施。带谱相似性和UPGMA聚类结果表明,表层(D<20cm)土壤和底层(D>80 cm)土壤样本中细菌菌群相似程度较高;而中间层(20 cm<D<80 cm)土壤样本中细菌菌群相似程度很低。多样性指数分析显示,随着地层深度的增加,菌落的丰富度和多样性均趋于下降;而均匀程度变化幅度不大。对其中5个优势条带进行测序比对的结果表明,该地区土壤可识别优势细菌菌群为变形细菌门Proteobacteria和拟杆菌门Bacteroidetes,但大部分条带未可识别。结果表明该地区盐碱土壤中的细菌菌群多样性程度较高,且优势菌群不尽相同;土壤深度与细菌菌落多样性在一定程度上存在线性关系。为深入研究次生盐渍化土壤的形成机制以及影响因素提供理论参考。

虾蟹类卵黄蛋白原的研究进展

简述了十足目动物中重要虾蟹类卵黄蛋白原(vitellogenin)的基因克隆及分子相关研究进展。分别从分子的合成转运、分子结构特征、分子进化、表达和激素调控、生物学功能等几个方面展开介绍,整理回顾了目前已被克隆鉴定的十足目动物Vg分子特征;指出了同源蛋白间存在的结构和功能的相似性;分析了分子间的系统进化关系;归纳了十足目Vg种间蛋白的主要特征,并且提出一些区别于其它物种的独特之处。以期为进一步深入开展卵黄蛋白分子研究积累资料,同时为虾蟹类卵巢发育机制研究提供理论依据。

Tropomyosin基因在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)卵巢发育过程中的表达

原肌球蛋白Tropomyosin是虾蟹类的主要致敏物质,除此以外在其他方面功能的研究非常少。本研究克隆了克氏原螯虾Tropomyosin基因,进行了同源序列比对,并分析了Tropomyosin基因在克氏原螯虾卵巢发育过程中的转录水平表达模式。研究结果显示,Tropomyosin蛋白序列高度保守,在虾蟹类甲壳动物中,8个抗原决定簇序列几乎完全一致。本研究克隆的基因存在3个核苷酸位置(c61—t,g118—a,c359—t)的变化,但是均不处于抗原决定簇内,免疫原性不受影响。Tropomyosin基因mR NA在克氏原螯虾卵巢组织中表达量很低,但是随着卵巢的发育存在表达差异,即呈现一个先提高再降低的峰型特征。本研究暗示Tropomyosin除过敏原特性外,可能也受性腺发育的部分调控影响。

克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性（英文）

为开发虾类来源的溶菌酶,本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1(简称"pc-iLys1")的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌表达,重组蛋白分子质量约为17.1 kDa。在摇瓶中对诱导表达条件进行优化,获得的相对最佳表达条件为:培养基pH 7.0,培养温度28℃,甲醇体积分数1.5%,诱导表达时间96 h。采用该优化条件,进一步利用分批补料策略在5 L发酵罐中进行高密度培养诱导,120 h后获得重组pc-iLys1,其酶活性达到2052.6 U/mL,最终,酵母干细胞质量浓度达98.1 g/L。抑菌实验表明,重组pc-iLys1对多种革兰氏阳性和阴性细菌均具有明显的抑制活性。总之,本研究实现了克氏原螯虾i-型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达,为其大规模制备打下了基础。

