冬凌草甲素通过激活caspase途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的研究冬凌草甲素诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用原理及caspase途径在凋亡过程中的作用。方法噻唑蓝(MTT)法,形态学观察,RT-PCR及流式细胞法。结果冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。形态学观察可见MDA-MB-231的增殖受明显抑制。冬凌草甲素可诱导细胞内抑制凋亡基因Bc1-xl表达量时间依赖性减少,促凋亡基因Bid表达量增加,caspase-3的表达增加。40μmol/L药物处理48 h后,流式法检测细胞凋亡率为75%。结论冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡,这种作用可能是通过改变Bc1-xl/Bid的表达比率、激活caspase-3而实现的。

流式细胞药敏试验在肺癌化疗中的应用

目的探讨流式细胞药敏试验在肺癌化疗中的意义。方法用流式细胞术对肺癌患者纤维支气管镜检查标本进行药物敏感实验,并根据药敏结果指导临床用药。结果各化疗药物敏感率分别为长春瑞滨(31.25%),紫杉醇(22.92%),多西紫杉醇(29.17%),吉西他滨(22.92%),顺铂(20.83%),卡铂(18.75%),依托泊苷(37.50%),长春瑞滨+顺铂(52.08%),依托泊苷+顺铂(50.00%),吉西他滨+顺铂(41.67%)。指导化疗组有效率(72.91%)明显好于经验化疗组(40.91%)。结论流式细胞药敏试验有助于临床筛选有效药物,选择有效的化疗方案。

CD64和CRP联合检测对小儿肺炎早期诊断的价值

目的检测小儿肺炎患者中性粒细胞表面CD64及血清C反应蛋白(CRP)表达水平,探讨其对小儿肺炎早期诊断的价值。方法将90名研究对象分为4组,即细菌性肺炎组、支原体肺炎组、病毒性肺炎组和正常对照组,采用流式细胞术检测外周血CD64平均荧光强度(Median fluorescence intensity,MFI),全自动生化分析仪检测血清CRP含量。结果小儿细菌性肺炎组CD64和CRP明显高于支原体肺炎组、病毒性肺炎组和健康对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05),小儿细菌性肺炎组CD64和CRP在治疗前后有明显差异(P﹤0.05);小儿支原体肺炎组分别与病毒性肺炎组和健康对照组比较CD64值差异无统计学意义(P>0.05),而CRP差异有统计学意义(P﹤0.05);病毒性肺炎组与健康对照组比较,CD64和CRP值均无明显差异(P>0.05)。CD64诊断小儿细菌性肺炎的最佳临界值为CD64>17.23MFI,其敏感度为85.31%,特异度为82.32%;CRP以8mg/L为临界值时,诊断感染的敏感性为87.31%,特异性为72.21%。当二者联合检测时,诊断感染的敏感性为92.15%,特异度为87.23%。结论 CD64和CRP可作为小儿肺炎的早期诊断的敏感性、特异性指标,同时可作为治疗效果的判断指标之一。

大蒜素对人乳腺癌细胞株的抑制作用

目的探讨大蒜素对人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(5、10、20、40、80mg/L)大蒜素对增殖MDA-MB-231的抑制率。通过药物半数抑制浓度(IC50)计算软件计算IC50。相差倒置显微镜下观察细胞形态的改变情况。结果10、20、40mg/L组大蒜素对MDA-MB-231的增殖有明显抑制作用(P<0.01)。24、48、72hIC50值分别为16.50、8.28、7.82mg/L。相差倒置显微镜下观察可见MDA-MB-231细胞分裂相减少,部分细胞漂浮,残存细胞形态不规则,状态差,反光差,出现细胞碎片。16.50、8.28、7.82mg/L的大蒜素作用24、48、72h后,琼脂糖凝胶电泳可见DNA凋亡梯形条带。结论大蒜素可使MDA-MB-231的增殖受到抑制,促进肿瘤细胞凋亡,具有抗肿瘤作用。

