合并血浆中病毒标记检测临界值的确定分析

确保合并血浆检测结果的判定准确可靠,能够有效保证合并血浆的病毒安全性,对合并血浆乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体检测时不同厂家检测试剂的临界值进行确定。(1)使用双抗体夹心酶联免疫法对合并血浆HBsAg和HIV-1/HIV-2抗体的检测临界值进行确定。(2)使用酶联免疫法检测合并血浆HCV抗体的临界值进行确定。经检测和计算,两个厂家检测试剂的检测临界值系数分别为乙型肝炎病毒表面抗原23.398%和26.845%、丙型肝炎病毒抗体9.012%和16.481%、人类免疫缺陷病毒抗体20.025%和23.424%。

蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)质量稳定性考察

目的 考察蓉生静注人免疫球蛋白（pH4）存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响.方法 将静注人免疫球蛋白（pH4）分别放置于2～8℃和20～25℃的条件下,定期取样.依照〈中国生物制品规程〉（2000年版）的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响.结果 静注人免疫球蛋白（pH4）在2～8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20～25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著.静注人免疫球蛋白（pH4）灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶.结论 蓉生静注人免疫球蛋白（pH4）保存在2～8℃在有效期内质量稳定.

人免疫球蛋白类制品甲肝抗体效价检测方法的探讨

目的了解我国人免疫球蛋白制品中甲肝抗体水平,以及国外免疫球蛋白类制品甲肝抗体效价情况,为《中国药典》三部2010年版增订免疫球蛋白类制品成品甲肝抗体效价测定提供依据。方法采用不同实验组显著性差异分析方法,采用不同的标准品,对酶联法(ELISA)和放免法(R IA)检测甲肝抗体进行比较。对人免疫球蛋白类制品中的甲肝抗体效价进行分析评价。结果在相同标准品前提下,酶标法(ELISA)的检测结果与放免法(R IA)的检测结果有显著差异,ELISA法测得结果明显高于R IA法。甲肝抗体的稳定性较好,生产过程对其效价影响较小。结论放免法(R IA)和酶标法(ELISA)检测甲肝抗体效价都具有可行性,但检测血浆应采用血浆标准品、检测制品应采用人免疫球蛋白标准品。甲肝抗体与蛋白质含量呈正相关。

Wet Loop Calibration实现血浆蛋白分离自控系统的温度追溯

目的探讨低温乙醇法分离血浆蛋白的自控系统的温度追溯性的一种实现方式。方法采用Wet Loop Calibration的方式,使用线性回归法确定自控系统温度测量环路的测量不确定度。结果自控系统温度测量环路的扩展不确定度=0.16℃。结论根据最小不确定度要求,该温度测量环路完全能满足低温乙醇法分离血浆蛋白的±0.5℃温度控制要求。

合并血浆甲肝抗体效价检测结果分析

目的了解我国原料血浆中甲肝抗体水平,为《中国药典》三部2010年版增订免疫球蛋白类制品甲肝抗体效价测定提供依据。方法 1)采用不同实验组显著性差异分析方法,采用不同的标准品,对酶联法(ELISA)和放免法(RIA)测得甲肝抗体效价进行比较。2)对合并血浆中的甲肝抗体效价进行分析评价。结果在相同标准品前提下,ELISA的检测结果与RIA的检测结果均有显著差异,ELISA法测得结果明显高于RIA法。

不同直径层析柱纯化人凝血因子Ⅷ效果的比较

目的通过比较RJ300型和GE450型层析柱对人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)的纯化效果,探究GE450型层析柱纯化FⅧ的适用性。方法分别采用2种层析柱各制备3批FⅧ制品,按照中国药典2020年版三部的要求对制品进行检测,比较2种层析柱制备的FⅧ原液的回收率、比活性、洗脱峰的峰形差异、杂蛋白去除效果以及成品的检定结果,并进行产品稳定性考察。结果RJ300型和GE450型层析柱纯化后的FⅧ原液回收率分别为(63.8±4.8)%和(61.0±4.3)%,相对标准偏差分别为7.5%和7.0%,原液比活性分别为(100.7±5.8)和(114.0±12.2)国际单位(international unit,IU)/mg,2种层析柱洗脱峰的峰形差异无统计学意义(F=0.42,P>0.05),2种层析柱均能有效去除杂蛋白,成品检定结果均合格,成品比活性分别为(38.6±5.5)IU/mg和(39.4±6.2)IU/mg。2种层析柱制备的FⅧ的稳定性研究结果均符合中国药典规定。结论GE450型层析柱能实现较好的FⅧ纯化效果,成品安全有效、稳定性良好,适合商业规模化生产。

