动脉粥样硬化兔模型血液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶的动态分析

目的 分析实验性动脉粥样硬化 (atherosclerosis,AS)大耳白兔血液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶的变化规律。方法 建立兔动脉粥样硬化模型 ,检测模型各阶段血液中各种脂质、AST、ALT、LDH、CK、Bun、Cre等生化指标。结果 成功地建立了动脉粥样硬化兔模型 ;大白兔在喂食高胆固醇饲料 4周或 12周时 ,血液中总胆固醇 (CHO)和低密度脂蛋白胆固醇 (LDL ch)浓度升高 (P <0 0 5 ) ;AST、ALT的活性和Bun、Cre的含量变化差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而LDH和CK的活性随着动脉粥样硬化的进程而逐渐升高 ,变化差异有显著性 (P <0 0 5 ,ASa组和ASb组的LDH活性分别比对照组升高 2 2倍和 3 5倍 ,CK的活性则分别增加 2 4倍和 7 5倍。VitE组与ASb组比较 ,LDH和CK的活性都显著下降 (P <0 0 5 )。结论 提示血清LDH和CK的活性升高与动脉粥样硬化的进程相关 ;

Vit E对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的 研究动脉粥样硬化 (AS)模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的变化以及VitE对MLCK表达的影响。方法 复制AS兔模型 ;颈动脉取血后检测血清标本中各种血脂成分的变化 ,用免疫组化法和Westernblot分析动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK的表达。结果 成功建立AS兔模型 ,模型血清中各种脂质发生显著变化。免疫组化和West ernblot实验表明 ,动脉粥样硬化模型兔在喂食胆固醇膳食 4wk和 12wk后动脉MLCK的表达增强 ,在喂食胆固醇膳食12wk同时添加VitE时 ,MLCK表达降低。结论 AS模型兔动脉MLCK的表达增强与动脉粥样硬化的形成相关。VitE可能是降低动脉MLCK表达的因素 ,同时抑制动脉粥样硬化的形成。

全反式维甲酸对实验性动脉粥样硬化兔动脉平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对动脉粥样硬化(AS)模型兔动脉骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法复制AS兔模型,采用免疫组化和Western blot分析主动脉OPN的表达。结果成功建立AS兔模型,高脂组兔主动脉OPN蛋白表达水平增加,经ATRA治疗后OPN蛋白表达下降,AS斑块减少。结论ATRA可能通过降低动脉OPN的表达抑制AS的形成。

酒精性脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白表达的变化

目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法采用高脂饮食联合乙醇灌胃制备大鼠脂肪肝模型。在第6周末分别取血和肝组织,常规检测血生化指标和采用Western blot法检测大鼠肝组织骨桥蛋白表达的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平升高(P<0.05),HDL-C降低(P<0.05);油红O染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织OPN蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论骨桥蛋白表达增强在大鼠乙醇性脂肪肝的发病过程中起一定的作用。

从1例罕见高钾血症看检验与临床的关系

我院于2004年1月收治1例罕见的慢性高钾血症患者.在该患者的诊断治疗过程中,检验科与临床的配合可为现代检验与临床的关系提供借鉴.现报道如下.

全反式维甲酸诱导HepG2细胞分化和降低软琼脂克隆形成

目的研究全反式维甲酸(ATRA)体外对人肝癌细胞株(HepG2)分化、软琼脂克隆形成的影响及其机制。方法ATRA处理HepG2,光镜下观察细胞形态,并检测γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、甲胎蛋白(AFP)等分化指标的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析ATRA对HepG2增殖的影响;软琼脂培养法观察HepG2的克隆形成能力;Western blot检测骨桥蛋白(OPN)表达变化。结果ATRA显著抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞分化,使代表肝细胞恶变的γ-GT比活力、AFP分泌量明显下降。ATRA可降低HepG2软琼脂克隆形成能力并使OPN表达减少。结论ATRA是HepG2有效的分化诱导剂,并可抑制HepG2增殖,其分子机制可能与OPN表达减少有关,为ATRA诱导分化治疗肝癌提供了实验依据。

褪黑素对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达及活性的影响

目的探讨褪黑素(melatonin,MLT)对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达与活性的影响。方法复制动脉粥样硬化兔模型,采用免疫组化和Western blot分析主动脉MLCK蛋白表达,γ-32P-ATP参入法检测MLCK活性。结果成功建立动脉粥样硬化兔模型,高脂喂食12wk,兔主动脉MLCK蛋白表达水平增加,活性上升,经MLT治疗后动脉粥样硬化斑块减少,MLCK蛋白表达下降,活性下降。结论动脉粥样硬化的形成与MLCK蛋白表达与活性升高有关,MLT能降低动脉MLCK蛋白表达和活性。