黄柏对湿疹小鼠颗粒蛋白前体的影响

目的分析黄柏对湿疹小鼠颗粒蛋白前体(PGRN)的影响。方法将30只昆明种雄性小鼠按照随机数字表法分为空白对照组、湿疹模型组、黄柏治疗组,每组各10只。湿疹模型组与黄柏治疗组采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)溶液建立小鼠湿疹模型。评估小鼠皮肤损伤状况,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠皮肤损伤处PGRN基因相对表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测外周血PGRN蛋白表达水平和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果与空白对照组相比,湿疹模型组有明显红肿、角化结痂、渗出等皮肤损伤,小鼠皮肤损伤程度评分、皮肤PGRN基因相对表达水平、外周血PGRN蛋白表达水平及TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与湿疹模型组比较,黄柏治疗组红肿、角化结痂、渗出等皮肤损伤减轻,小鼠皮肤损伤程度评分、皮肤PGRN基因相对表达水平、外周血PGRN蛋白表达水平及TNF-α水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论湿疹小鼠PGRN基因和蛋白表达水平异常,且黄柏可通过抑制PGRN,抑制炎症反应,有效治疗湿疹。

外周血白细胞CD64和CD11b指数在老年慢性阻塞性肺疾病急性期的早期诊断价值

目的探讨外周血白细胞CD11b指数、CD64指数在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者的早期诊断价值。方法收集2011-03/2013-12期间九江学院附属医院入院就诊的稳定期COPD患者82例(稳定组),急性期COPD患者86例(加重组)及84例健康志愿者(对照组)。各组分别检测血常规、超敏C反应蛋白(hs-CRP),流式细胞术检测外周血白细胞CD64及CD11b的平均荧光强度(MFI),并换算成CD64指数和CD11b指数。筛选出诊断COPD急性加重期有差异的指标,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,进行曲线下面积、临界值、灵敏度及特异性比较。结果与稳定期相比,老年COPD急性加重期CD11b指数降低和CD64指数升高,差异具有统计学意义(P<0.01),但老年COPD稳定组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。以CD11b指数<0.94、CD64指数>1.83为临界值阳性标准,其诊断COPD急性加重期的敏感度分别为62.65%和77.11%,特异性分别为79.52%和98.80%。结论外周血白细胞CD11b指数降低和CD64指数升高可作为早期诊断老年COPD急性加重的实验室依据,动态观察其水平变化,对评价治疗效果有一定价值。

26例成人Still’s患者腺苷脱氨酶分析

目的检测成人Still’s病患者血清腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)活性,分析其与乳酸脱氢酶(lac-tate dehydrogenase,LDH)活性及全血白细胞计数(white blood cell count,WBC)的相关性。方法收集26例成人Still’s患者(疾病组)、40例系统性红斑狼疮(SLE)患者(疾病对照组)及48例健康体检人群(正常对照组)血清,采用全自动生化分析仪检测3组血清ADA和LDH活性;全血白细胞计数采用五分类全自动血细胞分析仪进行。结果疾病组血清腺苷脱氨酶活性明显高于疾病对照组和正常对照组(P=0.000)。疾病组中血清ADA与LDH活性呈现明显的正相关(r=0.786,P=0.000),但与白细胞没有显著相关性(r=0.244,P=0.229)。结论血清ADA在成人Still’s患者中活性增高,提示ADA可能该病的一种潜在的诊断标志物,且与WBC无相关性,提示血清腺苷脱氨酶可能是一种独立于WBC之外诊断成人Still’s病的标志物之一。

2型糖尿病患者HbAlc、HCY、CysC与肾脏微血管病变的关系探讨

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者糖化血红蛋白(HbAlc)、同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(CysC)与肾脏微血管病变的关系。方法196例T2DM患者分为合并微血管病变组(95例)和无微血管病变组(101例),治疗后按糖化血红蛋白(HbAlc)控制水平又分为HbAlc<7.0%组、HbAlc>7.0%组,以健康体检者为对照组(46例);分别测定空腹血糖(FPG)、HbAlc、Hcy、CysC、脂蛋白a(Lpa)和尿微量蛋白(MAU)。结果T2DM患者HbAlc、Hcy、CysC、Lpa和MAU均不同程度的高于正常对照组(P<0.05),T2DM合并微血管病变患者HbAlc、Hcy、CysC、Lpa和MAU明显高于无微血管病变患者(P<0.05);T2DM合并微血管病变患者治疗后HbAlc>7.0%组Hcy、CysC、Lpa和MAU水平明显高于HbAlc<7.0%组(P<0.05);T2DM无微血管病变患者治疗后HbAlc>7.0%组血清Hcy、Lpa水平明显高于HbAlc<7.0%组(P<0.05);治疗后HbAlc<7.0%的T2DM合并微血管病变患者Hcy、CysC、Lpa、MAU水平高于无微血管病患者(P<0.05)。结论高HbAlc、Hcy和Lpa是T2DM微血管病变的重要原因,MAU、CysC是肾微血管受损的早期检测指标,通过联合检测HbAlc、Hcy、CysC、Lpa和MAU可以动态观察DM患者肾脏微血管病变程度;强化血糖控制、改善Hcy、Lpa代谢对于延缓T2DM微血管病变具有重要的临床意义。

