重组细胞因子基因衍生蛋白与干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效研究

目的观察比较应用重组细胞因子基因衍生蛋白或干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效.方法2019年3月~2021年3月我院诊治的65例血清HBeAg阳性的CHB患者被分成两组,分别给予干扰素α-2b联合恩替卡韦治疗或重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗48 w.常规检测血清生化学、血清学和病毒学指标.结果在治疗12 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为34.4%和25.0%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的9.1%和6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗48 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清ALT复常率、血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为87.5%、62.5%和40.6%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的78.8%、30.3%和18.2%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗期间,联合干扰素治疗组乏力和发热头痛发生率分别为21.2%和84.9%,显著高于联合衍生蛋白治疗组的3.1%和3.1%(P<0.05),而两组中性粒细胞减少、血小板减少、食欲下降和低钙血症等不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论相比于干扰素α-2b联合恩替卡韦,应用重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的CHB患者能够获得更好的血清学转换率和较小的不良反应,值得进一步观察研究.

蛋白组学分析胰腺癌干细胞相关差异蛋白的表达

目的:筛选与鉴定胰腺癌干细胞相关的差异表达蛋白质.方法:以MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)为研究胰腺癌干细胞的工具细胞,采用荧光差异双向凝胶电泳技术分离并筛选上述细胞差异表达蛋白,反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白,免疫印迹验证差异表达的TRIM28.结果:获得了MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)荧光差异蛋白表达图谱,经DeCyder v6.5软件分析,共有23个差异在1.5倍以上的蛋白质点,经质谱鉴定得到19个蛋白质,相对于BxPc-3(TIClow),在MIA-PaCa2(TIChigh)细胞组中高表达者有8个,低表达者有11个,包括参与细胞通讯和信号传导蛋白、免疫反应蛋白、转录因子与细胞周期调控蛋白、调节脂肪细胞分化和脂滴形成蛋白、细胞骨架蛋白、细胞黏附分子、差向异构酶、转运活性蛋白及参与翻译调节相关蛋白.免疫印迹结果显示TRIM28在BxPc-3(TIClow)没有表达,在MIA-PaCa2(TIChigh)高表达.结论:筛选得到的TRIM28等胰腺癌干细胞相关差异表达蛋白可能与胰腺癌干细胞的发生、发展和调控机制相关,有望成为胰腺癌新的治疗靶点.

胰腺癌干细胞差异基因的表达及生物信息学分析

目的:筛选与胰腺癌干细胞相关的差异表达基因,并进行生物信息学分析.方法:以MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)为研究胰腺癌干细胞的工具细胞制备总RNA,经质量鉴定后进行荧光标记;采用Agilent人全基因4*44K芯片进行杂交实验,获得mRNA表达谱;以Gene Spring Software 11.0软件和Quantile算法分析芯片实验数据,筛选与胰腺癌干细胞相关的差异mRNAs;基于Gene Ontology数据库进行GO注释,基于KEGG数据库进行Pathway注释.结果:获得符合基因芯片实验质量标准的RNA样品,基因芯片杂交及数据分析得到差异表达mRNAs 7059个(P<0.05,fold change≥2),其中MIA-PaCa2(TIChigh)中上调表达3440个,下调表达3619个.GO注释显示他们主要涉及多胺代谢过程、含碱基的小分子相互转换、组蛋白H4乙酰化、细胞分裂、细胞周期、凋亡、Toll样受体信号转导通路等.Pathway注释主要涉及癌症的途径、内吞作用、O-糖基化生物合成、嘧啶代谢、谷胱甘肽代谢等.信号通路调控网络图显示多条信号通路存在交叉对话.结论:筛选出的差异表达基因可能参与胰腺癌干细胞的发生发展,参与不同信号通路的调控,并有可能成为胰腺癌新的治疗靶点.

