汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素 (TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K 5 62 /ADM多药耐药 (MDR )逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白 (P -gp)的表达 ;荧光定量PCR法检测MDR1mRNA ;通过流式细胞仪检测Anexin -V判断凋亡细胞的数量。结果 10 μmol/L的TTD处理K 5 62 /ADM细胞后 ,细胞内阿霉素 (ADM )的浓度明显提高 ;K 5 62 /ADM细胞MDR 1mRNA /P -gp的表达下降 ;TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。 结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR 1mRNA /P -gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外 。

骨髓增生异常综合征的细胞遗传学分析及其预后意义

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)的细胞遗传学异常及其演变与MDS的亚型和转归的关系。方法:采用骨髓细胞直接法和(或)短期培养法按常规制备染色体,采用R显带技术进行核型分析。结果:8例MDS检出染色体异常核型,占40%,主要异常有5q-,+8,-7,t/del(3)(q21),-18;MDS-RAEB和RAEBT(63.7%)比MDS-RA(11.1%)异常核型检出率高(P<0.05),且多为复杂异常;核型异常者进展为白血病的危险性明显高于核型正常者。结论:MDS的核型分析对其明确诊断,分型和预后评价有重要的参考价值。

异基因外周造血干细胞移植治疗造血系统恶性肿瘤的临床研究

目的：探讨异基因外周造血干细胞移植（Allo—PBSCT）治疗恶性血液病的疗效、造血重建及并发症情况。方法：对5例恶性血液病患者进行Allo．PBSCT治疗，包括急性中幼粒细胞性白血病（AML）3例、急性淋巴细胞性自血病（ALL）1例、非霍奇金氏淋巴瘤（NHL）1例，均为供受者HLA配型完全相合，其中同胞间移植4例、无关供者移植1例；4例采用清髓性预处理方案，1例为非清髓性预处理方案。结果：5例患者均获得造血重建，经血型、性染色体和短串联重复序列-聚合酶链反应检测证实均为供者型造血，中性粒细胞≥0．5×10^9／L的中位时间为移植后＋12天，血小板≥20×10^9／L的中位时间为移植后＋8天；5例患者均未发生肝静脉闭塞病；4例患者发生急性移植物抗宿主病（aGVHD）；1例患者发生移植后单纯红细胞性再生障碍性贫血（PRCA），其余4例患者仍持续缓解（移植后145—470天）。结论：Allo-PBSCT是治疗恶性血液病的有效手段，尤其是对于复发难治性患者具有较好疗效。

血管内皮细胞生长因子受体短发夹环RNA真核表达载体的构建

目的 构建血管内皮细胞生长因子受体 (VEGFR)Flt 1和KDR特异性短发夹环RNA(ShRNA)真核表达载体。方法 采用人U6SnRNA启动子 ,分别把被 9bp序列间隔的 19bp长短的Flt 1和KDR靶序列的反向重复序列 ,置于 pEGFP C1质粒载体中 ,分别构建成Flt 1和KDR短发夹环RNA ,产生重组质粒 pEGFP C1/U6/Flt 1及pEGFP C1/U6/KDR。分别用Pst和SalⅠ酶切鉴定 ;并将经酶切鉴定后的重组质粒作测序分析。结果 VEGF受体Flt 1和KDR的ShRNA片段被成功克隆进 pEGFP C1质粒中 ,SalⅠ酶切鉴定可切出 4 0 0bp大小的片段 ,DNA测序分析显示 ,重组质粒ShRNA编码序列与设计片断的序列完全一致。结论 针对Flt 1和KDR的特异性ShRNA真核表达载体PEGF/U6/Flt 1及PEGF/U6/KDR的成功构建 。

多参数流式细胞术观察CD36在白血病细胞上的表达及其意义

本研究旨在探讨CD36在白血病细胞的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义。采用CD45/SSC参数设门多色流式细胞术分析133例白血病细胞CD36及其它白血病相关抗原的表达情况。结果表明:133例白血病中有29例患者(21.8%)的白血病细胞表达CD36,62例急性髓系白血病(AML)中26例患者(41.9%)白血病细胞表达CD36,54例淋系白血病未见CD36阳性的病例。M4、M5和M6中CD36的阳性率(8/10、12/12、3/3)明显高于M1(0/9)、M2(3/12)、M3(0/16),具有统计学差异(P值均<0.001);CD36在M5b组的阳性细胞百分数(中位数89·6%)明显高于M5a组(中位数32.7%)(P=0.001)。在急性髓系白血病中,CD36的表达与CD117呈负相关(r=-0.751,P=0.005),与HLA-DR、CD34不相关;在M4和M5b组中CD36与CD14的表达呈正相关(r=0·870,P=0.011);在单核细胞相关性白血病(MLIL)中CD36阳性率为92.6%(25/27),CD14的阳性率为48·1%(13/27),前者明显高于后者(P=0.001),在M5a中CD14未表达,在M5b中CD14表达为100%(5/5);CD117在M5a的阳性率明显高于M5b(P=0.010);CD34在M5的阳性率较低(33.3%,4/12)。结论:结合CD36与其它淋系及髓系抗原有助于淋巴系白血病、髓系白血病及其单核细胞相关性白血病的诊断与鉴别,其在单核细胞相关性白血病阳性率为92.6%(25/27),高于CD14(41.8%,13/27)。

