中药穿山龙和黄山药的原植物生药学鉴定

目的系统鉴定同为甾体激素和抗冠心病皂苷类药物重要工业原料的穿山龙和黄山药两种药材。为穿山龙申请欧盟传统草药的注册奠定基础。方法采用原植物鉴定、性状鉴定、显微鉴定的方法对两种原植物进行对比。结果两种植物在原植物形态、性状鉴定、显微特征上有明显区别。结论通过原植物、性状、显微对比能够很好地区别穿龙薯蓣和黄山药。

附子水溶性生物碱含量测定与道地性相关分析

建立HPLC-ELSD法,测定4个产区42批泥附子及9批江油附片中附子灵、尼奥灵和宋果灵3种水溶性生物碱的含量。采用SIMCA11.0软件构建OPLS-DA模型筛选附子差异性成分,进行附子水溶性生物碱含量与道地性相关分析。不同产区附子中3种生物碱的含量差异较大,其中江油附子中尼奥灵含量明显高于其他非道地产区,均值约为云南、布拖附子的3.5倍。用江油附子炮制得到的生附片、炒附片及蒸附片中3种生物碱的分布特征与江油附子相似,且各炮制品种中尼奥灵含量差异不大,其中生附片、炒附片中尼奥灵含量与江油附子相当。OPLS-DA模型将江油与其他产区附子区分开,筛选出2个差异成分,其中主要差异成分为尼奥灵。上述研究结果表明,尼奥灵为区分道地产区与非道地产区附子的特征性差异成分,且附子及附片中尼奥灵含量稳定可控,可作为重要的质量评价指标,为附子及附片的质量控制提供参考。

高分辨LC-MS鉴定千金子的微量二萜成分

目的:以高分辨液质联用技术研究千金子的微量二萜类成分。方法:以HPLC分析千金子中的微量二萜类成分,并以高分辨LC-MS技术鉴定其结构。结果:总结千金子素3(化合物1)的质谱裂解规律,并鉴定出千金子的一个微量二萜——千金子二萜醇-5,15-二乙酸-3-苯乙酸酯(化合物2)。结论:化合物2为首次从千金子中分离得到。

向日葵花盘挥发油的GC-MS定性分析

目的:通过GC-MS来定性分析向日葵花盘的挥发油成分,为进一步对其研究开发提供科学依据。方法:采用水蒸气蒸馏法提取,运用GC-MS联用并结合计算机相似度检索鉴定向日葵花盘挥发油的化学成分,应用色谱峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量。结果:从向日葵花盘的挥发油中鉴定出了29种化学成分,其中萜类化合物较多,其中含量较高的成分为α-蒎烯(21.95%)、桧烯(15.66%)、β-蒎烯(4.03%)、白菖油萜(3.29%)、大根香叶烯D(3.62%)、4-松油醇(2.68%)、柠檬烯(2.2%)等。结论:向日葵花盘的挥发油成分多为萜类化合物,有较高的药用价值,具有很大研究价值和广阔市场前景。

川芎苓种的质量评价与分级标准研究

为建立川芎苓种质量评价技术体系并制定苓种的质量分级标准,参照《中国农作物种子检验规程》,对30份苓杆,60份苓种的真实性、纯度、净度、形态指标、生活力进行检验,应用数理统计方法分析划分苓种等级的主要指标和参考指标,采用K-均值聚类法制定苓种的分级标准。结果表明,一级苓种苓子类别正山系,节盘直径≥20 mm,苓子系数≥2.5,净度≥98%;二级苓种苓子类别正山系,节盘直径≥15~<20 mm,苓子系数2.0~2.5,净度≥95%,苓子类别土苓子,节盘直径≥13 mm,苓子系数≥2.0,净度≥95%;三级苓种苓子类别正山系,节盘直径≥13~<15 mm,苓子系数≥1.8,净度≥95%;其余苓种为不合格苓种。初步建立了川芎苓种质量分级标准。

