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茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析
被引量:
4
1
作者
史成颖
李正国
+4 位作者
徐乾
李海婧
汤之近
邓威威
宛晓春
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期40-47,共8页
在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2...
在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
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关键词
茶树
谷氨酰胺
茶氨酸
基因克隆
原核表达
酵母表达
酶活性
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职称材料
题名
茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析
被引量:
4
1
作者
史成颖
李正国
徐乾
李海婧
汤之近
邓威威
宛晓春
机构
安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期40-47,共8页
基金
国家自然科学基金(31170283
31300576)
文摘
在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
关键词
茶树
谷氨酰胺
茶氨酸
基因克隆
原核表达
酵母表达
酶活性
Keywords
tea plant
glutamine
theanine
gene clone
prokaryotic expression
yeast expression
enzymatic activity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
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1
茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析
史成颖
李正国
徐乾
李海婧
汤之近
邓威威
宛晓春
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
4
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参考文献
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