猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液和DDPH对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷和３Ｈ－尿嘧啶核苷掺入法及流式细胞术，观察猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对猪肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ）ＤＮＡ、蛋白质合成及细胞周期的影响。结果显示：ＨＥＣ－ＣＭ可促进ＰＡＳＭＣｓ的ＤＮＡ合成，促进ＰＡＳＭＣｓ由静止期（Ｇ０／Ｇ１）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）及有丝分裂期（Ｇ２＋Ｍ期），但对其蛋白质合成无明显影响。ＤＤＰＨ对ＨＥＣＣＭ引起ＰＡＳＭＣｓ的ＤＮＡ合成增高的抑制率为５９．７１％，对Ｇ０／Ｇ１期细胞进入Ｓ期增高的抑制率为２２．５８％，此外，ＤＤＰＨ对ＰＡＳＭＣｓ蛋白质的合成也有抑制作用，抑制率为２４．９３％。

低氧对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_1表达的影响

应用核酸原位杂交及增强化学发光免疫斑点法，观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条 件培养液（ＮＥＣＣＭ和 ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_１（ＴＧＦβ_１） ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果表 明：Ｈ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ表达为Ｎ组的１．３６倍（Ｐ＜０．０１），同时在其培养上清液中，ＴＧＦβ_１蛋白含量也明显升高为Ｎ 组的１．８倍。ＨＥＣＣＭ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ和蛋白表达较ＮＥＣＣＭ组均下降，ｍＲＮＡ为ＮＥＣＣＭ组的９０％，Ｐ＜０．０１。蛋 白含量为后者的６２．２％。提示：（１）低氧促进入胚肺成纤维细胞合成和分泌ＴＧＦβ_１。（２）在低氧条件下，肺动脉内皮 细胞可能合成某种因子，抑制成纤维细胞ＴＧＦβ_１基因转录和蛋白表达。

低氧对人胚肺成纤维细胞表型与增生的影响

采用单层细胞超薄切片技术和免疫细胞化学方法， 观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＮＥＣＣＭ 和ＨＥＣＣＭ） 等不同条件， 对肺血管外膜成纤维细胞的表型与增殖的影响。结果表明： （１） 仅ＨＥＣＣＭ 组成纤维细胞显示表型转变，胞浆内出现微肌丝、致密体、基膜等平滑肌细胞超微结构，粗面内质网明显减少；且此组细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ） 表达较其余３ 组明显增高（Ｐ＜ ０． ０１）； （２） Ｈ 和ＨＥＣＣＭ 组增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ） 表达较Ｎ 和ＮＥＣＣＭ 组明显升高（Ｐ＜ ０． ０１）。结果提示： （１） 低氧可经肺动脉内皮细胞介导， 引起人胚肺成纤维细胞向平滑肌样细胞转化，而单纯低氧无此作用；（２） 低氧可直接或经内皮细胞介导，刺激人胚肺成纤维细胞增殖。

缺氧和DDPH对人胚肺成纤维细胞前胶原mRNA表达的影响

用核酸原位杂交和图像分析等方法，观察直接缺氧（Ｈ）和缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞（ＫＭＢ１７）的前胶原ｐｒｏα１（Ⅰ），ｐｒｏα１（Ⅲ）ｍＲＮＡ表达和抗高血压药１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对此过程的影响。结果发现，Ｈ和ＨＥＣＣＭ均可使ＫＭＢ１７的两型前胶原ｍＲＮＡ表达量增高，明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＤＤＰＨ对ＨＥＣＣＭ组细胞的Ⅰ，Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达增高均有显著的抑制作用（抑制率分别为－４３．９７％和－５６．２２％），而对Ｈ组仅抑制ｐｒｏα１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ的过量表达（－５３．５８％）。提示缺氧可直接或通过肺动脉内皮细胞的介导，促进人胚肺成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达。