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猪圆环病毒2型北京株全基因组的克隆与序列分析 被引量:3
1
作者 汤世坤 张雪 +2 位作者 周双海 王霞泰 吴国娟 《北京农学院学报》 2009年第2期47-50,共4页
为探索近年来北京地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学和变异规律,用PCR技术从北京不同猪场的临床发病猪和死亡猪病变组织中分别扩增和克隆获得4株PCV2分离株全基因组序列,并进行测定和分析。结果显示,4株PCV2基因组全长均为1 767 nt,其... 为探索近年来北京地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学和变异规律,用PCR技术从北京不同猪场的临床发病猪和死亡猪病变组织中分别扩增和克隆获得4株PCV2分离株全基因组序列,并进行测定和分析。结果显示,4株PCV2基因组全长均为1 767 nt,其核苷酸同源性高达99%,与其他北京分离株的同源性也达98%以上,与国内外其他地区PCV2的核苷酸同源性也在95%以上。由此表明,各个PCV2分离株在进化方面存在地域相关性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 全基因组 克隆 序列分析
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猪圆环病毒检测技术研究进展 被引量:3
2
作者 汤世坤 周双海 +2 位作者 张广学 周志山 吴国娟 《北京农学院学报》 2007年第4期71-74,共4页
猪圆环病毒(PCV)具有PCV1和PCV2两种基因型,PCV1无致病性,而PCV2可引起猪断奶后多系统消耗综合征等多种疾病。PCV2相关疾病已给世界养猪业造成了巨大经济损失。因此,建立一套快速、有效的PCV检测方法非常重要。笔者综述了当前PCV的检测... 猪圆环病毒(PCV)具有PCV1和PCV2两种基因型,PCV1无致病性,而PCV2可引起猪断奶后多系统消耗综合征等多种疾病。PCV2相关疾病已给世界养猪业造成了巨大经济损失。因此,建立一套快速、有效的PCV检测方法非常重要。笔者综述了当前PCV的检测技术。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 检测技术 研究进展
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茉莉酸等3种因素刺激番茄LeWRKY1的表达特征分析 被引量:5
3
作者 王丽芳 于涌鲲 +3 位作者 杜希华 汤世坤 赵福宽 孙清鹏 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第23期73-76,共4页
为了研究LeWRKY1参与植物抗逆反应的分子机理,采用实时荧光定量PCR技术研究了LeWRKY1在番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)侵染、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、水杨酸(salicylic acid,SA)刺激时的表达情况。结果表明:外源植物激素JA可诱导LeWR... 为了研究LeWRKY1参与植物抗逆反应的分子机理,采用实时荧光定量PCR技术研究了LeWRKY1在番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)侵染、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、水杨酸(salicylic acid,SA)刺激时的表达情况。结果表明:外源植物激素JA可诱导LeWRKY1的表达,而SA对其无明显诱导作用;番茄灰霉菌侵染可诱导LeWRKY1表达。LeWRKY1可能通过JA依赖而SA非依赖的信号途径参与番茄对番茄灰霉菌防御反应的应答。 展开更多
关键词 番茄 LeWRKY1 茉莉酸 表达特征
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Research on Expression of LeWRKY1 in Tomato Induced by Jasmonic Acid and Other Two Factors 被引量:2
4
作者 王丽芳 于涌鲲 +3 位作者 杜希华 汤世坤 赵福宽 孙清鹏 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第8期1133-1135,1138,共4页
[Objective]The aim was to explore the molecular mechanism of plant resistance to various stress response.[Method]The expression of LeWRKY1 in tomato seedlings under treatment with B.cinerea,exogenous JA and SA were ex... [Objective]The aim was to explore the molecular mechanism of plant resistance to various stress response.[Method]The expression of LeWRKY1 in tomato seedlings under treatment with B.cinerea,exogenous JA and SA were explored by real time quantitative RT-PCR technology.[Result]JA induced the expression of LeWRKY1,but SA did not.LeWRKY1 expression was up-regulated under B.cinerea infection.[Conclusion]LeWRKY1 might be involved in the tomato defense response to B.cinerea through JA dependent but SA independent signal pathway. 展开更多
关键词 TOMATO LeWRKY1 Jasmonic acid Expression characteristics
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猪圆环病毒1型北京株全基因组克隆及序列分析 被引量:3
5
作者 邵小雪 郭星 +2 位作者 周双海 冉多良 汤世坤 《北京农学院学报》 2009年第4期35-38,共4页
参照GenBank上猪圆环病毒1型(PCV1)全基因组序列设计1对引物,用PCR技术从北京一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列,并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示,该株PCV1基因组全长为1759bp,与国内... 参照GenBank上猪圆环病毒1型(PCV1)全基因组序列设计1对引物,用PCR技术从北京一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列,并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示,该株PCV1基因组全长为1759bp,与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性为99.4%。主要开放阅读框(ORF)序列结果显示,该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别在97.5%~99.8%和92.7%~100%。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高,但仍然呈现出一定的地域相关性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 北京株 全基因组 克隆 序列分析
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猪GM-CSF荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:4
6