鸢尾黄素衍生物的制备及抗其病毒活性研究

目的通过对单体化合物鸢尾黄素的结构改造,寻找高效、低毒的新型抗病毒候选药物。方法以鸢尾黄素为先导化合物合成了3个化合物,并以鸢尾黄素和利巴韦林为对照,考察化合物体外抗病毒的活性,观察的主要指标为半数毒性浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)、抗病毒指数(TI),为研发新抗病毒药物提供依据。结果化学试验分别通过磺化反应合成化合物1,乙基化反应合成化合物2,乙基化、磺化反应两步合成化合物3,并根据红外、紫外、质谱和核磁等数据确定各化合物的结构,分别是鸢尾黄素-5’-磺酸钠、4’,7-二乙基鸢尾黄素、4’,7-二乙基鸢尾黄素-5’-磺酸钠;抗病毒研究表明各化合物组在不同剂量时对H3N2、ADV3、RSV、CVB3等病毒毒株均有不同程度的抑制作用,且明显强于同等剂量的鸢尾黄素组。化合物1对H3N2和RSV有明显的抑制作用,抗H3N2病毒指数为29.57,强于利巴韦林(15.87);抗RSV病毒指数为28.39,略强于利巴韦林(27.29);化合物2对CVB3有明显的抑制作用,抗CVB3病毒指数为31.60,略强于利巴韦林(29.00);化合物3对H3N2和RSV有明显的抑制作用,抗RSV病毒指数为34.24,略强于利巴韦林(27.29);抗H3N2病毒指数为35.56,远强于利巴韦林(15.87)。结论化合物3具有高效、低毒的抗病毒活性,可作为潜在的抗H3N2病毒新药研发。

丹参叶干燥过程中化学成分的动态变化

目的研究丹参Salvia miltiorrhiza Bge叶干燥过程中化学成分的动态变化规律。方法丹参叶甲醇提取物的分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1mm×50 mm,1.7μm);流动相乙腈⁃0.4%甲酸水溶液,梯度洗脱;柱温20℃;检测波长不同时间段内分别为328、354、328、286nm;体积流量0.6mL/min。结果芦丁、异槲皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B分别在0.3360~16.8000、0.0432~21.6000、0.7226~361.2760、0.1140~57.0000 ng的范围内线性关系良好(R2≥0.9999),平均加样回收率分别为102.43%、101.36%、100.76%、98.11%,RSD分别为1.70%、0.63%、2.60%、1.94%。结论在干燥过程中,丹参叶脱水率对各成分的含有量有显著影响,含有量与水分呈负相关,阴干为丹参叶的最佳干燥方式。

丹葛酚酮胶囊HPLC指纹图谱及9种有效成分的含量测定

建立丹葛酚酮胶囊的HPLC指纹图谱,并同时测定其中9种有效成分的含量,为其质量评价提供依据。采用Eclipse XDB-C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.05%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样量10μL,建立了丹葛酚酮胶囊的HPLC指纹图谱。10批丹葛酚酮胶囊指纹图谱中有28个共有峰,相似度均大于0.99,经与对照品比对确认了16个成分,对葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 9种主要成分进行了定量分析,线性、精密度、稳定性、重复性和加样回收率均符合定量要求,所建立的方法简便、稳定、可靠,指纹图谱结合多指标成分的含量可有效控制产品的质量。

川丹参种根质量标准的探究

目的:建立川丹参种根质量等级标准。方法:以四川地区收集的36份丹参种根为材料,在测定种根根长、根粗、百根质量、纯度、净度、含水率等指标基础上,根据K-均值聚类法并结合生产实践对川丹参种根进行分级,采用大田栽培进行分级验证。结果:将四川地区丹参种根划分为3个等级,一级:根粗>13 mm,百根质量>2500 g,净度≥95%;二级:根粗:7~13 mm,百根质量:2000~2500 g,净度≥90%;三级:根粗<7 mm,百根质量<2000 g,净度<90%。结论:为川丹参生产过程中的种根选择提供科学依据。

金果榄质量HPLC评价研究

目的:建立同时测定金果榄药材中古伦宾、蜕皮激素和生物碱类成分的含量的方法,并寻找金果榄药材中的质量差异标志物。方法:采用HPLC法同时测定古伦宾、蜕皮激素、非洲防己碱、药根碱和巴马丁的含量,并以检测出的含量为指标,结合聚类分析和偏最小二乘判别分析进一步确定金果榄药材中的质量差异标志物。结果:测定方法精密度、稳定性和重复性良好,聚类分析和偏最小二乘判别分析结果均显示20批样品可分为三大类,变量权重结果证实非洲防己碱、古伦宾、巴马汀为金果榄药材主要质量差异标志物。结论:所建方法利用DAD检测器特性,同时监测多个波长,方便快捷,能显著提高药材质量控制效率;聚类分析和偏最小二乘判别分析结果也可为金果榄药材种植、栽培提供依据。

欧盟草药药品质量标准中杂质检测相关要求

2004年4月30日正式颁布的《欧盟传统草药药品注册指令》（Directive 2004／24／EC）不仅明确定义了草药药品、传统草药药品等概念，而且正式承认了传统草药药品作为药品的法律地位，制订了相应的简化注册程序，并明确规定：根据传统应用的情况，可以免做该传统草药药品的临床试验或临床前研究，但并没有因此而降低对产品质量的要求，即欧盟对草药药品、传统草药药品质量控制的基本要求与药品完全一样。