抗VEGF抗体诱导K562细胞凋亡及其机制的研究

目的观察抗VEGF抗体对K562细胞凋亡的影响,探讨VEGF抑制白血病细胞凋亡的机理。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测抗VEGF单抗对拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)表达的影响;采用低浓度溴乙啶荧光测定法检测细胞TOPOⅡ的活性;应用琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡的情况。结果抗VEGF抗体能抑制K562细胞TOPOⅡ的表达,降低TOPOⅡ的活性,促进DNA解旋、断裂;抗VEGF单抗作用于K562细胞后,电泳结果显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带。结论抗VEGF单抗能引起白血病细胞凋亡,其原因可能是抗VEGF单抗抑制了白血病细胞TOPOⅡ基因的表达。

汗防已甲素联合塞来昔布逆转白血病细胞耐药的体外研究

目的:通过汗防已甲素联合塞来昔布逆转白血病细胞耐药的实验研究,探讨有关多药联合逆转肿瘤细胞的耐药机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测汗防已甲素联合塞来昔布对K562细胞的细胞毒试验;用流式细胞技术(FCM)检测各组K562细胞内的药物浓度;用FCM检测各组的早期凋亡(AnnexinⅤ);用RT-PCR检测各组COX-2/COX-1的表达。结果:汗防已甲素联合塞来昔布对K562细胞的抑制作用与其他组相比有显著性差异(P<0.05);细胞内的药物浓度高于其他实验组;诱导凋亡率(17.67%)高于其他实验组;COX-2/COX-1的表达明显低于其他实验组。结论:汗防已甲素联合塞来昔布逆转K562细胞的效果明显,能够增加K562细胞内药物浓度,诱导细胞凋亡,降低COX-2/COX-1的表达。

小发夹RNA对白血病K562细胞血管内皮生长因子受体Flt-1基因表达的抑制作用

本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT-PCR和免疫印迹反应检测flt-1 mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT-PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达。结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1 shRNA序列能不同程度干扰flt-1基因和蛋白在细胞中的表达,两组阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46.1%和65.4%;flt-1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力(4.3±1.2)%较对照组(12.7±1.9)%及(9.6±1.7)%明显降低(p<0.01)。结论:VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转染入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平下降。这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移。

应用实时定量PCR技术检测慢性粒细胞白血病患者p210^(bcr/abl)转录本的临床意义

目的 :研究 p2 1 0 bcr/abl融合基因转录本在慢性粒细胞白血病 ( CML)不同病程阶段的表达水平及其在病情进展中的意义。方法 :应用实时定量PCR( RQ- PCR)技术检测 68例CML患者骨髓单个核细胞中的 p2 1 0 bcr/abl转录本 ,并将其含量以看家基因 ABL表达量进行标化。结果 :本组中 p2 1 0 bcr/abl转录本绝对含量为 4.0 1× 1 0 2～ 8.90× 1 0 5拷贝 /5 0 ng(中位 1 .0 7× 1 0 5拷贝 /5 0 ng) ,ABL纠正后的相对含量为 0 .0 1～ 48.67(中位 5 .0 3)。加速期和急变期患者的p2 1 0 bcr/abl转录本水平较慢性期患者明显增高 (中位含量分别为 9.0 4、7.36和 3.5 3) ;干扰素治疗无效者较慢性期患者的 p2 1 0 bcr/abl水平则明显增高。结论 :p2 1 0 bcr/abl转录本过度表达可能与 CML病情进展相关 ,RQ- PCR可用于对 CML的病情监测。

