砒霜厂工人砷暴露与EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA四个基因DNA损伤的关系

目的探索砒霜厂职业砷暴露工人EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤与尿砷及其代谢的关系。方法选取云南某砒霜厂78名一线职业砷暴露工人为暴露组和24名无砷职业暴露史人群为对照组。通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)的方法检测外周血淋巴细胞中EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤,检测所有工人尿中无机砷、一甲基胂酸、二甲基胂酸的含量并计算百分比。结果职业砷暴露组人群4个基因的DNA损伤以及平均损伤高于对照组(P<0.05)。4个基因的平均损伤与尿中的无机砷、一甲基胂酸、二甲基胂酸、一甲基胂酸百分比呈正相关,与二甲基胂酸百分比呈负相关(P<0.05)。结论砷暴露导致人群重要基因损伤、4个基因平均损伤具有作为损伤评估标志物的潜力。

砷及其代谢物对BEAS-2B细胞p53基因表达影响

[背景]砷是人类致癌物。砷及其代谢物会影响p53表达,但砷及其代谢物处理人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)后,p53磷酸化及泛素化水平的变化尚不清楚。[目的]探讨砷及其代谢物一甲基胂酸(MMA)和二甲基胂酸(DMA)对BEAS-2B细胞中抑癌基因p53表达的影响。用不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)染毒细胞,利用CCK-8试剂检测细胞活力,确定NaAsO2染毒BEAS-2B细胞的剂量和时间。基于细胞活力结果,将细胞分为两组,即不同浓度亚砷酸钠组和砷甲基化代谢产物组,不同浓度亚砷酸钠组染毒剂量分别为0、2、4、6μmol·L^(-1)NaAsO2;砷甲基化代谢产物组包括0μmol·L^(-1)NaAsO2(对照组)、6μmol·L^(-1)MMA组、6μmol·L^(-1)DMA组和6μmol·L^(-1)NaAsO2组。48 h收集细胞,提取总蛋白和总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测p53 mRNA相对表达水平,采用免疫共沉淀和蛋白质免疫印迹法检测p53泛素化水平,通过蛋白免疫印迹法检测p53蛋白、p53 Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白的相对表达水平。[结果]在BEAS-2B细胞中,与对照组相比,不同浓度NaAsO2染毒后,细胞存活率均降低(P<0.05),并且NaAsO2浓度在6μmol·L^(-1)时细胞存活率约为50%。与对照组相比,不同浓度的NaAsO2(2、4、6μmol·L^(-1))处理后p53 mRNA相对表达水平呈逐渐降低趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NaAsO2诱导p53蛋白、Ser9位点磷酸化蛋白相对表达水平均逐渐降低(P<0.05);不同浓度的NaAsO2诱导p53 Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平均呈逐渐降低趋势,但仅6μmol·L^(-1)NaAsO2组低于对照组且差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,MMA组和DMA组p53 mRNA、p53蛋白、Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平无明显影响。与对照组相比,NaAsO2染毒后,p53泛素化表达水平明显下降,K48位点泛素化表达水平下降。[结论]砷引起BEAS-2B细胞p53蛋白表达降低主要由于其磷酸化途径被抑制和mRNA表达降低,p53泛素化水平减少所致的蛋白变化未占主导作用。MMA和DMA对p53基因表达无影响。