基于外泌体miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用

【目的】基于循环外泌体(Exos)miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用。【方法】(1)建立5/6肾切除尿毒症小鼠模型,采用益肾解毒法中药复方(YSJD,8.0 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃治疗3周后,通过超声系统评估小鼠心脏功能,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察心脏组织病理学形态,Masson三相染色法评估心脏纤维化含量,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)活性,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测心脏组织中LC3蛋白表达情况,透射电镜(TEM)观察心肌超微结构。(2)分离小鼠外周血Exos,与小鼠原代心肌细胞共培养,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫荧光染色法检测心肌细胞LC3表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Exos中miR-30表达,采用Western Blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白表达。【结果】益肾解毒法治疗可明显防止尿毒症心肌病(UCM)诱导的心脏功能障碍、心脏形态变化和重塑,降低血清CK-MB和LDH水平,抑制UCM小鼠心肌细胞凋亡,抑制自噬囊泡形成和自噬标记蛋白LC3的表达。从各组外周血中分离Exos,并通过RT-qPCR证实UCM+YSJD组Exos中miR-30表达较UCM组显著下调(P<0.001)。当在UCM+YSJD-Exos与原代心肌细胞共培养系统中向心肌细胞转染miR-30时,心肌细胞的凋亡率、自噬体形成和自噬相关蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。【结论】益肾解毒法可通过干预外周血Exos中miR-30转运抑制UCM诱导的心肌细胞凋亡、自噬,发挥心脏保护作用。

灯盏花素通过调节PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体功能诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的研究灯盏花素对HeLa细胞增殖、凋亡、ROS产生和线粒体功能障碍的作用及其相关作用机制。方法采用人宫颈癌细胞系HeLa为研究对象。分别采用MTT法、流式细胞术、DCFH⁃DA探针和线粒体肿胀试验检测灯盏花素对HeLa细胞增殖、凋亡、ROS产生和线粒体功能的影响。应用Western blot检测线粒体功能障碍的特异性蛋白以及PINK1/Parkin途径表达。应用小干扰RNA(siRNA)技术敲低PINK1表达以验证灯盏花素作用机制。结果灯盏花素以剂量依赖性方式抑制细胞活力、诱导细胞凋亡和促进细胞内ROS的产生(P<0.01)。随着灯盏花素浓度的增加,HeLa细胞线粒体肿胀逐渐增加(P<0.001)。在HeLa细胞中,Bax/Bcl⁃2的比例、Cyt C和Cleaved caspase⁃3随灯盏花素浓度的增加而上调(P<0.01)。同时,灯盏花素处理后,Cyto Cyt C的释放显著增强(P<0.01),而Mito Cyt C的水平明显降低(P<0.01)。与对照组相比,灯盏花素治疗后PINK1和Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。进一步功能学评价显示,PINK1基因敲低与灯盏花素治疗产生了类似的抑制HeLa细胞活力,提高凋亡细胞百分率和促进ROS产生等体外活性结果。结论灯盏花素治疗抑制了PINK1/Parkin通路,从而抑制HeLa细胞活力,提高凋亡细胞百分率和促进ROS产生。

基于线粒体自噬探讨中医治疗慢性肾脏病心脏损害的研究概况

心脏损害常见于慢性肾脏病患者,心肾两脏“水火既济”。慢性肾脏病累及多个脏腑,以气血阴阳正虚为本,瘀毒、痰湿为标,病位主要在脾肾。线粒体自噬水平与心肾功能关系密切,现将慢性肾脏病并发心脏损害病因病机、慢性肾脏病对心肌细胞线粒体联系相结合,探讨慢性肾脏病心脏损害中线粒体自噬的作用及中医药干预线粒体自噬的机制。

慢性肾脏病心脏损害血瘀病机与法治探讨

慢性肾脏病常伴心脏损害,其病机为正虚邪实,正虚以心脾肾虚为主,邪实以水湿、痰浊、气滞、浊毒为主;血瘀是慢性肾脏病心脏损害中医病机之一,且贯穿于疾病发展的始终,具体可归纳为因虚致瘀、因实致瘀、虚实夹杂致瘀。活血化瘀法在临床治疗中确有疗效,常用药物有丹参、红花等。临证治疗时重在活血化瘀,具体运用时当依据病情辨证论治。