siRNA沉默KAP-1表达抑制胰腺癌细胞PANC-1的侵袭能力

目的:观察siRNA沉默KAP-1基因表达对人胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力的影响,探求该基因作为治疗靶点的可行性.方法:针对KAP-1基因设计5条siRNA,构建真核表达载体,转染293T细胞筛选RNAi有效靶点,包装成重组慢病毒Lv-siRNA-KAP-1,感染胰腺癌细胞PANC-1成功后RT-qPCR检测RNA干扰沉默效果,Transwell小室检测细胞侵袭能力.Western blot检测波形蛋白表达.结果:转染48h后,5条siRNA能显著抑制KAP-1的蛋白表达;其中最有效的1条siRNA包装成重组慢病毒Lv-siRNA-KAP-1,感染PANC-1细胞侵袭能力明显受到抑制;感染后细胞侵袭数目(97.3±25.6)较空白对照组(253.3±20.6)与阴性对照组(213.2±19.4)明显减少,差异显著(P<0.05);感染后PANC-1细胞的波形蛋白表达下调.结论:Lv-siRNA-KAP-1能显著抑制PANC-1细胞KAP-1的表达,抑制PANC-1细胞侵袭能力及波形蛋白表达,KAP-1基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点.

波形蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究波形蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化学的方法检测56例胰腺癌组织中波形蛋白的表达,并分析其临床病理意义。结果免疫组化显示全部病例切片中可见波形蛋白表达,在低分化的胰腺癌细胞中高表达,高分化的胰腺癌细胞中低表达,其表达与患者年龄、性别、肿瘤部位及范围无关(P>0.05),与病理分级、淋巴结转移、远处转移及TNM分期(P<0.05)相关。结论检测波形蛋白在胰腺癌细胞中的表达,可以作为胰腺癌预后的一个指标。

KAP-1在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:研究KAP-1在胰腺癌组织和细胞株中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法检测46例胰腺癌标本(高分化15例,中分化17例,低分化14例)及9例正常胰腺标本中的KAP-1表达;采用RT-qPCR和Western blot的方法检测8对胰腺癌组织和配对癌旁组织标本中KAP-1的mRNA和蛋白质水平;采用RT-qPCR和Wsetern blot检测胰腺癌细胞株BxPC3、PANC-1、AsPC-1、SW1990、MIAPaCa-2、CFPAC-1、Capan-1和Capan-2中KAP-1mRNA和蛋白的表达水平.结果:免疫组织化学结果显示KAP-1在胰腺癌组织中阳性表达率为45.6%(21/46例),正常胰腺组织中阳性表达率为11.1%(1/9);在低分化胰腺癌组织中阳性表达率为78.6%(11/14),中分化胰腺癌组织为47.1%(8/17),高分化胰腺癌组织为13.3%(2/15);RT-qPCR和Western blot显示在胰腺癌组织中KAP-1的mRNA和蛋白质水平较癌旁正常胰腺组织高,KAP-1的mRNA水平在Panc-1中最高,在BXPC-3和CFPAC-1中较高,在SW1990、Capan-1和MIAPaCa-2中较低,在AsPC-1和Capan-2中最低.KAP-1蛋白质水平在低分化胰腺癌细胞株MIAPaCa-2和Panc-1中高,来源于肝转移的胰腺癌细胞系CFPAC-1中较高,其余细胞株中不表达.结论:KAP-1在胰腺癌组织中高表达,正常胰腺组织中几乎不表达,其表达与胰腺癌细胞分化相关;KAP-1可能在胰腺癌发生发展中发挥重要作用.

Hsa-microRNA-138慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:构建hsa-microRNA-138慢病毒表达载体。方法:PCR扩增pri-miR-138-2前体序列,克隆至plenti-GFP慢病毒表达载体,双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测;构建成功后感染人胰腺癌细胞PANC-1,48 h后Real-time Q-PCR检测miR-138的表达。结果:酶切、测序鉴定证明插入序列正确,测定病毒滴度为1×109TU/ml,病毒感染48 h后的PANC-1胰腺癌细胞观察可见绿色荧光,Real-time Q-PCR显示被感染细胞的miR-138表达量较未感染细胞显著增高。结论:建立了高效稳定表达hsa-miR-138的慢病毒转染系统。

