猪致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱分析

在系统鉴定和药敏试验的基础上，对７０株致病性大肠杆菌进行了质粒指纹图谱分析。结果，菌株的质粒得率为１００％，可分为３２种质粒谱型。分离菌株在遗传距离０．１４０处聚成４类，在遗传距离０．２２４处聚成一大类。来源相同的菌株具有相同或非常相似的质粒图谱和质粒酶切图谱，来源不同的菌株具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱。来源相同菌株的质粒谱相同，而耐药谱可相同亦可不同，两者之间无明显规律。

IL-18和HIV-1gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答

目的 :探讨IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法 :构建含IL 18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 :联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组 (P <0 .0 5 ) ,空白质粒对照组 (P <0 .0 1)和PBS对照组 (P <0 .0 1)。结论 :IL 18和HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫 ,且IL 18发挥了免疫佐剂的作用。

中国株HIV-1核心蛋白Gag核酸疫苗的构建与表达

目的 构建含HIV 1中国流行株B亚型核心蛋白Gag基因的真核表达质粒 ,并在体外进行表达和鉴定。方法 将Gag基因插入到核酸疫苗载体质粒pVAX1中 ,构建真核表达质粒 pVAXGAG。用脂质体法 ,将重组质粒转染入Hela细胞后进行表达产物的检测。结果间接免疫荧光检测显示 ,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。Westernblot和DotELISA分析显示 ,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的Gag蛋白。 结论构建的核酸疫苗可在体外进行表达 。

中国株HIV-1结构蛋白基因gag与gp120在巴斯德毕赤酵母中的融合表达

目的 将中国流行株B亚型HIV 1结构蛋白基因gag和 gp12 0在巴斯德毕赤酵母中进行融合表达。 方法 以酵母分泌型表达质粒 pPIC9为载体 ,构建含HIV 1gag和gp12 0嵌合基因的重组酵母表达质粒pPICGP。用SacI将pPICGP线性化后 ,电转化巴斯德毕赤酵母GS115 ,用PCR的方法鉴定阳性酵母转化子。阳性转化子在巴斯德毕赤酵母中用甲醇进行诱导表达 ,表达产物以SDS PAGE和West ernblot进行分析 ,并对阳性菌株的遗传稳定性进行研究。结果 12个酵母转化子中共筛选到了 8个阳性酵母转化子 ,其整合率为 6 6 .7%。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为 5 70 0 0处有 1条特异蛋白带 ,且能与抗p2 4单抗 (mAb)和抗 gp12 0mAb发生反应。酵母转化子在YPD培养基上传代 10次后 ,其外源基因未丢失。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功地表达了HIV 1gag gp12 0嵌合基因 ,且表达蛋白具有特异性 ,但其Mr较预计计算的值要小 ,说明嵌合基因中的 gp12

中国株HIV-1 gp120核酸疫苗的实验免疫研究

目的 探讨表达中国株HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗在小鼠体内的免疫反应。方法 将表达HIV 1gp12 0的核酸疫苗质粒pVAXP经肌肉注射免疫Balb c小鼠 ,检测免疫小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数量 ,脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果 重组质粒pVAXP免疫组小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数值均比对照组高 (P <0 .0 5 ) ;免疫组脾特异性CTL杀伤活性与对照组相比差异极显著 (P <0 .0 1) ;血清抗体滴度显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 表达HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗质粒pVAXP能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。

共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。

Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

HIV-1 Gag蛋白酵母工程菌表达条件的优化

为了探索构建的表达HIV－1核心蛋白Gag酵母工程菌GS115/pPCGAG的最佳表达条件，我们将该酵母工程菌分别在不同条件下进行诱导表达，通过ELJSA检测培养上清中目的蛋白的表达量来分析最佳表达条件，并分析了浓缩上清时最适硫酸铵饱和度。

HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达

目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。

应用毕赤酵母表达中国株HIV-1核心蛋白Gag

目的 构建含HIV-1Gag全长基因的重组酵母表达质粒pPICGAG，并在毕赤酵母中进行表达。方法用Not I和XhoI将含HIV－1 Gag全长基因的质粒pKSGAG双酶切后，克隆到酵母表达载体pPIC9中，构建了重组表达质粒 pPICGAG。pPICGAG用 SacI线性化后，电转化毕赤酵母 GS115，PCR鉴定阳性酵母转化子，并分别将PCR阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果 酵母转化子的整合率为72．7％。SDS-PAGE结果显示表达蛋白的相对分子质量为55000左右，与预计计算的值相同。Western blot结果显示表达蛋白能与单克隆抗体发生特异性反应。结论 在毕赤酵母中成功地表达了HIV-1核心蛋白Gag，且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。

共表达HIV-1 gp120与IFN-α重组鸡痘病毒诱导特异性CTL的初步研究

目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为靶细胞,用乳酸脱氢酶释放法测定免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性。结果:重组病毒可有效地诱导特异性CTL的产生,且重组病毒免疫组小鼠脾特异性CTL对靶细胞的杀伤活性显著高于FPV对照组(P <0 .0 1)和PBS对照组(P <0. 0 1)。结论:共表达HIV- 1gp12 0和IFN -α的重组鸡痘病毒可激发强烈的细胞免疫,可作为我国HIV- 1疫苗候选株。