多供者同种异体输血对手术患者细胞免疫功能的影响

目的研究多供者同种异体输血(multiple allogeneic blood transfusion,MABT)对手术患者细胞免疫功能的影响。方法回顾性对比分析手术前后单供者同种异体输血(single allogeneic blood transfusion,SABT)患者(SABT组)与MABT患者(MABTⅠ组、MABTⅡ组)及对照组(未输血组)血液T淋巴细胞亚群及NK细胞的变化。结果术后2 d:各组患者CD3+、CD4+、NK细胞数均下降(P<0.05)而CD8+上升(P<0.05),但MABTⅠ组、MABTⅡ组变化更明显(P<0.01)且与SABT组、未输血组比较有统计学差异(P<0.01);术后7 d:MABTⅠ组、MABTⅡ组CD3+、CD4+、NK细胞数低于术前(P<0.05)而CD8+上升(P<0.05);术后2 d、7 d:MABTⅠ组、MABTⅡ组CD4+/CD8+均低于术前(P<0.05),MABTⅡ组CD3+、CD4+又低于MABTⅠ组(P<0.05),CD8+高于MABTⅠ组(P<0.05)。结论 MABT可通过加强细胞免疫抑制而增强输血相关免疫调节作用。

腹水AFP,CEA,CA19-9的联合检测

目的探讨肿瘤标志物AFP、CEA、CA19-9在腹水检测中的联合应用。方法84例腹水患者分成良性腹水组48例和恶性腹水组36例,分别测定腹水中的AFP、CEA、CA19-9的含量。结果恶性腹水组CEA、AFP、CA19-9检测的各单项结果明显大于良性腹水组(P﹤0.001);联合检测与各个单项检测比较灵敏度明显提高(P<0.05)。结论肿瘤标志物的检测是早期发现肿瘤的重要手段。临床检测CEA、AFP、CA19-9对腹水进行良、恶性判别有重要意义,联合检测将明显提高灵敏度。

中心肥胖型高血压患者血清游离脂肪酸与载脂蛋白的变化

目的研究中心性肥胖伴高血压患者血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)浓度及载脂蛋白B/载脂蛋白A(Apo B/Apo A)比值变化及其与肥胖和高血压的关系。方法收集174例正常对照者(G1组)、190例中心肥胖型无高血压患者(G2组)和188例中心肥胖型高血压患者(G3组),分别测定血清FFA及Apo B/Apo A水平、血压及腰围等人体一般指标。结果 G3组FFA及Apo B/Apo A明显高于G1、G2组(P<0.05)。FFA与腰围、腰臀比、体重指数、血压、Apo B/Apo A水平成显著正相关。结论中心肥胖型高血压患者血清FFA浓度明显升高,并与其血压、腰围、腰臀比、体重指数、Apo B/Apo A明显呈显著正相关;且Apo B/Apo A明显升高。

儿童脂肪肝患者血清IL-18表达水平与肝损伤的关系

目的探讨儿童脂肪肝患者血清白介素18(IL-18)表达水平与肝损伤的关系与作用机制。方法选取门诊和住院儿童患者,经B超和CT诊断后,分为肥胖伴脂肪肝组(轻、中、重)78例、单纯肥胖组76例、对照组70例。联合检测身体质量指数(BMI)、血脂、IL-18、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST),分析血清IL-18与各临床指标的相关性,脂肪肝组与对照组及不同组间上述指标的变化。结果肥胖伴脂肪肝组相对于对照组和单纯肥胖组,BMI、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)及低密度脂蛋白(LDL-C)明显升高(P<0.05);肥胖伴脂肪肝组的IL-18、ALT、AST明显高于单纯肥胖组和对照组(P<0.05);随着患儿脂肪肝病情的加重血清IL-18、ALT及AST水平显著升高(P<0.05)。结论检测IL-18浓度对反映肝细胞损害程度和判断脂肪肝患儿病情有一定的临床意义。