静注人免疫球蛋白(pH 4)工艺优化后产品的稳定性

目的评价静注人免疫球蛋白(pH 4)[human immunoglobulin(pH 4)for intravenous injection,IGIV,简称静丙]工艺优化后产品的稳定性。方法在多批次规模化生产中,采用A滤板和B滤膜分别对不同分离阶段蛋白组分进行过滤,以降低产品中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)残留量。对成品进行物理(外观、可见异物、不溶性微粒检查及热稳定性试验)、化学检定[蛋白质含量、纯度、分子大小分布、抗-HBs、白喉抗体、激肽释放酶原激活剂(prokallikrein activator,PKA)、抗补体活性(anti-complement activity,ACA)及抗-A和抗-B血凝素抗体效价、IgA残留量]及加速和长期稳定性试验。结果采用优化工艺生产的静丙关键质量指标与正常工艺生产批次相比,均无明显差异,IgA残留量明显下降(t分别为3.992和11.215,P均<0.05)。加速稳定性和长期稳定性试验工艺优化后的静丙各项检测结果均合格,符合《中国药典》三部(2020版)中相关规定。结论工艺优化后的静丙在有效降低IgA残留量的基础上,稳定性良好,对于血液制品生产企业提升静丙产品质量具有重要意义。

层析法分离纯化冷沉淀中人纤维蛋白原

目的采用离子交换层析技术从人血浆冷沉淀中分离纯化人纤维蛋白原(human fibrinogen,Fg)。方法采用离子交换层析技术从人血浆冷沉淀中连续制备3批次Fg制品,并根据《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)的要求检测相关质量指标,首先对Fg制品进行了S/D病毒灭活前后蛋白含量、Fg含量和纯度指标差异性的测定,然后计算层析、超滤、除菌过滤和干热病毒灭活后各级的回收率,再进行干热病毒灭活前后蛋白含量、Fg含量、纯度和凝固活力指标差异性的检测,最后对成品进行物理检查和化学检定分析,并与国内同类产品进行比较。结果3批次实验结果显示,S/D处理对Fg无显著性影响(P>0.05);Fg各级回收率均值分别为69.0%、59.1%、54.4%和49.0%;干热病毒灭活处理对Fg无显著性影响(P>0.05);Fg物理检查(成品外观、复溶时间、可见异物和渗透压摩尔浓度)结果均合格;化学检定结果均在《中国药典》规定范围内,其中,水分含量为(1.6±0.1)%,TNBP和Tween-80残留量分别为(0.1±0.0)μg/mL和(8.0±2.6)μg/mL,成品的纯度为(83.4±1.3)%,盐酸精氨酸、枸橼酸离子和氯离子含量分别为(35.7±1.5)g/L、(28.0±1.0)mmol/L和(294.7±2.3)mmol/L,HBsAg检测结果均为阴性。Fg成品的关键质量指标与国内同类产品比较均能满足《中国药典》的要求。结论离子交换层析技术能从人血浆冷沉淀中分离纯化出安全、稳定和可靠的Fg制品。

一种新型助滤剂在血液制品生产中的应用研究

目的:探讨新型硅藻土用于血液制品组份分离过滤的适用性。方法:对比新型硅藻土与传统硅藻土的电镜扫描物理结构、金属离子含量、比表面积、离心湿密度等物理表征数据,并考察其在血浆蛋白分离阶段各组份过滤效果及最终产品的质量。结果:新型硅藻土与传统硅藻土比较,具有颗粒孔隙致密、金属离子含量低、比表面积大和离心湿密度小的特点;在血浆蛋白分离阶段的过滤过程中,按照传统硅藻土用量的70%左右使用新型硅藻土时,过滤时可得到理想的滤液浊度、较快的过滤速率、更小的过滤压力和均匀的滤饼分布;所得最终产品的质量符合《中国药典》及公司内控标准。结论:新型硅藻土可替代传统硅藻土用于血液制品的规模化生产,同时降低使用量。该应用研究对于降低血液制品的生产成本和提高产品质量具有一定的实际应用价值和参考意义。

