天然药物保护神经元治疗阿尔茨海默病研究新进展

阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)是一种与认知障碍和胆碱能神经元死亡相关的神经变性疾病。Aβ构成的淀粉样蛋白斑沉积、神经原纤维缠结和神经元丢失是其主要的病理学特征。在AD的发病机制中,Aβ神经元毒性、神经胶质细胞炎症反应、氧化应激、突触功能异常、神经递质失调与神经元损害等一系列交叉级联反应,最终导致脑萎缩、神经系统结构和功能破坏。既往大量文献证实,神经元缺失是AD的发病过程中心,近年来研究发现部分天然药物可以调节大脑微环境保护神经元细胞并促进神经干细胞增殖、分化和迁移,对AD具有明确的治疗作用。本文将天然药物保护神经元作用及治疗AD的最新进展综述如下。

一氧化氮与阿兹海默氏症的治疗

阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease, AD)是一种原发性神经退行性病变,常伴有认知障碍和神经功能障碍。一氧化氮(nitric oxide, NO)是一种重要的传递神经信息的信号分子,对Aβ的生成有重要影响,同时,通过降低神经炎症和氧化氮化及NF-κB通路抑制诱导性一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthetase, iNOS),从而治疗AD。本文就NO影响AD的发病和治疗的相关性最新研究进行综述。

基于Oncomine和TCGA数据库分析肌球蛋白10在头颈部鳞癌中的表达、意义及分子机制

目的:通过生物信息学方法分析肌球蛋白10(MYO10)基因在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达、意义及分子机制。方法:下载TCGA数据库中HNSCC样本的基因表达数据集,寻找差异基因并用基因集富集分析(GSEA)软件分析MYO10可能作用的信号通路。收集Oncomine数据库中MYO10表达在HNSCC中的研究,进行荟萃分析,并利用该数据库及Kaplan-Meier在线分析对MYO10在HNSCC中表达及预后进行验证。使用CPTAC、HPA在线数据库分析MYO10蛋白表达水平,使用ESTIMATE数据库、EPIC数据库探究MYO10表达和肿瘤免疫浸润的关系。使用Maftools R包、ComplexHeatmap R包探究了MYO10表达与肿瘤基因组异质性和突变景观的关系。结果:对TCGA数据库中519例HNSCC癌组织样本及44例癌旁样本进行分析,MYO10在HNSCC中显著高表达(P<0.0001)。对Oncomine数据库中的9项有关MYO10表达的HNSCC研究进行分析,MYO10在HNSCC中表达有差异(P<0.05)。生存分析发现,高表达MYO10的患者总生存期较低表达组显著降低(P<0.05)。免疫浸润相关分析显示,MYO10与多种免疫细胞浸润显著相关。GSEA分析显示,高表达的MYO10可能通过激活黏着斑激酶(FAK)、调节细胞骨架蛋白及Wnt信号通路、抑制氧化磷酸化、核糖体等信号通路发挥作用。结论:MYO10在HNSCC中高表达,其高表达可通过抑制免疫浸润、激活或抑制某些信号通路影响HNSCC患者预后,该基因有望成为治疗HNSCC的一个新靶点。