冠心病患者血浆血栓前体蛋白及D-二聚体的检测

目的 :了解血栓前体蛋白 (TpP)及D 二聚体 (D Dimer)的检测在冠心病中的临床应用价值。方法 :6 5例冠心病患者分为急性心肌梗死 (acutemyocardialinfarction ,AMI) 2 2例 ,不稳定型心绞痛 (unstableanginapectoris,UAP) 2 7例和稳定型心绞痛 (stableanginapectoris,SAP) 16例三组 ,采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测各组血浆中的TpP及D Dimer含量。结果 :TpP :AMI组为 (9 4± 3 3)mg/L ,UAP组为 (3 4± 1 9)mg/L ,SAP组为 (2 8± 1 5 )mg/L。AMI组明显高于UAP组 (P <0 0 1) ,UAP组高于SAP组 (P >0 0 5 ) ;D Dimer:AMI为 (1 2 7± 0 5 4 )mg/L ,UAP组为 (0 94± 0 4 1)mg/L ,SAP组为 (0 4 3± 0 2 5 )mg/L ,AMI组高于UAP组 ,UAP组高于SAP组 ,差别均有显著意义 (P <0 0 1)。结论 :TpP和D Dimer的联合检测对急性心肌梗死具有早期诊断和鉴别诊断价值。

“双导师机制”助推新进青工成长成才

当前,国家电网公司新入职青工按照学历层次须在基层班组分别锻炼三年、五年、八年,而如何让他们在一线工作中锤炼意志、提升能力,更好更快的成长为各专业骨干力量,让其业务水平和综合素质都能有一个质的飞跃,这是当前新入职青工培养中急需解决的问题。为此,推行"双导师"培养机制,即为1名新入职青工同时安排1名业务素质导师和1名思想素质导师,能更好更快协同助推新入职青工成长成才。

肿瘤患者血清免疫抑制酸性蛋白水平的研究

目的 探讨免疫抑制酸性蛋白 (IAP)在肿瘤患者血清中的表达情况。方法 应用单向免疫扩散法检测了 3 0 4例不同种类肿瘤患者、3 0例炎症患者及 70例献血员血清IAP含量。结果 多数肿瘤患者血清中IAP含量大于 5 0 0 μg ml(740± 3 0～ 85 0± 14 0 μg ml) ,显著高于对照组 (3 3 3± 10 0 μg ml) ;炎症患者IAP含量也可见明显升高 (5 5 0± 12 0 μg ml)。 结论 IAP可作为反映肿瘤患者免疫状态改变及临床肿瘤辅助诊断指标之一 。

孕妇弓形虫感染与新生儿疾病关系的临床研究

我们用ＩＨＡ和ＥＬＩＳＡ方法检测弓形虫抗体。共检孕妇１０８５例，非孕育龄妇女２００例，患病新生儿１０９例，正常新生儿８０例。结果，孕妇较非孕妇感染率和总阳性率均明显增高，且随孕期延长增高，证实妊娠期感染弓形虫的相对危险度大。新生儿疾病组总阳性率高于正常组，差异有显著意义，说明有些新生儿疾病与弓形虫感染有关，以先天畸形、ＴＯＲＣＨ感染关系最密切。ＩｇＭ（＋）母亲的新生儿感染率和总阳性率均明显高于ＩｇＭ（－）者，感染母亲的新生儿感染率和总阳性率均明显高于低滴度者，故对高滴度和／或ＩｇＭ（＋）母亲要特别重视，最妇作胎儿监测。抗体低滴度有一定价值。

恶性淋巴瘤患者血清免疫抑制酸性蛋白及铁蛋白检测的意义

目的 :通过对恶性淋巴瘤患者血清免疫抑制酸性蛋白 (ImmunosuppressiveAcidicProtein ,IAP)及铁蛋白 (SerumFer ritin ,SF)的检测 ,初步了解IAP、SF含量与临床诊断和分期的关系。方法 :分别应用单向免疫扩散、双抗体夹心酶联免疫分析法检测了 3 3例恶性淋巴瘤患者和献血员血清IAP及SF。结果 :初治恶性淋巴瘤患者IAP及SF分别为 (654.3± 14 9.6) μg ml和 (2 3 8.3± 12 3 .8)ng ml,均高于对照组〔(3 2 0 .6± 96.6) μg ml和 (76.8± 40 .2 )ng ml〕 ;其中IAP含量Ⅰ期 <Ⅱ期 <Ⅲ期 <Ⅳ期 ,SF含量为Ⅰ期 <Ⅱ期 <Ⅳ期 <Ⅲ期。结论 :IAP、SF可作为恶性淋巴瘤临床诊断和分期的辅助指标之一。

吸附百白破制剂接种反应及对策

吸附百白破制剂接种反应及对策江云伟陆剑平在基础免疫中，以吸附百白破制剂接种反应较为多见。为全面了解百白破制剂的接种反应、减少和防止接种反应的发生，我们对大石契镇１９９２年出生的３８０名婴幼儿、在完成全程接种吸附百白破制剂过程中，进行追踪观察调查。现将...

