血细胞分离机制备的浓缩血小板与洗涤血小板的体外实验对照

目的 对比研究体外采集洗涤对血小板功能与形态的影响。方法 采用血细胞分析仪、经典玻球法、经典比浊法及流式细胞技术检测CS 30 0 0 plus血细胞分离机制备的单个供者浓缩血小板和洗涤血小板 ,采集前后及相互间血小板的有关形态学指标、粘附聚集性、血小板活化依赖性颗粒外膜蛋白 (GMP 14 0 )及血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物的表达。结果 两组制品的血小板PDW、PCT、MPV均比采集前显著降低 ,但组间比较差异无显著性意义 ;两组血小板的粘附聚集率、CD62p+ 及CD41a+ CD62p+ 阳性表达率采集前后及组间比较 ,差异均无显著性意义。两组制品的血小板CD41a+ 阳性表达率显著高于采集前 ,但组间比较差异无显著性意义。结论 血小板在体外的采集过程中可能受到轻微激活损伤 ;采用CS 30 0 0 plus血细胞分离机制备的浓缩血小板和洗涤血小板质量可靠、临床适用性强 ;用流式细胞技术检测血小板CD41a+ 、CD62p+ 。

影响机采血小板收集量的因素分析

近年来，连续流动式血细胞分离机（如美国Ｂｅｘｔｅｒ公司ＣＳ－３０００Ｐｌｕｓ和ＣＯＢＥ公司ＣＯＢＥＳｐｅｃｔｒａ血细胞分离机）因采集的浓缩血小板含量高、白细胞污染率低、输血不良反应和经输血传播的疾病发生率低、临床治疗效果明显等优点，被广泛应用于临床［...

不溶性血小板膜微粒止血功能的实验研究

目的:探讨不溶性血小板膜微粒的止血效果。方法:以手工采浓缩血小板为原料,采用冷冻、融化、裂解、洗涤和干燥技术,制备成血小板膜微粒,并在血小板减少兔体内观察其止凝血作用。结果:血小板减少兔注射血小板膜微粒前出血时间与注射后2、4、6h的出血时间分别比较差异有显著性(均P<0.01);注射前出血时间与注射后24h出血时间比较差异无统计学意义(P>0.05);Russel蝰蛇毒时间检测结果正常对照为(12.64±0.72)s,血小板膜微粒为(14.82±0.79)s,提示血小板膜微粒具有初步促凝作用。结论:血小板膜微粒具有短期止凝血活性。

献血者人群庚型肝炎血清流行病学调查

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）主要经血或肠道外途径传播，反复输血、静注毒品成瘾者等均为高危人群［１，２］。国内学者已证实，献血者中存在庚型肝炎病毒感染［３］。但对该型肝炎的流行状况还缺乏全面认识。为此，笔者对广州地区献血者进行了较大规模的ＨＧＶ血清流行病学调...

光化学法病毒灭活的模型病毒培养与滴定方法的建立

目的建立S indb is和伪狂犬病毒的培养与滴定方法。方法以Vero细胞为病毒传代及滴度滴定指示细胞,Karher氏法计算滴定结果。结果S indb is病毒感染的Vero细胞以圆缩、脱落为主;伪狂犬病毒感染的Vero细胞以变圆、形成折光性强的合胞体为主,病变细胞晚期脱落。S indb is病毒第一次滴定TC ID50>11,第二次滴度TC ID50为9.5;伪狂犬病毒第一次滴定TC ID50>11,第二次滴定TC ID50为7.2。结论Vero细胞对两种模型病毒均较敏感,适合用于此两种病毒的培养与滴定。该方法的建立为光化学法灭活血小板中病毒的研究奠定基础。

血小板特异性抗原(HPA)的PCR-SSP基因分型研究

血小板是最常用的血液成分之一，在临床上具有重要意义。血小板特异性抗原（Ｈｕｍａｎｐｌａｔｌｅｔｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｏａｎｔｉｇｅｎｓ，ＨＰＡ）是人类血小板所独有的抗原系统。目前ＨＰＡ的检测，包括其相应抗体的检测，主要还是血清学方法。但血清学试验有很...