宫颈癌同步放化疗期间一级预防使用PEG-rhG-CSF改善患者粒细胞减少症和生活质量的队列研究

目的:探讨在宫颈癌同步放化疗期间一级预防使用聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEG-rhG-CSF)是否能改善患者的骨髓造血功能和生活质量。方法:回顾性分析2018年5月至2019年1月经本院病理证实为宫颈癌,有同步放化疗指征患者共58例。按病例处理方式的不同分为两个队列:①PEG-rhG-CSF组(PEG组):在患者同步放化疗期间给予一级预防使用长效粒细胞集落刺激因子——PEG-rhG-CSF进行处理;②rhG-CSF组(G-CSF组):在患者同步放化疗期间出现中性粒细胞下降才给予重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)进行处理。两组队列各29例患者。采用t检验或χ2检验比较患者同步放化疗期间骨髓抑制,同步化疗次数及生活质量的差别。结果:PEG组出现Ⅲ~Ⅳ度粒细胞减少的比率明显低于rhG-CSF组(31.8%vs 62.06%,P=0.007)。PEG组和G-CSF组中出现Ⅲ~Ⅳ度血小板下降的比率无明显统计学差异(20.68%vs 31.03%,P=0.551)。PEG组同步化疗>4周期的患者明显多于G-CSF组(P=0.008)。生活质量QLQ-C30(V3.0)评估显示PEG组疲劳乏力症状明显低于G-CSF组(P=0.018),其他症状无明显差异(P>0.05)。PEG组功能领域评估和总体健康状况明显高于G-CSF组(P<0.05)。结论:在宫颈癌同步放化疗期间一级预防使用PEG-rhG-CSF,可明显降低同步放化疗期间重度骨髓抑制的风险,提高患者的生活质量,具有良好的临床应用前景。

阿帕替尼联合同步放化疗治疗化疗耐药局部晚期宫颈癌的临床观察

目的:观察在标准放化疗同步治疗的基础上,加用抗血管生成的小分子药物阿帕替尼能否逆转或增加对化疗耐药的宫颈癌细胞的放疗敏感性、提高临床疗效,同时观察其使用的安全性。方法:选取的研究对象为2016年1月至2018年9月就诊的Ⅱb~Ⅳa期宫颈癌患者,经2周期新辅助化疗且疗效评估为疾病稳定(SD)或疾病进展(PD),共40例,其中观察组(20例),先口服阿帕替尼7 d,继而行根治性同步放化疗联合服用阿帕替尼。对照组(20例)患者仅接受同步放化疗。按照实体瘤RECIST1.1标准评估治疗短期疗效,比较两组患者的总生存(OS)率、无进展生存(PFS)率进行远期疗效的评价。按照CTCAE(不良事件通用术语标准)记录患者的不良事件。结果:短期疗效:放化疗结束时,观察组与对照组完全缓解(CR)差别有统计学意义(75%vs 40%,P=0.03);部分缓解(PR)率无统计学差异(20%vs 30%,P>0.05)。客观缓解率(ORR)有统计学差异(95%vs 75%,P=0.03),疾病控制率(DCR)无统计学差异(95%vs 80%,P=0.15)。短期疗效观察CR率及ORR均优于对照组,有统计学差异。远期疗效:至2020年8月,对照组与观察组PFS率分别为:50%、40%,中位PFS分别为:33月、25月,差别无统计学意义(P=0.40)。OS率分别为65%、50%(P=0.45),观察组的PFS率及OS率高于对照组,但两组间无显著性差异(P>0.05)。放疗过程中不良事件主要为骨髓抑制、急性放射性肠炎、高血压、手足综合征,未出现4级急慢性放射反应,不良反应耐受。结论:针对化疗耐药晚期宫颈癌患者,阿帕替尼联合同步放化疗完全缓解率及客观缓解率较高,短期疗效较佳,且不良反应可耐受,有望成为一种安全有效的治疗手段,但长期疗效有待进一步临床试验证实。