急性白血病患者治疗前后血清免疫抑制酸性蛋白及铁蛋白、转铁蛋白测定的意义

目的 :检测急性白血病患者治疗前后血清免疫抑制酸性蛋白 ( IAP)及铁蛋白( SF)转铁蛋白 ( Tf)含量的变化 ,初步探讨 IAP、SF及 Tf在急性白血病治疗前后的变化及其与疗效、预后之间的关系。方法 :应用单向免疫扩散、双抗体夹心酶联免疫 ELISA及免疫透射比浊法 ,分别检测了 35例急性白血病患者治疗前后血清 IAP、SF和 Tf的变化。结果 :急性白血病初治组患者血清 IAP、SF和 Tf含量与正常对照组相比差异显著 ( P<0 .0 1 ) ;经化疗完全缓解组 ( 2 5例 )患者血清 IAP显著降低 ,SF仍维持在较高水平 ,Tf仍处于较低水平 ;动态观察了 1 0例缓解组患者血清 IAP、SF及 Tf,其中 6例长期缓解患者血清三项指标均接近正常人水平。结论 :血清 IAP对急性白血病患者化疗疗效及预后观察具有一定的临床参考价值 ,SF及

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的 :探讨初诊急性淋巴细胞白血病 (ALL)患者免疫球蛋白重链 (IgH)、T细胞受体γ(TCRγ)基因重排情况。方法 :应用多聚酶链反应 (PCR)检测 19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果 :19例标本中 10例发生单一IgH基因重排 ,5例发生单一TCRγ基因重排 ,2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论 :ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排 ,且存在着交叉重排现象。

精子表面纤维连接蛋白定位与男性不育的关系探讨

我们用酶标法对34例生育男性，28例妻流产男性，84例不育男性精子表面Fn作了定位研究，精子表面Fn＋（％）定位结果：生能男性为75．9±9．9，妻流产男性为64．8±16．4，不育男性为66．2±12．7．妻流产组、不育组与生育组比较有显著性差异（P＜0．01）.同时我们结合精子爬高试验，精子低渗膨胀试验将h＞50mm与h＜50mm的精子表面Fn＋（%）以及总膨胀率＞65％与＜65％的精子表面Fn＋（％）作了比较，结果均有显著性差异（P＜0.01）.本实验结果表明，精子表面Fn与精子授精能力有着密切关系．

骨髓增生异常综合征患者FHIT基因启动子甲基化改变

目的研究骨髓增生异常综合征 （ myelodysplastic syndrome, MDS） 患者中脆性组氨酸三联基因（fragile histidine triad, FHIT）启动子的甲基化状况及其临床相关性。方法应用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR, MSP）技术对54例不同阶段MDS患者骨髓标本FHIT基因甲基化状态进行检测。结果54例MDS患者中26例（48．1％）发生FHIT基因甲基化，FHIT基因甲基化改变与患者的性别、血象、染色体异常等结果均无相关性，但与患者年龄具有显著的相关性（R=-0．291，P=0．033）。FHIT基因甲基化频率在难治性贫血／伴有环形铁粒幼细胞的难治性贫血 （refractory anemia/refractory anemia with ringed sideroblasts, RA/RAS） （ 1/6,16.7% ）,伴多系病态造血的难治性血细胞减少症（refractory cytopenia with muhilineage dysplasia, RCMD） 和伴环形铁粒幼细胞的RCMD（refractory cytopenia with multilineage dysplasia with ringed blasts,RCMD-RS） （6/19,31.6%）,难治性贫血伴有原始细胞增多-1型（ refractory anemia with excess blasts- 1, RAEB- 1 ） （7／11，63．6％）、难治性贫血伴原始细胞增多2型（refractory anemia with excess blasts-2, RAEB-2） （4/7, 57.1% ）和难治性贫血伴有原始细胞增多转化型／急性髓性白血病（refractory anemia with excess blasts in transformation/acute myeloid leukemia, RAEBt/AML） （8/11,72.7 % ）之间的差异无统计学意义（X^2=8．417，P=0．077），但早期阶段（RA／RAS和RCMD）、晚期阶段（RAEB-1和RAEB-2）以及RAEBt／AML患者之间的差异具有统计学意义（X^2=7．938，P=0．019），并且FHIT基因甲基化频率与国际预后评分系统分组预后危险程度也具有显著的正相关性（X^2=10．110，P=0．018）。结论FHTI基因甲基化可能是促进MDS疾病进展的分子事件之一。