保肾通络方含药血清对高糖培养足细胞Nephrin、 Desmin蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨保肾通络方含药血清对于高糖培养下足细胞肾病蛋白(Nephrin)、结蛋白(Desmin)表达及细胞凋亡的影响。方法:细胞实验分为正常对照组、模型组和保肾通络方低、中、高剂量组。正常对照组足细胞予DMEM低糖培养基培养,模型组和保肾通络方不同剂量组予含有30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基培养。保肾通络方不同剂量组足细胞在高糖培养基中分别加入保肾通络方含药血清低、中、高剂量进行干预,正常对照组及模型组加入等剂量空白血清。CCK-8法检测足细胞的细胞活性,免疫荧光及RT-PCR检测足细胞Nephrin、Desmin蛋白及mRNA表达水平,免疫荧光检测足细胞凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白表达,Hochest33258染色检测足细胞凋亡情况。结果:与正常对照组比较,模型组足细胞的细胞活性明显降低,Nephrin蛋白表达明显下调,Desmin、Caspase-3蛋白表达明显上调,足细胞凋亡细胞数目明显增加(均P<0.05)。与模型组比较,保肾通络方低、中、高剂量组足细胞的细胞活性明显升高,Nephrin蛋白表达明显上调,Desmin、Caspase-3蛋白表达明显下调,足细胞凋亡数目明显减少(均P<0.05)。结论:保肾通络方可能通过上调足细胞Nephrin蛋白表达,下调Desmin蛋白表达,抑制足细胞凋亡,进而减轻足细胞损伤。

保肾通络方抑制DN小鼠肾小球炎症和系膜基质增生减轻肾脏损伤机制研究

[目的]探讨保肾通络方对于糖尿病肾病(DN)小鼠肾小球炎症及系膜基质增生的影响。[方法]KK-Ay小鼠高脂喂养4周建立DN小鼠模型。造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另外选取C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组予保肾通络方灌胃,缬沙坦组予缬沙坦灌胃,模型组及正常对照组予等剂量的蒸馏水灌胃。连续灌胃12周。在灌胃0、4、8和12周收集24 h尿液检测尿蛋白水平。灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。苏木精-伊红(HE)、糖原(PAS)、Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化检测各组小鼠肾小球Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)及纤连蛋白(FN)表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠肾小球CollagenⅣ及FN的mRNA表达水平,酶联免疫法检测各组小鼠肾组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。[结果]与正常对照组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;肾小球基质蛋白CollagenⅣ及FN蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.05);肾组织TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,保肾通络方及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平明显降低(P<0.05);肾小球系膜细胞增多及细胞外基质增生明显减轻;肾小球细胞外基质蛋白CollagenⅣ及FN蛋白和mRNA表达明显下调(P<0.05);肾组织TNF-α和IL-6水平明显下降(P<0.05)。[结论]保肾通络方能够降低DN小鼠蛋白尿,改善肾功能,并且能够抑制肾小球炎症和系膜基质增生,减轻肾脏病理损伤。

保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响

目的观察保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为正常对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组,每组5只。保肾通络方低、中、高剂量组大鼠分别予浓度为0.5、1.0、2.0 g/mL的保肾通络方颗粒剂药液灌胃,正常对照组大鼠予等容积蒸馏水灌胃。各组大鼠均连续灌胃7 d,通过腹主动脉取血并分离出含药血清。将永生化小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组。正常对照组肾小球系膜细胞予DMEM低糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,高糖对照组肾小球系膜细胞予含30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,保肾通络方低、中、高剂量组肾小球系膜细胞分别予高糖培养基+10%的保肾通络方低、中、高剂量含药血清培养。培养24 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性情况,免疫荧光法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ)及纤维连接蛋白(FN)表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达情况。结果高糖对照组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与正常对照组比较明显升高(P<0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与高糖对照组比较明显降低(P<0.05),但保肾通络低、中、高剂量组细胞增殖活性组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与正常对照组比较均升高(P<0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与高糖对照组比较均降低(P<0.05),但保肾通络方低、中、高剂量组CollagenⅣ及FN灰度值组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与正常对照组相比均明显上调(P<0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与高糖对照组比较均明显下调(P<0.05),但保肾通络方各剂量组CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论保肾通络方可以降低DN肾小球系膜细胞增殖活性,抑制细胞外基质增生,减少CollagenⅣ及FN蛋白的表达,并能够下调CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达,从多途径对DN进行干预治疗。