维生素E对动脉粥样硬化兔动脉肌球蛋白轻链激酶活性及内膜通透性的影响

目的 :探讨维生素 E(Vit E)对动脉粥样硬化兔动脉肌球蛋白轻链激酶 (ML CK)活性及内膜通透性变化的影响。方法 :复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 32 P掺入法检测动脉 ML CK活性 ,免疫荧光检测内膜通透性 ,同时用苏木精伊红 (HE)染色观察动脉壁的形态结构。结果 :在喂饲胆固醇膳食 4周的动物组 ,动脉 ML CK活性与正常对照组比较显著升高 (P<0 .0 5 ) ;但在喂饲胆固醇膳食 12周或同时添加 Vit E后 ,动脉 ML CK活性与正常对照组比较升高不明显 (P>0 .0 5 )。荧光显微镜下观察显示 ,兔动脉内膜通透性在喂饲胆固醇膳食后 4周有所增加 ,12周后显著增加 ;12周组膳食中同时加 Vit E后 ,通透性有所下降。结论 :在动脉粥样硬化早期 ,内膜屏障完整性的改变可能与 ML CK活性增强有关 ,Vit E可能是降低动脉内膜 ML CK活性的因素 ,并能降低动脉粥样硬化模型兔动脉内膜通透性。

高脂血症模型兔血清肌酸激酶活性和C反应蛋白含量的动态变化

目的分析兔饮食性高脂血症形成过程中血清肌酸激酶活性和C反应蛋白含量的动态变化。方法高胆固醇饮食诱发兔高脂血症,检测高胆固醇饮食7、14、17、21、25、28d兔血清总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)及肌酸激酶(CK)和C反应蛋白(CRP)的变化。结果成功建立高脂血症兔模型,大耳白兔在喂食高胆固醇饲料7、14、17、21、25、28d后血液中CHO和TG浓度逐渐升高(P<0.05),CK活性和CRP含量随着高脂血症的进程而逐渐升高,变化有显著性差异(P<0.05)。结论提示兔血清CK活性和CRP含量与高脂血症的进程相关。

VitE对动脉粥样硬化模型兔肝脏肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响

目的 探讨维生素E(VitE)对动脉粥样硬化模型兔肝脏MLCK活性及表达的影响。方法 复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 3 2 P参入法检测肝脏MLCK活性 ,免疫荧光法检测肝组织MLCK的表达。结果 动脉粥样硬化兔模型建立成功 ,在喂胆固醇 4wk及 12wk的动物组 ,肝脏MLCK活性[分别为 (1884 8 7± 74 34 3)、(18818 3± 346 9 9)cpm·mg-1protein]与正常对照比较 [(6 6 77 5± 10 9 6 0 )cpm·mg-1pro tein]升高 (P <0 0 5 ) ;但在喂胆固醇同时添加VitE后 ,肝脏MLCK活性 [(10 898 8± 2 0 4 1 2 )cpm·mg-1protein]与正常对照组比较升高不明显 (P >0 0 5 )。荧光显微镜下观察显示 ,兔肝在喂食胆固醇膳食 4wk后MLCK的表达有所增强 ,12wk后显著增强 ,12wk组的膳食中同时加VitE后 ,MLCK表达有所下降。结论 在动脉粥样硬化过程中 ,肝脏病变可能与MLCK活性增强有关 ,VitE可能是降低肝脏MLCK活性的因素 。

褪黑素通过p38／MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞MLCK的表达

目的探讨褪黑素(MLT)通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),分空白对照组、DMSO对照组、DMSO+oxLDL组、DM-SO+oxLDL+SB203580组、DMSO+oxLDL+MLT组、DMSO+oxLDL+MLT+SB203580组。RT-PCR、Western blot、γ-32P-ATP掺入法分别检测各组HUVEC MLCK转录、表达和活性及MLT对p38磷酸化的影响。结果RT-PCR显示oxLDL组MLCK转录增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的转录;Western blot结果表明oxLDL组MLCK表达、p38磷酸化增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的表达及p38磷酸化;γ-32P-ATP掺入法检测MLCK活性提示oxLDL组MLCK活性增强,MLT与SB203580降低MLCK活性。结论MLT可能通过p38/MAPK通路调控MLCK的转录、表达和活性。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对肝癌细胞株HepG2增殖凋亡分化的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物(4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯)对人肝癌细胞株HepG2体外增殖、凋亡及分化情况的影响。方法3种浓度(1、5、10μmol/L)的ATRA衍生物分别处理HepG2细胞,1、2、3、7d后用MTT法检测4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对HepG2细胞增殖的影响;酶动力学法检测γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)比活性和甲胎蛋白(AFP)分泌量变化;流式细胞术分析细胞周期及凋亡情况;Western blot检测HepG2细胞中凋亡相关蛋白的表达量。结果10μmol/L的4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯可明显诱导HepG2细胞凋亡,凋亡率达到49%,并且使代表肝细胞恶变的γ-GT比活性、AFP分泌量明显下降,Western blot显示4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯显著抑制Bcl-2、Bcl-xS/L和p-Erk表达。结论4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯是肝癌细胞HepG2有效的分化诱导剂,并明显促进肝癌细胞凋亡。