慢病毒介导KAP-1增强胰腺癌细胞Capan-2侵袭能力

目的观察KAP-1基因对人胰腺癌细胞Capan-2侵袭能力的影响,探求该基因作为治疗靶点的可行性。方法针对KAP-1基因构建真核表达载体,在293T细胞中包装成重组慢病毒Lv-eGFP-KAP-1,RT-qPCR和Western Blot法检测其对Capan-2细胞KAP-1的影响,Transwell侵袭小室检测其对Capan-2细胞侵袭能力的影响。结果成功地构建Lv-eGFP-KAP-1,感染Capan-2后细胞侵袭数目(128.3±4.6)较空白对照组(45.3±2.6)与阴性对照组(36.2±3.4)明显增加,差异有显著性(P<0.05)。结论 Lv-eGFP-KAP-1能显著上调Capan-2细胞KAP-1的表达,增强其侵袭能力,KAP-1基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点。

胰腺癌干细胞差异microRNAs的表达及生物信息学

目的:筛选与胰腺癌干细胞相关的差异表达miRNAs,并进行生物信息学分析.方法:以MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)为研究胰腺癌干细胞的工具细胞制备总RNA,经质量鉴定后进行荧光标记;采用Agilent人类miRNA芯片进行杂交实验,获得miRNA表达谱;以Gene Spring Software 11.0软件和Quantile算法分析芯片实验数据,筛选与胰腺癌干细胞相关的差异miRNAs;荧光定量PCR验证部分差异表达miRNAs;基于Sanger数据库预测差异miRNA靶基因,基于Gene Ontology数据库进行GO注释,基于KEGG数据库进行Pathway注释.结果:获得符合基因芯片实验质量标准的RNA样品,基因芯片杂交及数据分析共鉴定到940个miRNAs,得到91个差异表达miRNAs(P<0.05,fold change≥2),其中MIAPaCa2(TIChigh)中下调表达45个,上调表达46个.荧光定量PCR验证21条差异miRNAs,其中19条均与芯片结果相符.TargetScan6.0数据库靶基因预测共得到2895条靶基因,GO注释显示他们主要涉及轴突导向、血管生成、转录后蛋白修饰等功能.Pathway注释显示主要涉及癌症途径、细胞-基质黏附途径、Hedgehog信号途径、MAPK信号途径等信号通路.结论:筛选出的胰腺癌干细胞相关差异表达miRNAs调控多种具有不同细胞功能和参与不同信号通路的基因,有可能成为胰腺癌新的治疗靶点.

胰腺癌组织中Septin 11的表达及临床意义

目的探讨胰腺癌组织中Septin 11的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测56例胰腺癌组织中Septin 11的表达,并分析其临床病理意义。结果免疫组织化学显示全部病例切片中可见Septin11表达,在低分化的胰腺癌细胞中高表达,在高分化的胰腺癌细胞中低表达,其表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、范围及淋巴结转移无关(P>0.05),与病理分级、远处转移及TNM分期相关(P<0.05)。结论检测胰腺癌组织中Septin 11的表达,可以作为胰腺癌预后的一个指标。

慢病毒介导Vimentin基因沉默抑制胰腺癌细胞侵袭和粘附的机制

目的应用慢病毒介导的shRNA基因沉默技术,有效沉默人胰腺癌细胞株Panc-1中Vimentin表达,并探讨下调Vimentin后对Panc-1细胞侵袭运动及粘附能力的影响及其机制。方法 Lv-VIM-GFP-shRNA慢病毒转染人胰腺癌细胞株Panc-1,Real-time PCR、Western blot和免疫荧光法检测慢病毒转染后Vimentin的沉默效率;Transwell小室体外运动侵袭实验及划痕实验比较细胞运动侵袭能力变化,细胞粘附实验检测细胞粘附能力的变化;Real-time PCR和Western blot检测肿瘤侵袭和粘附相关因子的表达,免疫荧光法观察转染前后细胞骨架蛋白F-actin和黏着斑激酶FAK的变化。结果 Lv-VIM-GFP-shRNA慢病毒转染Panc-1后能稳定下调其Vimentin的表达(P<0.01)。Transwell小室及划痕实验显示,下调Vimentin后能显著抑制Panc-1细胞的侵袭及迁移能力(P<0.01)。粘附实验结果显示,粘附30min后,转染Lv-VIM-GFP-shRNA组较对照组粘附CollagenⅣ和FN的细胞数量均减少(P<0.05)。下调Vimentin后对肿瘤侵袭及粘附相关因子的mRNA和蛋白水平无明显影响(P>0.05),但能引起细胞骨架F-actin的解聚以及黏着斑激酶FAK的重排。结论 Vimentin基因沉默后可能通过引起F-actin骨架解聚、黏着斑激酶FAK重排来降低细胞与细胞外基质的粘附及细胞运动能力,从而抑制胰腺癌细胞的侵袭和转移。