克氏原螯虾卵巢发育Ⅲ期与Ⅳ期的比较蛋白质组学研究

克氏原螯虾作为经济虾蟹类的重要代表,是淡水虾类重要水产养殖资源。目前在规模化养殖过程中优质苗种的供应短缺现状,是制约克氏原螯虾产业发展的瓶颈之一。人工养殖条件下,雌虾卵巢易出现发育迟缓甚至停滞现象而导致雌、雄性腺发育不同步是优质苗种短缺的首要根本原因。分析可知,克氏原螯虾卵巢从卵黄发生前期(Ⅲ期)到卵黄发生期(Ⅳ期)的发育过渡是卵母细胞能否顺利发育成熟的关键点。本研究对克氏原螯虾卵巢发育Ⅲ期和Ⅳ期卵巢组织总蛋白质组双向电泳的等电聚焦条件、上样量等关键因素进行了优化,运用PDQuestTM软件对获得的凝胶图谱进行了图像分析,并对表达差异蛋白质点(丰度差异≥2倍)进行了串联质谱鉴定。结果显示:在等电总伏特数不低于8 500 V.h、样品上样量为200μg时,可以获得较清晰的凝胶图谱;利用串联质谱分析挖取的52个差异蛋白质点,其中共成功鉴定29个(包括22种蛋白质);分析表明,相对于发育Ⅲ期卵巢蛋白质组,在Ⅳ期卵巢蛋白质组中有13种蛋白质表达量有下调,9种蛋白质表达量有上调。研究结果将对于揭示克氏原螯虾的卵巢发育分子调控机制奠定一定基础,同时对于了解其他虾蟹类动物的性腺发育机理也将积累重要分子生物学资料。

不同温度条件下克氏原螯虾免疫酶活性变化

研究克氏原螯虾在不同水温条件下免疫因子活性的变化规律,结果发现:温度变化对克氏原螯虾免疫力有显著影响。水温为10～15℃时,克氏原螯虾血液中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性保持稳定,20℃时两者活性达到峰值,水温继续升高时活性逐渐降低,水温达到30℃时酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性分别为74.6 U/L和56.8金氏单位/L,与水温20℃时酶的活性相比差异显著(P<0.05);过氧化氢酶的活性随着温度的升高呈下降趋势,30℃时其活性最低(0.79 U/mL),与水温20～25℃时酶的活性相比差异显著(P<0.05);而超氧化物歧化酶在水温10℃时的活性较低,但其活性随着温度升高而增强,水温30℃时的活性为138.31 U/mL,与15～25℃时相比差异不显著(P>0.05),但高于水温为10℃的试验组,且差异显著(P<0.05);低温与高温环境下,血液中溶菌酶的活性降低,显著低于水温15～25℃的试验组(P<0.05)。表明水温为20℃左右时克氏原螯虾相关免疫因子的各项指标较好,有较强的抗病能力。

克氏原螯虾繁殖行为生态学的实验研究

针对克氏原螯虾（Procambarus clarkii）初次性成熟、生殖季节、交配体制、交配行为、掘洞行为、护幼抚育行为等独特的生殖对策和行为特性展开研究。在克氏原螯虾主要繁殖季节进行野外自然采集成虾样本进行交配产卵等实验观察统计，每批次采集成虾样本为30尾以上，体质量在15~40 g。结果表明：1）克氏原鳌虾生长快速且性成熟早，当年个体经6~12个月即可达到性成熟。2）该虾属秋冬季产卵类型，但交配季节宽泛，繁殖期长，一年中大部分时间均有交配现象。7月份（1龄、2龄，体质量22.4 g±2.56 g）交配率为20%，产卵率为0；8月份（1龄、2龄，体质量26.7 g±2.98 g）交配率为45%，产卵率为5%；9月份（1龄、2龄，体质量29.3 g±3.11 g）交配率达到60%以上，产卵率为10%；10月份（1龄、2龄，体质量30.9 g±3.39 g）交配率为75%以上，产卵率为35%，表明在自然条件下克氏原螯虾交配季节主要集中在8-10月，产卵高峰期主要集中在10-12月。3）交配体制属于繁殖行为学中的乱交制，雌雄性比较为松散，存在普遍的重复交配现象。4）具有明显的穴居性，掘洞行为是克氏原螯虾一个显著突出的生态习性，繁殖季节掘洞强度显著增强，掘洞目的主要为雌虾产卵孵幼，其他季节的掘洞目的则是为躲避不良的生态环境，冬春季则几乎没有掘洞行为，即不同季节克氏原螯虾的掘洞有着不同的生态功能。克氏原螯虾繁殖行为生态学的研究可为其开展人工繁殖和生产养殖提供理论依据。