临床产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及耐药基因和I类整合子的检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及相关耐药基因之间的关系。方法采用K-B琼脂扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用PCR技术检测相关耐药基因和I类整合子并用DNA序列分析确认其所产生基因型。结果检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%。所有检测菌株对亚胺培南全部敏感;56株ESBLs阳性的菌株有44株扩增到TEM基因(78.6%),SHV型阳性的有2株(3.6%),CTX-M型阳性的有48株(85.7%),OXA型阳性的有1株(1.79%),intI1阳性菌株有35株(62.5%),占未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs细菌最有效的药物;TEM型和CTX-M型ESBLs为我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要基因型,携带I类整合子基因是导致细菌产ESBLs的重要原因。

多重PCR检测临床产ESBLs阴沟肠杆菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌的耐药性、阳性率及基因分布特点。方法改良双纸片法检测80株临床分离阴沟肠杆菌对14种抗生素的耐药性及ESBLs表型,多重PCR检测鉴定ESBLs基因型,DNA测序确认DNA序列。结果 80株阴沟肠杆菌中,29株检出ESBLs,阳性率36.3%。80株阴沟肠杆菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的阴沟肠杆菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢菌素类抗生素的耐药率高达96.1%。29株细菌所产ESBLs中,12株为TEM型,6株为SHV型,24株为CTX-M型。其中CTX-M-1组9株,CTX-M-9组15株,未检出CTX-M-2组及CTX-M-8/CTX-M-25组。结论阴沟肠杆菌ESBLs检出率较高,耐药显著。产ESBLs阴沟肠杆菌的主要基因型为CTX-M型。

阿伐他汀对高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠肝脏骨桥蛋白表达的影响

目的探讨阿伐他汀对高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠肝脏骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法18只4周龄ApoE基因敲除小鼠,随机分为正常组、高胆固醇组、高胆固醇+阿伐他汀组。高胆固醇+阿伐他汀组给予阿伐他汀5mg/(kg·d),12周后获取血和肝脏。分析血清胆固醇和低密度脂蛋白浓度。肝脏组织切片用于HE染色以观察肝脏组织学病变;应用免疫组化PV法检测肝脏组织中OPN的表达;从冰冻肝脏组织中提取蛋白,用Western blot方法检测OPN变化。结果阿伐他汀有显著降血清胆固醇和抑制肝脏的脂肪病变的作用;免疫组织化学和Western blot检测结果显示,高胆固醇+阿伐他汀组OPN表达比高胆固醇组显著降低(P<0.05)。结论阿伐他汀可降低高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠血清胆固醇浓度,抑制肝脂肪变性,下调OPN的表达。

乙醇性脂肪肝模型大鼠肝脏G蛋白表达水平的变化

目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导大鼠肝脏早期脂肪变性的可能机制。方法高脂饮食配合乙醇灌胃,连续6周,制备大鼠脂肪肝模型。6周末取血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);制备石蜡及冰冻切片,进行肝脏病理学检查。Westernblot分析各组大鼠肝脏组织中抑制型G蛋白α1(Gαi1)、抑制型G蛋白α2(Gαi2)、抑制型G蛋白α3(Gαi3)、刺激型G蛋白(Gαs)表达水平的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC明显升高且伴有HDL-C的显著下降;OilRedO(油红O)染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织中的Gαi1、Gαi2、Gαs表达明显下降,Gαi3的表达水平在模型组中呈增高趋势。结论乙醇联合高脂饮食能够进一步诱导大鼠肝脏的脂肪变性,病变程度与乙醇剂量呈正相关,其发病机制可能和G蛋白介导的信号传导通路的改变密切相关。

港口经营人单位赔偿责任限制问题研究

伴随着国际贸易的快速发展,港口行业作为全球化进程的物流枢纽,受到了全球各国的高度重视。本文旨在探讨港口经营人在我国《海商法》中的地位,并结合单位赔偿责任限制制度的立法目的,从多个层面分析赋予港口经营人单位赔偿责任限制的优势。得出在我国法律体系项下,港口经营人应当享有单位赔偿责任限制的权利。

上海地区肝癌标志物AFP、PIVKA、AFU生物参考区间的建立

目的初步建立上海地区肝癌标志物甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)、α-L岩藻糖苷酶(AFU)的生物参考区间。方法收集498例受试者的血清,对其分别通过电化学发光法检测AFP、酶联免疫吸附法检测PIVKA-Ⅱ、速率法测定AFU,并对结果进行统计学分析。结果 AFP的95%参考范围为:18~29岁男性1.12~5.93μg/L,30~49岁男性1.25~9.72μg/L,≥50岁男性1.18~9.93μg/L;18~29岁女性1.00~7.18μg/L,30~49岁女性1.00~6.23μg/L,≥50岁女性1.08~16.23μg/L。PIVKA-Ⅱ的95%参考范围为:18~29岁男性9.28~39.47 mAU/ml,30~49岁男性10.89~35.44mAU/ml,≥50岁男性8.64~35.48mAU/ml;18~29岁女性10.56~38.51mAU/ml,30~49岁女性11.02~27.45mAU/ml,≥50岁女性9.43~49.74mAU/ml。AFU的95%参考范围为:男性9.69~34.15U/L,女性9.78~32.16 U/L。结论上述结果初步构建了上海地区健康成人血清AFP、PIVKA-Ⅱ、AFU的参考区间。在原发性肝癌的临床初筛以及辅助确诊具有临床实用价值。