糖肾宁对KK-Ay小鼠足细胞上皮间质转分化的作用研究

目的探讨糖肾宁对KK-Ay小鼠足细胞上皮间质转分化的影响。方法采用KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病小鼠模型,随机分为模型组、糖肾宁组及缬沙坦组,每组10只,并将10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。各组小鼠干预给药12周后处死,心尖取血、摘取双侧肾脏,进行相应指标检测。使用酶联免疫法检测血清肌酐及尿素氮水平,PAS染色观察各组小鼠肾组织细胞外基质增生情况,免疫组化检测各组小鼠肾组织Collagen I及FN蛋白表达,WB及RT-PCR检测各组小鼠足细胞P-cadherin和FSP-1的蛋白及mRNA表达。结果(1)与正常对照组相比,模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05)。(2)与正常对照组相比,模型组小鼠肾小球细胞外基质明显增生,基质蛋白Collagen I及FN表达上调(P<0.05);与模型组相比,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠肾小球细胞外基质增生减轻,基质蛋白Collagen I及FN表达明显下调(P<0.05)。(3)与正常对照组相比,模型组小鼠足细胞P-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05),FSP-1蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05);与模型组相比,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞P-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05),FSP-1蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论糖肾宁能够抑制糖尿病肾病小鼠足细胞上皮间质转分化,可能是其减轻肾小球细胞外基质增生、延缓疾病进展的分子机制。

糖肾宁对糖尿病性肾脏病小鼠足细胞Nephrin、Synaptopodin蛋白表达的影响

目的观察糖肾宁对糖尿病性肾脏病(DKD)小鼠足细胞功能蛋白Nephrin及Synaptopodin的作用。方法 8周龄KK-Ay小鼠高脂饲料喂养4周建立DKD小鼠模型后,随机分为模型组、糖肾宁组和缬沙坦组,另选取相同月龄的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。糖肾宁组予20 g/(kg·d)的糖肾宁(生药)灌胃,缬沙坦组予10 mg/(kg·d)缬沙坦灌胃,正常对照组及模型组予等剂量蒸馏水灌胃,连续灌胃12周。在灌胃0、4、8、12周后收集尿液检测24 h尿蛋白定量,灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平,摘取肾脏,HE、PAS、Masson染色观察肾脏病理,免疫组化检测足细胞Nephrin、Synaptopodin蛋白表达,RT-PCR检测足细胞Nephrin、Synaptopodin的mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平明显降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠肾小球系膜细胞明显增多,细胞外基质明显增生;与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠的肾小球系膜细胞明显减少,细胞外基质增生明显减轻。与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞Nephrin、Synaptopodin蛋白及mRNA水平显著下调(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞Nephrin、Synaptopodin蛋白及mRNA水平显著上调(P<0.05)。结论糖肾宁可以降低DKD小鼠尿蛋白水平,改善肾功能,机制可能与其上调足细胞Nephrin、Synaptopodin蛋白表达,减轻足细胞损伤有关。

甘麦合剂治疗心脾两虚型围绝经期失眠症的临床研究

目的:观察甘麦合剂治疗心脾两虚型围绝经期失眠症的临床疗效。方法:纳入心脾两虚型围绝经期失眠症患者30例,予甘麦合剂颗粒剂冲服,每日2次,连续治疗4周。治疗前后应用身体活动记录仪测定,评定PSQI量表。结果:甘麦合剂可提高患者睡眠总时间(P<0.05),降低患者入睡后觉醒时间(P<0.05),提高患者睡眠效率(P<0.05),降低PSQI分值(P<0.05),总有效率为86.70%(26/30)。结论:甘麦合剂临床疗效较好,可延长睡眠总时间,减少入睡后觉醒时间,提高患者睡眠效率。

保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞p38通路及凋亡的作用研究

目的探讨保肾通络方含药血清对于高糖培养下足细胞p38通路及凋亡的作用。方法足细胞分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测各组足细胞活力,WB检测足细胞P-p38及p38蛋白表达,免疫荧光、RT-PCR检测足细胞凋亡相关蛋白caspase-3蛋白及mRNA表达,Hochest33258染色检测足细胞凋亡情况。结果与正常对照组相比,高糖组足细胞活力明显降低(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组细胞活力明显升高(P <0.05)。与正常对照组相比,高糖组足细胞P-p38蛋白表达明显上调(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组P-p38蛋白表达明显下调(P <0.05)。与正常对照组相比,高糖组足细胞caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组足细胞caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P <0.05)。与正常对照组比较,高糖组足细胞凋亡数目明显升高(P <0.05),与高糖组比较,保肾通络方含药血清组足细胞凋亡数目明显降低(P <0.05)。结论保肾通络方含药血清能够抑制高糖培养下足细胞p38通路激活,减轻足细胞凋亡。

糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响

目的观察糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响。方法利用KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,将造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、糖肾宁组及缬沙坦组。另外选取相同数量的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。糖肾宁组小鼠予20 g·kg-1·d-1的糖肾宁灌胃,缬沙坦组小鼠予10 mg·kg-1·d-1的缬沙坦灌胃,正常对照组及模型组予等剂量蒸馏水灌胃。灌胃时长为12周。分别在灌胃0、4、8、12周时检测24 h尿蛋白,灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。HE、PAS染色观察各组小鼠肾脏病理改变,免疫组化及RT-PCR检测各组小鼠足细胞Caspase-3蛋白表达,TUNEL染色观察各组小鼠足细胞凋亡情况。结果①与正常对照组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05)。②与正常对照组比较,模型组小鼠肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠肾小球系膜细胞减少,细胞外基质增生减轻。③与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)。④与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞凋亡数目明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞凋亡数目明显降低(P<0.05)。结论糖肾宁能够降低糖尿病肾病蛋白尿,改善肾功能,其机制可能与其改善肾脏病理及减轻足细胞凋亡有关。

中医针灸心法教学上的几点认识和思考

我国针灸于2010年已被联合国教科文组织列为人类非物质文化遗产,在全世界针灸的疗效得到了广泛的认可。这对我们在针灸教学中如何提高教学质量,培育针灸“上工”提出了要求。在认真研读尹真老师的《针灸心法浅谈》后,结合临床教学实践,深刻体会到针灸教育在于“形神兼备”、“注重针灸基础理论”、“注重医师自身提升”,此3点即为针灸心法的核心。鉴于此起到抛砖引玉的作用,共同探讨适合现代临床的针灸教学方法。

失眠人群体质分布特点及其对睡眠质量的影响

目的观察原发性失眠患者中医体质分布特点,探讨不同体质对睡眠质量的影响,为失眠的临床防治提供参考。方法选取2018年9月~2019年6月我院收治的160例失眠患者作为观察组,另选取同期30名非失眠人群作为对照组,采用王琦九种体质测评量表评估两组体质,匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评估睡眠质量,分析两组中医体质分布特点及不同体质对睡眠质量的影响。结果观察组平和质占比低于对照组(4.38%vs 90.00%),偏颇质占比高于对照组(95.62%vs 10.00%),差异有统计学意义(P<0.05);观察组主要以气虚、阳虚、气郁质为主,占比分别为27.50%、19.38%、15.63%;观察组气虚、阳虚及气郁质患者PSQI评分均高于阴虚质患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论失眠人群的中医体质多为偏颇质,分布以气虚、阳虚及气郁为主,同时气虚、阳虚及气郁三种体质对患者睡眠质量影响较大。

CBL模式在葛氏拍打治疗腰腿痛教学中的应用

本文介绍了CBL教学模式在葛氏拍打治疗腰腿痛病教学中的应用。通过经典案例的学习,以激发临床医学生对葛氏拍打课程的兴趣,锻炼以发散性思维考虑临床病例的能力,并且在临床实践中掌握葛氏拍打治疗腰腿痛的治疗方法,为今后的临床工作打下坚实的基础。

当归补血汤治疗肿瘤化疗不良反应随机对照临床试验的Meta分析

目的系统评价目前当归补血汤治疗肿瘤化疗不良反应的疗效和安全性。方法电子检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、美国国立医学图书馆(PubMed)、TheCochrane Library,截止2017年12月。应用Cochrane Risk of bias量表评价纳入研究的质量,釆用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入14篇文献,包括1369例患者,Meta分析结局指标结果显示:白细胞水平升高[MD=1.25,95%CI(0.41,2.09),P<0.00001]、血红蛋白水平升高[MD=25.96,95%CI(15.59,36.34),P<0.00001]、血小板水平升高[MD=26.82,95%CI(23.33,30.31),P<0.00001]。IgG水平升高[MD=2.78,95%CI (1.99,3.56),P<0.00001]、IgA水平升高[MD=0.30,95%CI (-0.24,0.85),P<0.00001]、IgM水平升高[MD=0.29,95%CI(0.16,0.41),P<0.00001]、CD3+水平升高[MD=6.56,95%CI(3.79,9.34),P<0.00001]、CD4+水平升高[MD=5.77,95%CI(3.42,8.12),P<0.00001]、CD8+水平降低[MD=-4.73,95%CI(-6.62,-2.83),P<0.00001]、骨髓抑制Ⅲ级和Ⅳ级患者例数减少。结论当归补血汤治疗肿瘤化疗不良反应可以增加血细胞、血清免疫球蛋白水平,使T淋巴细胞水平趋于稳定、减少骨髓抑制。当归补血汤减少肿瘤化疗不良反应有一定优势且安全性高。但结果异质性较大,还需更多高质量随机对照临床试验进行研究。