壳聚糖对克氏原螯虾生长、血清相关免疫因子、肌肉成分和消化酶的影响

以体质量为(21.55±1.62)g的克氏原螯虾Procambarus clarkii为研究对象,投喂壳聚糖添加量分别为0(对照)、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%的饲料,研究壳聚糖对克氏原螯虾生长、血清相关免疫因子、肌肉成分和消化酶活性的影响。试验共进行60 d。结果表明:1.0%壳聚糖添加组试验虾的特定生长率显著高于其他各组(P<0.05),1.5%壳聚糖添加组试验虾的死亡率和蜕壳死亡率均最高,且显著高于对照组(P<0.05);1.0%和2.0%壳聚糖添加组试验虾血清中的酚氧化酶(PO)活性显著高于对照组(P<0.05),各添加组血清中碱性磷酸酶(ALP)活性均显著高于对照组(P<0.05);除1.0%、2.0%壳聚糖添加组外,其他添加组血清中谷丙转氨酶(ALT)活性均低于对照组;各添加组血清中谷草转氨酶(AST)的活性均显著低于对照组(P<0.05);除2.0%壳聚糖添加组外,其他添加组试验虾肌肉粗蛋白质含量较对照组均低;除2.0%壳聚糖添加组外,其他添加组粗脂肪含量较对照组均高,其中1.0%、1.5%和3.0%添加组显著高于对照组(P<0.05);仅1.0%添加组肌肉灰分显著低于对照组(P<0.05);仅2.0%添加组肌肉水分含量显著高于对照组(P<0.05);1.0%添加组试验虾肝胰腺中胰蛋白酶和脂肪酶活性以及肠道中的脂肪酶活性显著高于对照组(P<0.05);1.5%添加组试验虾肝胰腺和肠道中的淀粉酶活性均显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,在本试验条件下,建议成虾饲料中壳聚糖的添加量为0.5%～1.5%,壳聚糖对克氏原螯虾起到一定的免疫保护作用,并能增强其消化生理机能。

壳聚糖对克氏原螯虾存活、血清生化指标和非特异性免疫功能的影响

以基础饲料为对照,在基础饲料中分别添加0.0%(对照)、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%的壳聚糖,分别投喂平均体重为(21.55±1.62)g的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)60 d,研究壳聚糖对克氏原螯虾存活、蜕壳、血液生化指标及非特异性免疫功能的影响。结果显示:0.5%添加组存活率为84.44%,与对照组和1.0%添加组无显著性差异;总蜕壳率和相对增重率随壳聚糖含量升高而呈现先升高后降低的趋势,当添加量为1.0%时,总蜕壳率和相对增重率显著高于对照组;各试验组肝胰指数差异不显著。2.0%添加组血清中总蛋白、白蛋白和总胆固醇显著高于对照组,添加组甘油三酯的含量显著高于对照组。1.5%添加组血清和肝胰腺中的溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著高于对照组;与对照组相比,0.5%添加组血清中的酸性磷酸酶(ACP)和过氧化氢酶(CAT)的活性显著升高;0.5%添加组肝胰腺中CAT活性最高,为4.93 U/mL,显著高于对照组。结果说明,壳聚糖可以提高克氏原螯虾的生长性能和非特异性免疫功能,饲料中添加0.5%～1.5%较为适宜。

