黄鳝肠道蛋白酶的分离纯化及其性质

黄鳝(MonopterusalbusZuiew)肠道经组织捣碎,正丁醇脱脂,硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose离子交换层析和SephacrylS 200凝胶过滤,得到蛋白酶纯品。经等电聚焦电泳和SDS PAGE均显示为单一条带。酶的等电点为6 2,最适温度为55℃,最适pH值为10 5,Km(酪蛋白)值为5 5×103mg/L。用SDS PAGE和SephacrylS 200测得其分子量分别为26kD和25 5kD。酶的pH稳定性较好,在pH12时室温保持5h,活力还剩55%。NBS、BrAc、TNBS、PMSF对酶有很强的抑制作用,而PCMB、ME对酶活性影响不大。Ca2+对酶活性无激活作用,Mg2+和K+对酶活性有轻微抑制作用,EDTA对酶活性有很强的抑制作用,Na+对酶活性无影响。

黄鳝肠道蛋白酶的应用研究

将黄鳝内脏混合物提取液作同工酶电泳,得到3条蛋白酶同工酶条带,其中ProteaseⅠ条带与从黄鳝肠道中提取的蛋白酶纯品SDS-PAGE条带重合,表明从黄鳝内脏混合物中可以提取到黄鳝肠道蛋白酶纯品.金属离子Cu2+和Ba2+对酶有激活作用,EDTA、Mn2+、Pb2+对酶有抑制作用,而Ca2+、Mg2+、K+、Na+对酶活性无明显影响.通过酶与化学试剂的配伍试验测得:CO23-、SO32-、硼砂对酶活性无影响,甘露醇、橄榄油、聚乙烯醇对酶活性有轻微抑制作用,SO42-、H2PO4-、BO32-和海藻酸钠对酶有轻微激活作用,而洗涤剂中常用的表面活性剂SDS、LAS、CHAPS和TritonX-100在低浓度时对酶活性无明显影响,酶在0·02%的SDS、0·05%的LAS和0·1%的CHAPS中保持相对稳定,40min酶活保持在50%左右.酶专一底物测试结果表明:黄鳝肠道蛋白酶对弹性蛋白酶的专一底物刚果红弹性蛋白(elastin-CongoRed)有水解活性,而对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的专一底物N苯甲酰L精氨酸乙酯(BAEE)和N乙酰L酪氨酸乙酯(ATEE)无水解活性,表明黄鳝肠道蛋白酶为弹性蛋白酶.

黄鳝蛋白酶的化学修饰

采用NBS,BrAc,IAC,TNBS,PCMB,PMSF, 2 ME 7种化学修饰剂及Ca2+,Mg2+,Na+,K+,Cu2+ 等9 种金属离子和EDTA试剂对黄鳝蛋白酶进行处理, 检测酶活性变化, 以研究酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系, 及金属离子和EDTA对酶活性的影响. 实验结果表明: NBS,BrAc,IAC,TNBS,PMSF对酶的抑制作用很强,而PCMB,2 ME对酶活性影响不大, 说明色氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基和丝氨酸残基的化学修饰对酶的活性影响很大, 为酶活性的必需基团, 而巯基、二硫键等与酶活性无直接关系. Cu2+,Ba2+对酶的活性具有激活作用,Mg2+,Li+和K+对酶有轻微的抑制作用, 而Pb2+,Mn2+和EDTA对酶有很强的抑制作用, Ca2+,Na+ 对黄鳝蛋白酶既无明显的激活作用, 也无明显的抑制作用.

黄鳝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

经Tris-HCl缓冲液(pH8.6)抽提,正丁醇处理,30%—75%硫酸铵分级沉淀分离,DEAE-Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从黄鳝内脏组织中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶。该酶提纯倍数为564倍,比活力达到3015U/mg。酶学性质和动力学性质研究表明,该酶催化磷酸苯二钠的水解反应,最适pH值为10.2,pH小于7和大于12均不稳定;最适温度为40℃,温度高于50℃不稳定;米氏常数Km值为1.17mmo1/L。金属离子对该酶的催化活力有不同的影响,K+对该酶活力无影响,Mg2+对该酶有激活作用,Zn2+对该酶有抑制作用。

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液, 经过正丁醇脱脂, 丙酮分级沉淀, DEAE 琼脂糖离子交换层析和Sephacry1 S 200凝胶过滤, 从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe SOD), 并对其性质进行研究, 最终该酶的比活力为 1500 U/mg, 提纯倍数为368. 5, 回收率为24 .7%. 该酶对KCN不敏感, 而对H2O2敏感, 对热较稳定, 对酸碱有较强的耐受性, 抗胃蛋白酶的破坏. 聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明: 纯化酶蛋白呈一条带, 酶分子量约为 85 kD, 亚基分子量约为16 .5 kD, 等电点为 7. 15.

干酪凝乳酶代用品研究

针对干酪凝乳酶供应短缺 ,为寻找凝乳酶的最适代用品 ,采用L16 ( 4 5)正交实验设计 ,研究加入不同水平的小牛皱胃酶、乳猪胃酶、育肥猪胃酶对干酪生产的影响 ,结果表明 :乳猪胃酶能以50— 66.7%的比例替代小牛皱胃酶 ,育肥猪胃酶不能用来替代。三种凝乳酶对干酪特性好坏影响的排序是小牛皱胃酶 >乳猪胃酶 >育肥猪胃酶。

用人单位未续订书面劳动合同的法律责任

【案情】 原告：陈克斌。 被告：重庆英利房地产开发有限公司（以下简称英利公司）。