口服甘露醇法在多层螺旋CT小肠造影中的应用

目的:探讨口服甘露醇法多层螺旋CT小肠造影(MSCTE)对小肠梗阻、炎症性疾病、小肠肿瘤以及小肠血管性病变的诊断价值。方法:对196例临床怀疑小肠疾病的患者口服大量2.5%等渗甘露醇后行MSCTE检查,根据MSCTE表现做出临床诊断,将诊断结果与手术、病理、内镜或数字减影血管造影(DSA)结果对照,评估MSCTE对小肠梗阻、炎症性病变、小肠肿瘤以及小肠血管性病变的诊断价值。结果:经手术、病理、内镜或DSA证实小肠疾病117例,MSCTE误诊11例,总诊断正确率为90.6%(106/117)。MSCTE的CT血管造影(CTA)诊断小肠及肠系膜血管性病变的诊断正确率为100%(37/37)。结论:口服甘露醇法MSCTE在多种小肠疾病诊断中具有较高的临床应用价值。

Rac1对胰腺癌增殖的影响及其机制

目的:探讨Rac GTP酶激活蛋白1(Rac GTP ase activating protein1,Rac1)对胰腺癌细胞增殖的影响及其机制.方法:分别采用EDU和CCK-8(cell counting kit-8)方法检测Rac1对胰腺癌细胞增殖的影响;采用Western blot、免疫荧光等试验探讨Rac1影响胰腺癌增殖的具体机制.结果:Rac1可以促进胰腺癌细胞的增殖,沉默Rac1或者Rac1特异性阻滞剂NSC 23766可以抑制胰腺癌的增殖,且进一步的机制研究发现Rac1通过促进β-Catenin进入细胞核,上调wnt-β-Catenin信号通路靶基因c-myc、c-jun和Cyclin D1的表达,进而促进胰腺癌细胞的增殖.结论:Rac1通过wnt-β-Catenin信号通路促进胰腺癌细胞的增殖.

组合型血液净化联合早期肠内营养治疗急性高脂血症性胰腺炎

目的:观察组合型血液净化联合早期肠内营养治疗高脂血症性胰腺炎疗效。方法:将35例急性高脂性胰腺炎患者分为实验组和对照组,两组均予以常规治疗及组合型(血液灌流+血液透析)血液净化,实验组给予早期肠内营养,观察两组治疗前后血清甘油三脂、总胆固醇、尿素氮、肌酐、淀粉酶及急性生理和慢性健康状态评分(APACHEⅡ);比较两组治疗7 d后血浆内毒素及C反应蛋白变化,同时比较住院时间及并发症形成情况。结果:两组患者经组合型血液净化后,血清甘油三脂、总胆固醇及APACHEⅡ均下降,治疗后第7天实验组血浆内毒素水平为(25.1±7.3)EU/L、C反应蛋白(83.2±4.6)mg/L,对照组为(51.5±8.5)EU/L和(101.1±5.9)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:组合型血液净化联合早期肠内营养治疗高脂血症性胰腺炎能显著降低血脂并保护肠道黏膜屏障,使高脂血症性胰腺炎患者得到较好治疗。

原发性肺癌患者血清的代谢组学初步研究

目的:分析原发性肺癌患者血清中小分子代谢产物的改变。方法:利用质子核磁共振(1H NMR)检测18例肺癌(病例组)和同期17例正常体健者(对照组)血清中小分子代谢产物α-葡萄糖、不饱和脂肪酸、肌酐、丙氨酸、谷氨酸盐、丙三醇、苏氨酸、异亮氨基酸、低密度脂蛋白、3-羟丁酸、脂类以及极低密度脂蛋白含量,通过主成分分析法比较两组受检者血清中小分子代谢产物含量的变化。结果:1H NMR图谱能明显区分实验组和对照组血清小分子代谢产物,实验组血清中α-葡萄糖、不饱和脂肪酸及肌酐含量较对照组明显增加,丙氨酸、谷氨酸盐、丙三醇、苏氨酸、异亮氨基酸、低密度脂蛋白、3-羟丁酸、脂类及极低密度脂蛋白较对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:原发性肺癌患者血清中小分子代谢产物与正常体健者存在差异,原发性肺癌患者血清丙氨酸、谷氨酸盐、丙三醇、苏氨酸以及异亮氨基酸可能成为原发性肺癌诊断标志物。