克氏原螯虾的食物选择性及其摄食节律

对克氏原螯虾Procambarus clarkii幼虾和成虾的胃及肠道内的食物组成和食物充塞度的昼夜变化规律进行了观察;在水族箱(60 cm×40 cm×40 cm)中先后进行了两试验期克氏原螯虾(规格为3～5 g/尾)对几种常见水生植物(水花生Alternanthera philoxeroides、水葫芦Eichhornia crassipes、小浮萍Lemna minor、伊乐藻Elodea nuttallii、苦草Vallisneria natans)的摄食与生长试验,每个水族箱中投放克氏原螯虾20尾;另外,在稻田的环沟内对不同投饲模式(分别投喂粗蛋白质量分数为30%的克氏原螯虾专用颗粒饲料及水草和小杂鱼)下克氏原螯虾的生长效果进行了比较。结果表明:幼虾肠道内的食物组成主要以浮游植物和浮游动物为主,成虾对食物的选择性降低,水域中所能得到的水生动植物、有机碎屑和人工饲料均可成为其维持生存的食物,而分布广、生物量大且最易摄取的水草是其主要食物;在池塘养殖条件下,克氏原螯虾的摄食节律有着明显的昼夜变化规律,在8:00—10:00和19:00—22:00分别有一个相对集中的主要摄食时段,其它时段摄食强度较弱;投喂伊乐藻、小浮萍和苦草饲养克氏原螯虾的效果优于水花生和水葫芦,生长差异极显著(P<0.01),其中小浮萍的饲养效果略好于伊乐藻和苦草,但3种水草间的饲养效果差异不显著(P>0.05);对不同规格的虾苗投喂小浮萍、伊乐藻、苦草、水花生和水葫芦的平均日增重率间均存在明显的差异(P<0.05);在稻田环沟内不同投饲模式下,投喂小杂鱼的克氏原螯虾生长情况优于投喂颗粒饲料组和颗粒饲料+水草组。

生物饲料在虾蟹健康养殖中的应用前景

我国作为克氏原螯虾、中华绒螯蟹、南美白对虾、罗氏沼虾和日本沼虾的养殖大国,虾蟹的养殖规模和产量均居世界首位,但目前虾蟹颗粒饲料所用的主要原料鱼粉价格高,致使饲料成本居高不下;

人工栽培水草对池塘养殖生态环境和虾蟹生长的影响

在虾蟹养殖池中人工栽培水草,分析评价水生植物的功能及其对池塘养殖生态环境的影响。在养殖期间的不同季节、月份进行池塘水质分析和虾蟹生长跟踪测定,研究不同品种水草、不同栽种模式(栽种数量及密度)、种类搭配对池塘养殖生态调节功能的影响,以及对虾蟹生长的促进作用。结果表明,人工栽草对养殖池塘水质和生态环境具有显著影响。水草栽种面积、水草种类、栽种模式对池塘生态环境的影响具有显著性差异(P<0.01);水花生、伊乐藻、轮叶黑藻对池塘养殖生态环境的调节作用表现出不同程度的显著性差异(P<0.05)。伊乐藻与轮叶黑藻混合搭配栽培模式对池塘水质改善、生态调节的作用明显优于单一水草栽培模式。池塘栽草面积须合理控制,伊乐藻应控制在40%~50%,轮叶黑藻应控制在60%以下,水花生覆盖率则不应超过30%。人工栽种水草对池塘养殖生态环境具有良好的调节和改善功能,而池塘养殖生态环境对虾蟹生长具有直接和显著的影响。

天津临港工业区开挖航道对港外波浪传播的影响

结合天津临港工业区的建设,进行整体物理模型试验。根据试验结果研究开挖航道对港外波浪传播的影响,分析航道在水深、波向等影响因素下航道中心和迎浪侧波高沿程变化规律,讨论防波堤堤头设计波高的选取。研究结果明确、可信,可作为工程设计的依据。

CaM与PMCA可能参与眼柄切除诱导克氏原螯虾卵巢成熟的早期分子过程

目前对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)眼柄切除诱导卵巢成熟的分子机制还很不清楚。借鉴国外最新研究结果,探讨了克氏原螯虾单侧眼柄切除后第1、7、15天体长、体重及卵巢的一系列变化情况,利用实时定量PCR技术比较分析了眼柄切除前、后卵巢组织中钙调蛋白基因(CaM)与质膜Ca2+-ATPase基因(PMCA)的表达情况。结果表明,在克氏原螯虾眼柄切除诱导卵巢成熟的早期分子过程中,钙信号通路可能发挥了重要作用。实验结果为进一步深入研究克氏原螯虾眼柄切除促进卵巢成熟的分子机制积累了研究资料。