浊毒对慢性肾脏病心脏损害的影响及其防治探讨

慢性肾脏病有诸多并发症,而心脏损害并发症为其最常见及最严重的并发症。随着现代研究发现,慢性肾脏病心脏损害与毒素相关危险因素密切相关。慢性肾脏病体内蓄积的毒素对机体造成的影响与中医浊毒临床表现极为相似,故认为浊毒在慢性肾脏病心脏损害发病中担任重要作用。通过从对浊毒的认识、浊毒与慢性肾脏病心脏损害病机、浊毒与慢性肾脏病心脏损害的关系,基于“浊毒”理论对慢性肾脏病心脏损害的防治等方面进行探讨。

肾衰泄浊汤及其拆方对UUO大鼠VEGF/VEGFR信号通路的影响

目的研究肾衰泄浊汤及其拆方对单侧输尿管梗阻大鼠模型(UUO)大鼠VEGF/VEGFR信号通路的影响。方法144只健康雌性SD大鼠建立UUO模型,再随机分为假手术组、补虚方组、袪邪方组、肾衰泄浊汤组、贝那普利组及模型组,每组24只,各组大鼠于第7、14、21天处死。取肾脏组织行HE、Masson染色,并在光镜、电镜下观察,评分;采用Western blot检测各组大鼠肾组织中α-SMA、VEGFA、VEGFR2蛋白表达水平。结果同时期各组比较,模型组BUN、SCr较其他组升高明显(P<0.05);治疗组BUN、SCr较其他组明显下降(P<0.05);其中肾衰泄浊汤组疗效最明显(P<0.05)。HE、Masson染色结果:除假手术组外,术后7 d各组均可观察到炎症和坏死病变,术后14、21 d可观察到炎症和纤维化,模型组纤维化程度最重。Western blot结果:假手术组α-SMA、VEGFA、VEGFR2少量表达,模型组中α-SMA、VEGFA、VEGFR2的表达随时间增长逐渐增多(P<0.05)。同时期各治疗组α-SMA、VEGFA、VEGFR2蛋白的表达较模型组均有所减少,而补虚方、祛邪方组VEGFA蛋白表达较之稍有提升(P<0.05)。肾衰泄浊汤组第21天蛋白减少较其他治疗组更明显(P<0.05)。结论肾衰泄浊汤及其拆方可能通过抑制VEGF信号通路,减少α-SMA、VEGFA、VEGFR2表达,干预UUO大鼠周细胞-肌成纤维细胞转分化过程,达到抗肾间质纤维化的作用。

肾衰泄浊汤及其补虚、祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究肾衰泄浊汤及其补虚,祛邪组分对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法:通过结扎单侧输尿管建立UUO大鼠模型。SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,贝那普利组,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组;每组24只。手术后第3天,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组大鼠均按0. 8 g·mL^-1肾衰泄浊汤浓缩剂给药,即给药剂量为8. 0 g·kg^-1·d^-1体质量灌胃;贝那普利组大鼠给贝那普利1. 5 mg·kg^-1·d^-1体质量灌胃,假手术组,模型组大鼠给等量生理盐水灌胃。术后第7,14,21天,分别用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中周细胞及相关信号通路标志物表达情况。结果:与模型组比较,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组在UUO后第14,21天的间质损伤评分和间质胶原的积累均显著降低(P<0. 05)。除假手术组外,各组在第14,21天的肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),血小板衍生生长因子A(PDGFA),神经/胶质细胞2型硫酸软骨素糖蛋白(NG-2),血管内皮生长因子A(VEGFA),血管内皮生长因子受体1(VEGFR1),血小板源性生长因子β(PDGF-β),血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)的蛋白表达均较第7天显著增加(P<0. 05)。在手术后第21天,肾衰泄浊汤组的肾组织中NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-β蛋白表达均显著低于模型组(P<0. 05)。与模型组比较,肾衰泄浊汤组在手术后第21天的肾组织中α-SMA,PDGFA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGF-β,PDGFR-βmRNA相对表达量均显著降低(P<0. 05),并且肾衰泄浊汤组在手术后第21天α-SMA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-βmRNA相对表达量显著低于贝那普利组(P<0. 05)。结论:肾衰泄浊汤复方及其补虚,祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化均具有拮抗作用,其作用机制与抑制周细胞及其相关细胞信号通路激活有关。