我国5城市合格献血者血液HIV及HCV残余风险研究

目的研究我国献血者血液HIV及HCV残余风险;评估我国开展血液核酸检测(NAT)的可行性和必要性。方法采集乌鲁木齐、昆明、北京、广州、杭州5城市献血者血样,用Chiron Procleix HIV-1/HCV Assay血液核酸检测体系,对各项血清学筛查均合格的89 467份血液作16人份混合血样NAT检测,凡筛查不合格血样再作单人份检测;对于抗-HCV阴性而HCV RNA NAT阳性者,用备用管作抗-HCV、ALT、及HCV RNA NAT复检。结果共检出HCV RNA NAT阳性但抗-HCV EIA阴性标本3例,未检出HIV RNA NAT阳性但抗-HIV EIA阴性标本;在87 034份血清学筛查合格献血者中,检出HCV NAT阳性2例,其中1例复检ALT为254U/L,未检出HIVNAT阳性;在2 613份血清学筛查不合格者中,检出1例HCV NAT阳性但抗-HCV EIA阴性标本,该献血者抗-HIV阳性、ALT 372U/L;未检出HIV NAT阳性但抗-HIV EIA阴性的标本。结论血清学筛查使我国的血液安全性已有相当高的保障;而NAT技术可进一步提高血液的安全性,但在我国是否可应用于常规血液筛查,需考虑成本与效益比。此外,ALT筛查对排除抗-HCV漏检血液仍有一定的作用。

血细胞分离机采集血小板操作规程的探讨

ＣＳ－３０００ｐｌｕｓ血细胞分离机在国内主要用于采集单个供者血小板制剂为临床服务，但是，应如何进行献血者筛选，采集过程中应注意哪些问题和按怎样的操作规程，到目前为止没有一个统一标准。本所应用６台ＣＳ－３０００ｐｌｕｓ进行了７０００多例次的血小板单采，...

不同保存温度对血浆部分凝血因子活性的影响

目的:探讨在不同保存温度,不同保存时间血浆部分凝血因子活性的变化,为临床选择不同血浆输注提供实验室依据。方法:采集10袋(200mL/袋)的ACD-B血液保存液保存的血液,在采血后1h内留样10mL作为对照组样本;每份全血在无菌条件下平均分为2袋,作为2个实验组,热合封口。第1组保存于(4±2)℃,保存48h;第二组先保存于(22±2)℃,保存6h之后,转移到(4±2)℃保存42h。两个实验组分别在采血后6h,24h和48h留取样本。将对照组及实验组样本在取样后立即离心,分离血浆,于-18℃保存30d后,进行凝血因子Ⅴ(FⅤ)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纤维蛋白原和凝血因子Ⅶ的检测。结果:两组血浆在不同温度、不同保存期的凝血因子Ⅴ、纤维蛋白原和凝血因子Ⅶ水平无显著改变;而在保存8h后,实验组血浆凝血因子Ⅷ水平均低于对照组凝血因子Ⅷ水平(P<0.05)。在保存24h后,实验组血浆凝血因子Ⅷ水平进一步下降(P<0.05)。结论:在采血后24h保存期内,血浆中凝血因子,除凝血因子Ⅷ外,凝血因子Ⅴ,纤维蛋白原和凝血因子Ⅶ活性均没有明显改变;凝血因子Ⅷ水平在4℃保存8h后下降14%;在保存24h后,凝血因子Ⅷ水平下降约30%;在保存48h后,凝血因子Ⅷ水平下降约40%。实验结果表明,在新鲜冰冻血浆供应紧张的情况下,除非需要大剂量补充凝血因子Ⅷ(病人凝血因子Ⅷ水?

γ射线辐照对血液质量的影响

目的 探讨用灭活淋巴细胞剂量的γ射线辐照对血液质量造成的影响。方法 用淋巴细胞转化试验找出能灭活淋巴细胞的最小剂量 ,以此剂量辐照 ,对辐照前后的标本作红细胞渗透脆性试验 ;用血细胞计数仪对辐照前后血标本作RBC、Hct、MCV、Plt、MPV检测 ;用生化分析仪检测辐照前后血清中K+ 、Na+ 、Cl-、Ca2 + 浓度的变化 ;用瑞氏染色法观察辐照前后RBC及Plt的形态变化 ;用CD4 1a、CD6 2 p标记辐照前后血小板标本后 ,用流式细胞仪检测其阳性率。结果 辐照前后标本RBC、Hct、MCV、Plt、MPV无变化 ;RBC、Plt形态无改变 ;K+ 、Na+ 、Cl-、Ca2 + 浓度无变化 ;CD4 1a、CD6 2p阳性率无变化。结论 血液成分经 35Gyγ射线辐照后 ,淋巴细胞被灭活 ,而RBC、Plt的数目。