2型糖尿病患者Hcy、HbAlc、MAU与肾脏微血管病变的关系探讨

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者同型半胱氨酸(Hcy)、糖化血红蛋白(HbAlc)、尿微量白蛋白(MAU)与肾脏微血管病变的关系。方法 216例T2DM患者分为合并微血管病变组95例,无微血管病变组121例,治疗后按糖化血红蛋白(HbAlc)控制水平又分别分为HbAlc<7.0%组、HbAlc>7.0%组,以46例健康体检者为对照组;分别测定空腹血糖(FPG)、HbAlc、Hcy、脂蛋白a(Lpa)、MAU和尿β2微球蛋白(β2-MG)。结果 T2DM合并微血管病变患者HbAlc、Hcy、MAU和尿β2-MG明显高于无微血管病变患者(P<0.05);T2DM合并微血管病变患者治疗后HbAlc>7.0%组Lpa、Hcy、MAU、尿β2-MG水平明显高于HbAlc<7.0%组(P<0.05)。结论联合检测HbAlc、Hcy、Lpa、MAU和尿β2-MG可以动态观察DM患者肾脏微血管病变程度;强化血糖控制,改善Hcy、Lpa代谢对延缓T2DM微血管病变具有重要的临床意义。

脂多糖和细胞因子水平与慢性HBV/HCV重叠感染患者肝损伤的相关性

目的:探讨慢性HBV/HCV重叠感染患者血浆脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)及一氧化氮(NO)水平与肝损伤指标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)的相关性。方法:选择慢性HBV/HCV重叠感染患者(HBV/HCV组)42例,其中重型肝炎(SH组)25例,慢性肝炎(CH组)17例;慢性HBV单独感染患者(HBV组)60例;慢性HCV单独感染患者(HCV组)60例和正常对照者(NC组)60例。应用鲎三肽基质显色法、酶联免疫吸附试验(ELISA)及硝酸还原酶法分别检测血浆中LPS、TNF-α、IL-10及NO水平,全自动生化分析仪测定血清ALT活性、TBIL浓度。结果:HBV/HCV组血浆LPS、TNF-α及NO水平明显高于HBV、HCV组及NC组(均P<0.01),SH组LPS、TNF-α及NO水平明显高于CH组(均P<0.01),HBV/HCV组血浆IL-10水平则明显低于HBV、HCV组及NC组(均P<0.01),SH组IL-10水平明显低于CH组(P<0.01)。HBV组与HCV组间血浆LPS、TNF-α、IL-10及NO水平差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,HBV/HCV组血浆LPS、TNF-α及NO水平与ALT、TBIL呈显著正相关,而血浆IL-10水平与ALT、TBIL呈显著负相关。结论:HBV/HCV重叠感染患者血浆LPS、TNF-α、IL-10及NO水平的变化与肝损伤程度密切相关。

人血浆β淀粉样蛋白42 ELISA的建立及其临床初步应用

目的建立人血浆中β淀粉样蛋白42（Aβ42）酶联免疫吸附试验（ELISA），并初步观察其对诊断阿尔茨海默病（AD）的应用价值。方法用鼠抗Aβ42片段（1～28氨基酸残基）单克隆抗体包被微孔板，用生物素标记的兔抗Aβ42片段（40～42氨基酸残基）为标记抗体，应用生物素-亲和素系统（ABS）进行放大，采用棋盘滴定方法确定最佳实验条件，用Aβ42标准品建立ELISA标准曲线，分别检测不同痴呆程度AD患者及健康人血浆中Aβ水平。结果本研究建立的方法测定范围为20—500pg／mL，最低检出量20pg／mL，批内和批间变异系数（c叻分别为3．8％和7．9％。轻度AD患者血浆中AB42水平为（146．4±9．7）pg／mL，明显高于健康对照组[（95．I±7．2）pg／mL]，中晚期AD患者血浆Aβ42浓度明显下降[（99．4±17．6）pg／mL]，其水平降至与健康对照组差异无统计学意义。结论建立的人血浆Aβ42ELISA可作为AD早期诊断的有效方法，可在临床推广应用。