四川省献浆员血浆蛋白浓度及白球比分布调查

目的调查四川省献浆员血浆蛋白浓度及白球比分布,探讨延长献浆年龄的可行性。方法将2 467份四川省献浆员的血浆样本分别按地域（东北部、中部、南部）、年龄（18~35周岁、36~45周岁、46~55周岁）、性别（男性、女性）、献浆次数（1~26次、27~52次、53~78次、79~110次）、年献浆频次（1~5次、6~10次、11~15次、16~23次）分组,采用《中国药典》三部（2010版）中规定的定量双缩脲法检测不同组别献浆员的血浆蛋白浓度,琼脂糖凝胶电泳分析不同组别献浆员白蛋白与球蛋白比例（白球比）。结果四川省单采血浆公司不同年龄、不同献浆次数、不同年献浆频次献浆员血浆蛋白浓度差异无统计学意义（P均〉0.05）;不同献浆次数、不同年献浆频次献浆员血浆白球比差异无统计学意义（P均〉0.05）;不同年龄的献浆员白球比差异有统计学意义（P〈0.01）,但所有献浆员血浆蛋白质含量均在50 g/L以上,白蛋白含量均占血浆蛋白质含量的50%以上,蛋白质分布中的白球比均在正常的范围内,献浆员每年血浆电泳及每次献血浆的血浆蛋白质含量检测结果均符合国家法规要求。结论结合新版《献血者健康检查要求》及本研究结果,建议国家将献血浆年龄由55周岁延长至60周岁。

一种抗新型冠状病毒灭活血浆的制备及质量标准的建立

目的建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)灭活血浆的工艺及其质量标准。方法采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆,开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查,进行亚甲蓝光照灭活,并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等,判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化,血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml,抗体滴度未出现明显下降,各项检测结果均符合质量要求。结论确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。

碱处理对人血白蛋白分子的影响

目的 初探不同碱处理条件对人血白蛋白（human serum albumin,HSA）分子的影响.方法 在保持pH 10.0±0.2的条件下,以不同钠离子浓度和辛酸钠浓度处理白蛋白,通过圆二色谱和高效液相色谱对碱处理的HSA进行检测,分析不同处理条件对HSA分子的影响.结果 在保持pH 10.0 ±0.2且辛酸钠浓度为0.16 mmol/g的条件下,以不同钠离子浓度（40～ 800 mmol/L）处理获得的单体和双体HSA含量均＞96％,而且碱处理HSA的圆二色谱峰值（6.7 ～8.2 cm）与合格HSA（7.5 ～8.9 cm）相近,峰值位置没有偏移.在保持pH 10.0±0.2且钠离子浓度为40 mmol/L的条件下,以不同辛酸钠浓度（0.16～ 1.00 mmol/g）处理获得的的单体和双体HSA含量均＞97％,碱处理HSA的圆二色谱峰值（6.1 ～8.2 cm）与合格HSA（7.5 ～ 8.9 cm）相近,峰值位置没有偏移.结论 在一定条件下对HSA进行碱处理不会对其结构产生明显影响.

两种纳米膜过滤对静注人免疫球蛋白生产效率及质量的影响

目的分析使用两种（A、B）纳米膜除病毒过滤对静注人免疫球蛋白生产的影响。方法选取使用A和B纳米膜过滤的静注人免疫球蛋白各10批次，比较过滤流速、产品收率及产品主要质量指标（蛋白含量、pH值、纯度、抗补体活性、分子大小分布）。结果B纳米膜单位膜面积过滤流速高于A纳米膜（t=16．98，P=0．000）。在一个全批次量的静注人免疫球蛋白纳米膜过滤中，使用B纳米膜的产品收率高于使用A纳米膜（t=8．87，P=0．000）。使用两种纳米膜过滤后，产品的蛋白含量（t=1．49，P=0．171）、pH值（t=0．19，P=0．853）、纯度（t=0．00，P=1．000）、抗补体活性（t=0．08，P=0．934）和分子大小分布（t=0．21，P=0．840）的差异均无统计学意义。结论在静注人免疫球蛋白进行除病毒过滤生产过程中，使用B纳米膜的过滤效率高于使用A纳米膜。两种纳米膜过滤后的产品质量无显著差异。