作者 王霞泰 蒋伟娇 +2 位作者 周双海 汤世坤 刘凤华 《北京农学院学报》 2009年第2期51-53,56,共4页
根据GenBank中猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因序列设计一对引物,用RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增出296 bp cDNA片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中。经测序鉴定后,构建出含猪GM-CSF cDNA部分片段的重组质粒。通过重组... 根据GenBank中猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因序列设计一对引物,用RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增出296 bp cDNA片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中。经测序鉴定后,构建出含猪GM-CSF cDNA部分片段的重组质粒。通过重组质粒的Real-time PCR方法,建立了猪GM-CSF cDNA的Re-al-time PCR标准曲线及其直线回归方程。该方法重复性好,敏感性高、特异性强,可用于猪GM-CSF mRNA水平的定量检测。 展开更多
关键词 GM-CSF 荧光定量PCR
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猪圆环病毒2型实时定量PCR检测方法的建立 被引量:2
7
作者 韩玉环 汤世坤 +3 位作者 周双海 刘玉洁 朱荣昌 吴国娟 《北京农学院学报》 2010年第3期31-34,共4页
用PCR技术从一临床病猪组织中扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)417 bp片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含有PCV2基因片段的重组质粒。应用该重组质粒进行实时荧光定量PCR,建立了PCV2 DNA的实时PCR标准曲线及其直线回归方程。结果显示该... 用PCR技术从一临床病猪组织中扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)417 bp片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含有PCV2基因片段的重组质粒。应用该重组质粒进行实时荧光定量PCR,建立了PCV2 DNA的实时PCR标准曲线及其直线回归方程。结果显示该方法重复性好,其检测灵敏度达到102拷贝/μL,检测样品时特异性强。此研究表明,所建立的PCV2 DNA实时定量PCR方法具有重复性好、敏感性高与特异性强等特点,能够用于PCV2的定量检测。 展开更多
关键词 PCV2 实时定量PCR 定量检测
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猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立
8
作者 王霞泰 汤世坤 +1 位作者 周双海 刘凤华 《北京农学院学报》 2008年第4期37-40,共4页
根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后... 根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。 展开更多
关键词 IL-18 竞争定量PCR
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Cloning of WRKY2 Gene in Tomato 被引量:1
9
作者 李娜 于涌鲲 +4 位作者 赵福宽 汤世坤 孙清鹏 于同泉 路苹 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第8期1125-1128,共4页
[Objective]The aim was to explore the function of WRKY transcription factor in tomato.[Method]The primers were designed in this study according to the obtained WRKY fragments,and the total RNA from tomato treated with... [Objective]The aim was to explore the function of WRKY transcription factor in tomato.[Method]The primers were designed in this study according to the obtained WRKY fragments,and the total RNA from tomato treated with 100 μmol/L of JA for 6 h was used as the template for RT-PCR.[Result]The 608 bp fragment was obtained from tomato with RT-PCR method.Sequence analysis indicated that this sequence contained WRKYGQK conservative domain and the similarity with Capsicum annuum WRKY-c and Nicotiana tabacum NtWRKY-7 were 79% and 74%,respectively.[Conclusion]WRKY gene sequence in tomato was cloned successfully. 展开更多
关键词 TOMATO WRKY transcription factor WRKY2 gene CLONING
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番茄中WRKY2基因的克隆
10
作者 李娜 于涌鲲 +4 位作者 赵福宽 汤世坤 孙清鹏 于同泉 路苹 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第2期95-98,共4页
WRKY转录因子在植物应对生物或非生物胁迫的反应及生长和发育中起重要作用,为研究WRKY转录因子在番茄中的功能,本研究根据课题组已经克隆的番茄WRKY转录因子片段设计引物,采用RT-PCR方法,从JA诱导的番茄幼苗中,获得了608bp的cDNA片段。... WRKY转录因子在植物应对生物或非生物胁迫的反应及生长和发育中起重要作用,为研究WRKY转录因子在番茄中的功能,本研究根据课题组已经克隆的番茄WRKY转录因子片段设计引物,采用RT-PCR方法,从JA诱导的番茄幼苗中,获得了608bp的cDNA片段。序列分析表明,该序列含有WRKYGQK保守结构域,与Capsicum annuum WRKY-c序列相似性是79%,与Nicotiana tabacum NtWRKY-7序列相似性是74%,表明已经成功克隆了番茄WRKY2基因片段。 展开更多
关键词 番茄 WRKY转录因子 WRKY2基因 克隆
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抑癌基因的活性检测在人体衰老评估中的意义 被引量:1
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作者 汤世坤 林雄斌 《中国老年保健医学》 2012年第5期50-53,共4页
细胞衰老是机体衰老的基础,是人类老年相关疾病发生的前提。研究表明,衰老与肿瘤发生有着密切的关系,抑癌基因可能是与肿瘤和衰老调节相关联的关键基因,其表达水平的高低与细胞增殖调控、细胞分化、肿瘤发生相关联,因而对与衰老相关的... 细胞衰老是机体衰老的基础,是人类老年相关疾病发生的前提。研究表明,衰老与肿瘤发生有着密切的关系,抑癌基因可能是与肿瘤和衰老调节相关联的关键基因,其表达水平的高低与细胞增殖调控、细胞分化、肿瘤发生相关联,因而对与衰老相关的抑癌基因进行活性检测将有助于对老年病和肿瘤等疾病的发生、发展有更好的了解,为癌症的防治和对抗衰老提供广阔的前景。 展开更多
关键词 细胞 衰老 癌症 抑癌基因
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