非传统型肌球蛋白Myo10对结肠癌细胞SW620生长的影响及其机制

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Myo10蛋白敲除稳定细胞系,探讨Myo10对结肠癌细胞SW620形态、增殖和细胞周期的影响。方法:根据sgRNA设计网站选择并合成5对针对人Myo10基因的sgRNA序列,经退火形成双链后,用T4DNA连接酶将其与经BsmBⅠ线性化的Lenti-CRISPR v2慢病毒载体连接,包装成病毒感染SW620细胞。经嘌呤霉素筛选后用Western Blot检测Myo10的表达,选择敲除效率最高的sgRNA序列,进行单克隆细胞筛选,最后再用Western Blot验证Myo10是否敲除。用显微镜、Rhodanmine phalloidin细胞染色观察细胞形态;CCK-8实验及流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期变化。结果:经测序鉴定成功构建了5对sgRNA-LentiCRISPR v2慢病毒载体,嘌呤霉素筛选后得到Myo10完全敲除的SW620细胞系。敲除Myo10的SW620细胞形态变圆,其增殖能力明显减弱,细胞周期S期比例增加。结论:成功构建Myo10完全敲除的SW620稳定细胞系;Myo10可影响SW620细胞形态和增殖能力;该实验为后续深入探讨Myo10作为结直肠癌潜在靶向基因的机制研究奠定了基础。

Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及机制探讨

目的探讨Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及相关机制。方法蛋白免疫印迹法检测肺癌细胞系中Myosin X表达量以获取实验对象。运用CRISPR/Cas9技术建立敲除Myosin X的H1975细胞系(KO组)和感染对照病毒的H1975细胞系(NC组),并进行敲除效率验证。克隆形成实验及多靶单击模型检测两组细胞对射线敏感性差异。γ-H_(2)AX焦点形成实验及RNAseq差异分析技术寻找可能参与Myonsin X介导的肺癌细胞系放射敏感性调节机制。结果Myosin X在H1975细胞中表达量明显高于其他细胞系(P<0.01)。经鉴定成功构建了Myosin X sgRNA-Lenti-CRISPR v2慢病毒载体,嘌呤霉素筛选后得到Myosin X完全敲除的H1975(KO组)及对照组(NC组)细胞系。克隆形成实验证明相较于NC组,KO组对射线的敏感性更强(D_(0)值从1.28 Gy下降至1.03 Gy,SF_(2)从0.29下降至0.21,放射敏感性比为1.24)。γ-H_(2)AX焦点形成实验显示照后1、6 h KO组形成的损伤焦点数均多于NC组(P<0.05),RNAseq差异分析技术结果显示KO组ISLR蛋白表达明显低于NC组(P<0.05)。结论敲除Myosin X可以增强肺癌H1975细胞的放射敏感性,其机制可能与干扰DNA双链损伤修复以及降低ISLR表达有关。

钙黏蛋白S100A10对人乳腺癌细胞增殖能力的影响

目的:探讨钙黏蛋白S100A10对人乳腺癌SK-BR-3、MCF-7细胞增殖能力的影响。方法:通过慢病毒感染构建稳定过表达S100A10的SK-BR-3、MCF-7细胞系,并用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹法(Western Blot)检测过表达效率;通过细胞增殖实验、平板克隆实验检测S100A10对细胞增殖、克隆形成能力的影响;通过流式细胞术检测S100A10对细胞周期进程的影响,蛋白印迹法验证S100A10对周期相关蛋白cyclin D1和cyclin E1的表达影响;通过小鼠原位成瘤实验探究S100A10对乳腺癌肿瘤形成能力的影响(n=3)。结果:qPCR和Western Blot结果分别显示感染过表达慢病毒后S100A10在mRNA和蛋白水平的表达增多(P<0.05),稳定过表达S100A10的SK-BR-3及MCF-7细胞系构建成功;细胞增殖实验和平板克隆实验结果显示过表达S100A10可增强SK-BR-3及MCF-7细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05);流式细胞周期结果显示过表达S100A10后上述乳腺癌细胞系G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(P<0.05);Western Blot结果显示过表达S100A10后,周期相关蛋白cyclin D1和cyclin E1含量增多。小鼠原位成瘤实验结果表明过表达S100A10能显著促进乳腺癌的肿瘤形成能力(P<0.05)。结论:S100A10通过调控细胞周期增强乳腺癌SK-BR-3、MCF-7细胞的增殖能力,为后续深入探讨S100A10作为乳腺癌潜在治疗靶点的研究奠定了理论基础。