质粒指纹图谱法对猪大肠杆菌病的分子流行病学研究

对从母猪和发病仔猪肛拭标本中分离的５株普通大肠埃希氏菌和７０株致病性大肠埃希氏菌进行了质粒指纹图谱分析，并对二者的关系进行了比较。结果表明，７０株致病性大肠埃希氏菌共分为３２种质粒谱型，质粒含有４．４×１０２～９．６２×１０４ｂｐ，相同来源的菌株属于同一种质粒谱型，不同来源的菌株属于不同的质粒谱型。从母猪和发病仔猪肛拭标本中分离的大肠埃希氏菌具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱，提示二者之间无同源性。本试验结果亦证明质粒指纹图谱法适用于大肠埃希氏菌菌株的分型鉴定，是一种简单、快速、有效的方法。

生物科学专业动物学、植物学野外实习课程的建设与思考

野外实习课程是生物学教学中极其重要的实践环节,可以让学生真实地了解各种生物的形态特征、生活环境和生活习性,扩大和丰富形态学、系统分类学、生态学、生物多样性等知识范围,掌握标本的采集、制作、鉴定和保存的方法。野外实习课程同时也是激发学生学习生物学相关课程兴趣、培养学生独立工作的能力和小组合作能力的实践平台。本文从植物学及动物学野外实习课程的教学目标、实习内容、组织管理、实习资源等方面对我院野外实习课程进行了总结,并提出了几点思考。

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性

目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。

竹炭/氯氧镁水泥轻质复合材料的机械性能与热稳定性

以竹炭、氯氧镁水泥为原材料,采用双氧水作为发泡剂,硬脂酸钙为稳泡剂,向氯氧镁水泥中添加竹炭,采用静置发泡法制备了竹炭/氯氧镁水泥轻质复合材料。通过万能力学试验机、X射线衍射仪、热重分析仪、扫描电子显微镜等对复合材料进行性能检测,探讨竹炭对轻质氯氧镁水泥复合材料性能的影响。结果表明:随着竹炭粒径的减小,竹炭/氯氧镁水泥轻质复合材料的抗压强度与抗折强度逐渐提高,氯氧镁水泥轻质复合材料的抗压强度、抗折强度分别为1.42 MPa、0.61 MPa,而填充50目竹炭的竹炭/氯氧镁水泥轻质复合材料的抗压强度和抗折强度分别达3.99 MPa、1.88 MPa;竹炭在氯氧镁水泥中没有产生新的结晶,仅以物理掺和的方式存在于氯氧镁水泥中并保持了竹炭多孔性的特征;通过热重分析发现加入竹炭后复合材料总失重率下降了4.65%,说明竹炭提高了氯氧镁水泥的热稳定性能;竹炭降低了氯氧镁水泥的吸湿性能,可有效阻碍氯氧镁水泥吸潮结露。

HIV-1结构蛋白gag-gp120与白细胞介素2联合基因免疫

在真核表达载体pVAX1中的CMV启动子下游插入IL-2基因,构建真核表达质粒pVAXIL2。将它与表达I型人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)gag-gp120的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌肉注射BALB/c小鼠,免疫3次后,以ELISA法检测免疫小鼠血清中抗HIV-1抗体水平,结果显示联合免疫组小鼠在免疫2周后已有抗体产生,6周后进入高峰。乳酸脱氢酶释放法检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性,结果显示联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性显著高于pVAXGE单独免疫组(P<0.05)和载体质粒pVAX1对照组(P<0.01)。以上结果表明:HIV-1核酸疫苗质粒pVAXGE与真核表达质粒pVAXIL2联合免疫可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答,且免疫应答水平高于pVAXGE单独免疫组,IL-2发挥了免疫佐剂的作用,增强了核酸疫苗的免疫原性。

HIV-1 Gag蛋白酵母表达产物的纯化及免疫原性检测

目的 纯化HIV 1Gag蛋白 ,并检测其免疫原性。方法 将表达HIV 1Gag蛋白的酵母工程菌GS115 /pPICGAG接种到YPD培养基中多次传代后 ,用PCR检测其目的基因。该酵母工程菌在BMMY培养基中经甲醇诱导表达 ,上清液初步浓缩后上柱进行凝胶过滤层析 ,并将纯化蛋白免疫Balb/c小鼠 ,检测其血清抗体水平。结果 该酵母工程菌经多次传代后外源基因不丢失。Westernblot检测结果表明纯化蛋白具有很好的反应原性 ,其纯度可达 85 %。纯化蛋白免疫小鼠后可诱导特异性抗体产生。结论 表达HIV 1Gag蛋白的酵母工程菌具有很好的遗传稳定性 。

免疫学课程综合育人的教学设计与评价的探索与实践——以超敏反应的教学内容为例

将价值引领的理念融入专业课程的课堂教学之中是培养学生综合能力的重要举措。免疫学作为一门生物学专业的基础课程,除了传授免疫学基本原理等相关专业知识外,还肩负着培养学生的科学精神、创新思维和批判意识、增强社会责任感等综合素养的重任。不同的专业课程可以从不同的角度将课程思政元素融入课程教学之中。本文以超敏反应的教学内容为例,从教学目标、教学策略与方法、教学评价、总结与展望等方面对免疫学课程综合育人的教学设计与评价进行了初步的探索与实践。