核黄素联合紫外线A照射对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果

目的考察核黄素联合紫外线A对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果。方法以伪狂犬病毒为模拟病毒,以Vero细胞为培养细胞,用病毒感染细胞,制备病毒增殖液;分别采用5、10、15及20J/cm2联合核黄素处理血浆,观察处理前后血浆病毒灭活的效果,筛选灭活病毒合适的紫外线剂量;将含有伪狂犬病毒血浆的样本分为实验组:采用上述筛选的紫外线强度照射联合核黄素处理;对照组1:单独采用紫外线A照射;对照组2:单独采用核黄素处理;阴性对照组:未采用紫外线照射和核黄素处理;分别在实验前后采用96孔细胞病变法,对照细胞病变效应,根据Reed-Muench公式计算病毒滴度。结果采用不同强度的紫外线联合核黄素处理血浆,紫外线强度为15及20J/cm2的灭活血浆病毒的效果明显,处理后病毒滴度分别下降4.55和4.39logs;实验组和对照组1病毒滴度分别下降4.55和4.28logs,有统计学意义(P<0.05);对照组2病毒滴度降低1.93logs,没有病毒灭活效果。结论核黄素联合紫外线可灭活血浆中伪狂犬病毒,单独紫外线照射也具有灭活血浆伪狂犬病毒的效果;而仅单独采用核黄素处理而未联合紫外线照射,对血浆中伪狂犬病毒灭活效果不明显。

常温保存期血小板数量及功能的变化

目的探讨保存期机采血小板数量及功能的变化。方法血细胞分离机采集血小板8人份,22℃振荡保存,分别在保存0、1、3和5d,在100级超净台内取样10ml,进行血小板计数、pH值、乳酸脱氢酶(LDH)、血小板凋亡数及CD62P表达的检测。结果在0、1、3和5d的Plt没有显著性差异;pH值比较,有显著性差异;0d与3d和5d相比,LDH有显著性差异;0d与第1、3、5d相比,血小板凋亡数有显著性差异;0d与1d、5d相比,CD62P表达有显著性差异。结论在血小板保存期,随着保存期的延长,机采血小板的pH值下降;LDH水平逐步增高;血小板凋亡数逐渐增高;CD62P的表达也逐渐增高,激活的血小板数增多。

丹参酮Ⅱ A对神经祖细胞系C17.2的保护作用

目的:了解丹参酮ⅡA对神经祖细胞系C17.2的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:本实验于2005年起在广州血液中心器官移植配型中心实验室进行。C17.2祖细胞系由澳大利亚新南威尔士大学解剖教研室David Walsh博士惠赠。将C17.2细胞以1×109L-1的密度接种,用含10%胎牛血清IMDM,37℃、体积分数为0.05CO2、饱和湿度的CO2培养箱培养,接近融合的C17.2细胞用含0.1mmol/LEDTA的胰酶室温消化,按1∶3的比例传代。C17.2细胞以5×107L-1的密度接种于96孔板或25cm2的培养瓶中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4g/L AAPH(水溶性偶氮引发剂2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐)无血清的IMDM培养基培养建立神经细胞凋亡模型。C17.2细胞以5×103/孔的密度接种于96孔板中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4g/LAAPH无血清的IMDM培养基培养。对照组不加入丹参酮ⅡA,实验组分别加入0.02,0.05,0.1,0.2mg/L丹参酮ⅡA培养8h,噻唑蓝法检测细胞活性:细胞活性的相对值=(实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①AAPH处理8h后,C17.2细胞被过氧化损害,大多数细胞失去正常的形态,细胞呈圆形,脱落。加入丹参酮ⅡA后,细胞形态基本保持正常,少数细胞呈圆形。②C17.2细胞在IMDM的培养液中,细胞数量是含4g/L AAPH无血清的IMDM培养基条件下的2.5～3倍。浓度为0.02,0.05,0.1mg/L的丹参酮ⅡA对C17.2细胞有保护作用,质量浓度大于0.2mg/L丹参酮ⅡA对C17.2细胞保护作用降低。③AAPH作用前大部分C17.2细胞的线粒体完整,有少量的早期凋亡细胞和凋亡细胞,AAPH作用后凋亡细胞总数、凋亡细胞明显增加。丹参酮ⅡA处理组可以明显减少早期凋亡细胞。结论:在体外丹参酮ⅡA对神经细胞具有抗凋亡的作用,可以保护神经细胞。

血小板分离机洗涤单个供者血小板工艺的研究

目的 研究便捷实用有效的全自动盐水洗涤血小板工艺。方法 利用单个供者血小板单采设备CS 30 0 0plus血细胞分离机及一次性分离管道 ,在血小板单采结束后进行管道改造和增加特定的洗涤处理程序 ,通过生理盐水连续梯度稀释效应达到洗涤效果。结果 用 15 0 0ml生理盐水进行血小板洗涤的处理量比较合适 ,洗涤后产品中的pH、血小板回收率、血浆蛋白清除率、血小板粘附聚集功能、血小板活化依赖性颗粒外膜蛋白 (GMP 14 0 )及血小板膜GPⅡb Ⅲa复合物的表达均能达到良好效果。结论 本工艺为目前临床有特殊需要的病人制备洗涤血小板 ,以及为将来进一步研究新的血小板制剂提供了较好的参考作用。