生物饲料对克氏原螯虾生长及性腺发育的影响

应用生物饲料饲养克氏原鳌虾并和普通饲料进行营养评价及养殖效果比较,通过对克氏原螯虾的生长速度和性腺发育指标的测定和观察,研究和评价生物饲料对克氏原螯虾的养殖效果。试验结果表明,生物饲料和普通饲料相比其氨基酸数量、种类更为齐全,尤其是必需氨基酸含量更为丰富、比例更为平衡,即两者的必需氨基酸指数EAAI有显著性差异(P<0.01)。生物饲料组和普通饲料组经2个月的比较饲喂养殖,平均生长速度(日均增重率)分别为1.75%,1.48%;性腺成熟系数、肝体比和相对怀卵量等指标经数理统计检验显示,在2种饲料之间均存在不同程度的差异性(P<0.05),即生物饲料对克氏原螯虾的生长和性腺成熟发育和普通饲料相比具有显著性差异,表明生物饲料对克氏原螯等水产养殖有着较好的饲养效果,具有良好的推广价值。

我国克氏原螯虾种苗产业发展现状

当前我国克氏原螯虾产业的快速发展对提高渔民收入、促进养殖技术升级、农民脱贫致富等均具有重要的现实意义。而种苗质量与市场供应能力与养殖业发展规模不匹配已成为当前限制克氏原螯虾产业规模扩增的瓶颈。针对这一现象,从我国克氏原螯虾种质资源现状、种苗资源的供给能力、种苗生产现状和生产模式进行概述和探讨。同时,提出应对养殖规模扩增的现实要求,种苗产业应从加强种质资源保护、改善养殖环境、转变养殖理念、升级换代育苗技术等多方面发力;政府、科研单位和企业应加强合作,形成产学研协同发展的商业化育种体系,加快克氏原螯虾工厂化高效育苗技术研发,提高秋苗和早春苗的供给能力,进而实现根据生产需要“全天候”的供苗能力,为我国克氏原螯虾产业可持续健康发展提供技术支撑和物质保障。

能量代谢相关基因在眼柄切除诱导克氏原螯虾卵巢成熟中后期的表达量

借鉴国外最新研究结果,探讨了克氏原螯虾单侧眼柄切除后15 d内卵巢的一系列变化情况,利用实时定量RT-PCR技术比较分析了眼柄切除前、后卵巢组织中NADH脱氢酶、ATP合成酶F0及细胞色素C氧化酶的基因表达情况。结果显示,在克氏原螯虾眼柄切除诱导卵巢成熟的中后期,这些能量代谢相关基因表达量大幅上调。说明在克氏原螯虾养殖过程中卵巢快速发育阶段,卵巢组织细胞要消耗大量能量,须要在饲料配方中提高能量饲料的比例。

温室大棚高效繁育克氏原螯虾种苗技术

养殖规模的扩大为当前克氏原螯虾经济向更大规模推进提供了重要的物质保障,然而种苗及时足量供应成为扩大养殖规模的重要瓶颈,采用以温室大棚为主的高密度繁育种苗,成为当前解决这一问题的重要手段。以温室大棚高密度投放亲本虾繁育克氏原螯虾种苗的2018—2020年实际运行情况为例,研究高密度繁育种苗过程中亲本虾的回捕、种苗产量并进行经济效益分析。结果表明,温室大棚中较高的水温(10.5~22.9℃)有助于亲本虾的生长和稚虾的孵化,虾苗产量可达15000 kg/hm^(2),经济总收益可达52.8万元/hm^(2),经济效益明显。探讨了温室大棚育苗过程中水生植物控养、亲本虾投放的适宜密度等问题,指出克氏原螯虾种苗繁育方式和技术的更新换代,将成为当前乃至今后产业规模扩大的物质保障和技术支撑。