中国九江汉族人群TLR2基因单核苷酸多态性与Graves病易感关系

目的:研究九江汉族人群TLR2基因多态性与Graves病的易感关系。方法:本研究采用特异性引物PCR方法,基于病例-对照研究的实验设计,对333例甲亢病例和368例正常对照的TLR2基因上的rs3804100和rs5743705位点进行了基因分型。结果:患者男女比例约为1∶2.6,女性有更高的患病风险;所有位点均符合哈迪-温伯格平衡。没有在总体病例、对照之间观察到多态位点基因型和等位基因频率的显著差异。然而,在对发病年龄和性别进行分层分析后发现,在GD早发病人中(≤40岁),SNP位点rs3804100的A/A基因型(P=0.013,OR=1.53,95%CI=1.11-2.12)以及A等位基因频率(P=0.020;OR=1.37;95%CI=1.05-1.79)显著高于正常对照组。结论:TLR2基因rs3804100位点的A/A基因型可能会显著增加人群40岁以前患GD的风险。

白介素-18和环氧化酶-2测定在2型糖尿病肾病中的作用

目的探讨血清白介素-18(IL-18)和环氧化酶-2(COX-2)测定在2型糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用。方法选择2型糖尿病(T2DM)患者126例,根据尿微量白蛋白排泄率(UAER)分为单纯DM(SDM)组、早期DN(EDN)组和临床DN(CDN)组,以健康志愿者40例作为正常对照(NC)组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清IL-18和COX-2水平,并比较他们与UAER、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、空腹胰岛素(FINS)、血肌酐(Cr)等指标的关系。结果SDM组血清IL-18和COX-2水平明显高于NC组(P<0.01),CDN组血清IL-18和COX-2水平明显高于EDN组和SDM组,各组间比较差异均有显著性(P<0.01),且IL-18和COX-2水平与UAER、FPG、2hPG、HbAlc、FINS、Cr水平呈正相关,血清IL-18与COX-2水平也呈正相关。结论2型糖尿病肾病存在低度炎症反应,血清IL-18和COX-2水平变化在DN发生发展中起着十分重要的作用。

冬凌草甲素对肿瘤转移相关酶的影响

目的探讨冬凌草甲素对肿瘤转移相关酶(乙酰肝素酶,MMP-2,MMP-9)的影响。方法利用半定量RT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231细胞乙酰肝素酶基因的表达变化,用明胶酶谱检测冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞MMP-2、MMP-9活性的影响。结果冬凌草甲素可下调乙酰肝素酶在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,并抑制基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性。结论冬凌草甲素可通过下调乙酰肝素酶基因表达、抑制MMP-2和MMP-9活性,从而抑制肿瘤的侵袭转移。

1,25(OH)2D3/VDR对湿疹患儿miRNA155/SOCS1通路的调节作用

目的检测湿疹患儿1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3)、维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、微小核糖核酸155(micro RNA155,miRNA155)、细胞因子信号抑制因子一1(Suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1)及淋巴细胞亚群的量,并探讨其相互关系。方法采用电化学发光法检测受试者外周血1,25(OH)2D3的表达,流式细胞术检测患者T细胞百分比及CD3、CD4、CD8阳性细胞含量,采用RT-PCR方法检测皮损处VDR、miRNA155、SOCS1。结果湿疹患儿1,25(OH)2D3及VDR(29.25±11.03 nmol/L,1.74±0.92)明显低于健康儿童(55.49±21.66 nmol/L,3.62±1.68);湿疹患儿T细胞亚群68.65±16.74%及CD4+的T淋巴细胞亚群38.83±10.82%明显高于对照组(64.47±17.23,33.25±11.95%),CD8+的T淋巴细胞亚群25.68±6.81%明显低于对照组29.01±7.93%;湿疹患者皮损处VDR、SOCS的表达(1.74±0.92,1.78±1.02)明显低于对照组(3.62±1.68,3.13±1.70),miRNA1551的表达5.41±3.23明显高于对照组2.06±0.84。结论湿疹患儿1,25(OH)2D3、VDR表达异常,且其可调节湿疹患儿miR155/SOCS1通路。

湿疹患儿1,25(OH)2D 3/VDR与IL-17/IL-17R的相关性分析

目的:检测湿疹患儿1,25-二羟维生素D 3[1,25(OH)2D 3]和维生素D受体(VDR),白介素-17(IL-17)和白介素-17受体(IL-17R),并探讨其相互关系。方法:采用电化学发光法检测受试者外周血1,25(OH)2D 3浓度,采用RT-PCR方法检测皮损处VDR表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血IL-17和IL-17R浓度。结果:湿疹患儿1,25(OH)2D 3及VDR明显低于健康儿童;湿疹患者IL-17/IL-17R的表达明显上升。结论:湿疹患儿1,25(OH)2D 3和VDR表达异常,且与IL-17/IL-17R水平相关。