miRNA-1181通过抑制STAT3影响人胰腺癌细胞的侵袭转移能力

目的:探讨miRNA-1181(miR-1181)对人胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响以及机制。方法:选取胰腺癌细胞系PANC-1和MIA Pa Ca-2进行实验并构建miR-1181过表达慢病毒载体(miR-1181U),低表达慢病毒载体(miR-1181D)以及空载慢病毒载体(NC),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测感染效率;Transwell实验以及划痕实验检测miR-1181对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响,免疫荧光检测miR-1181对细胞骨架的影响,Western bolt检测STAT3的表达;构建si-STAT3并转染miR-1181低表达组(miR-1181D),重复transwell实验验证STAT3是其靶基因。结果:qRT-PCR显示3条不同序列的si-STAT3均能显著下调STAT3的表达;Transwell实验及划痕实验显示上调miR-1181后能显著抑制胰腺癌细胞的侵袭转移(P<0.05),下调miR-1181后能显著促进胰腺癌的侵袭转移(P<0.05);Western blot显示miR-1181U能抑制STAT3的表达,miR-1181D能促进STAT3的表达;免疫荧光显示在PANC-1细胞中过表达miR-1181后,F-肌动蛋白(F-actin)被剪切,呈现低表达,导致其运动结构和极性的缺失,从而迁移能力变弱;si-STAT3以后能减弱miR-1181D组对侵袭转移的促进作用。结论:miR-1181可能通过抑制STAT3来抑制人胰腺癌细胞的侵袭转移能力,有望成为胰腺癌治疗的潜在靶点。

2016年新加坡国家癌症中心肝细胞癌指南

肝细胞癌（HCC）发病率位居全球常见恶性肿瘤的第6位,但却是第2大致死性肿瘤。从2009年到2013年,HCC一直位居新加坡癌症相关死因男性第3位和女性第4位。世界上不同区域的HCC病因和临床表现不尽相同,且新的治疗手段不断涌现,目前尚未形成被广泛认可和接受的临床实践指南。许多国家和地区现有的指南只能反应该地区的流行病学特征和该区域的诊疗经验。

肝门部胆管癌的外科治疗

肝门部胆管癌由于解剖位置特殊,预后较差一直是外科医生关注的焦点,根治性切除仍然是肝门部胆管癌唯一可能获得治愈希望的方法.目前,在肝门部胆管癌的外科治疗方面还存在很多问题和争议,本文结合我们的临床经验就其外科治疗作一述评.

中性粒细胞/淋巴细胞比值在胆囊癌根治术预后评估中的应用

目的:探讨中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)是否可以作为胆囊癌患者接受根治术后的预后指标.方法:回顾性分析2007-01/2010-06华中科技大学同济医院胆胰外科接受胆囊癌根治术治疗的胆囊癌患者的资料.根据患者术前外周静脉血NLR值分为低NLR组(NLR<5.0)和高N L R组(N L R≥5.0).比较两组患者的人口学、临床资料及病理学的差异.用单因素回归方法分析影响患者长期生存的变量,并将有统计学意义的变量导入COX多因素回归模型得到影响胆囊癌预后的独立危险因素.结果:本研究纳入了90例患者(低NLR组74例,高N L R组16例).低N L R组和高N L R组胆囊癌患者5年生存率分别为70.9%和27.6%(P<0.05).单因素分析显示肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、侵犯肝脏、T分期、TNM分期、NRL(P<0.05)为影响胆囊癌预后的因素.COX多因素分析表明NLR是影响胆囊癌预后的独立危险因素(P<0.05).结论:NLR可以作为胆囊癌根治术后的预后因素,术前NLR≥5提示胆囊癌患者预后不良.