城市天然气配送企业成本信息公开研究

国家发改委针对改革天然气管输价格形成机制新发布两个《办法》。新《办法》大力推进成本信息公开,更大程度地约束了企业的投资造价和运行成本,对天然气配送企业成本信息公开提出新的要求。研究结合当前天然气成本信息公开现状,对新《办法》进行了解读与分析。通过实地调研,发现新《办法》可能会给成本信息公开方面带来居民与非居民成本难以区分、政府非盈利项目披露以及社会公众疑虑三方面的挑战。

8,8′-亚甲基双黄芩素的合成及其抗肿瘤作用机制

目的:以黄芩素为先导化合物合成双黄酮化合物8,8′-亚甲基双黄芩素(MBB),并探讨其抗肿瘤活性和作用机制。方法:通过傅-克反应合成MBB,并根据红外、紫外、质谱、核磁等数据确定此化合物的结构。采用MTT法,测定MBB对HCT116、A549、MCF-7、HepG2、NCI-N87的增殖抑制IC_(50)。利用H22荷瘤小鼠模型,评价MBB抑制H22肿瘤生长的作用。采用Annexin V-FITC/PI双染法,研究MBB对HCT116细胞的凋亡诱导作用。采用基于PI染色的流式细胞术,测定MBB对HCT116细胞周期的影响。运用DCFH-DA法,检测MBB对HCT116细胞ROS生成的作用。结果:成功合成MBB,并对其结构进行表征。MBB对HCT116、A549、MCF-7、HepG2、NCI-N87的增殖抑制IC_(50)分别为1.19,15.36,7.72,2.13,2.64μg·mL^(-1),并在25 mg·kg^(-1)和50 mg·kg^(-1)剂量下能够显著抑制H22肿瘤生长(P<0.05),抗肿瘤活性优于先导化合物黄芩素。MBB可剂量、时间依赖性地诱导HCT116细胞发生细胞凋亡,阻滞细胞周期,促进胞内ROS生成。结论:基于傅-克反应以黄芩素为先导化合物合成了MBB,其具有较强体内、体外抗肿瘤作用,其作用机制与诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期,促进胞内ROS生成有关。

基于顶空进样GC-MS技术研究不同产地加工方法对川芎挥发性成分的影响

鉴于川芎挥发油是川芎的重要药效部位,为建立川芎药材及饮片产地加工的适宜方法,该研究采用顶空进样气相色谱-质谱联用技术(GC-MS),以16种挥发性成分为指标,利用聚类分析、主成分分析及综合加权评分法,考察洗/未洗、晒、炕、不同温度烘及远红外干燥等不同加工方式,对川芎药材及切片(鲜品先经部分干燥再切制烘干)品质的影响。结果显示,加工前对药材的快速冲洗不会影响川芎挥发性成分。干燥方式上,结合产地生产实际,烘干优于晒、炕和远红外干燥。对于0.3~0.4 cm厚度的川芎切片,建议适宜烘干温度为50℃,鲜品先经部分干燥再切制烘干的产地加工与饮片炮制一体化工艺不会造成挥发性成分的明显损失;对于整药材,适宜烘干温度为60℃,不宜高于60℃,而60℃以下烘干使加工时间延长,同样对挥发性成分有不利影响。该研究可为川芎生产过程中的重要环节"产地加工"提供科学依据,为实现川芎产地加工过程的规范化与标准化,稳定药材和饮片品质提供支撑。

川芎及酒川芎饮片综合质量评价标准的建立及商品规格等级的评价

目的对市售川芎及酒川芎饮片进行质量分析,为建立其饮片商品规格等级的行业标准提供依据。方法从来源、性状、鉴别、检查、浸出物、特征图谱、含量测定等7个方面建立综合质量评价标准,改进了2015年版《中国药典》中川芎的TLC鉴别方法,增加了HPLC特征图谱,含量测定项增加了以正丁基苯酞为内标的一测多评法测定藁本内酯和洋川芎内酯A的总量。并依据上述评价标准,对采集的样品进行测定,划分商品规格等级。结果建立的综合质量评价标准提升了2015年版《中国药典》及《四川省中药饮片炮制规范》中川芎及酒川芎饮片的标准,建立了此两种饮片的商品规格等级草案,包括一、二、三等及统货。与现有等级标准仅有外观指标比较,增加了含量作为分级指标。结论所用分级方法将传统经验鉴别和现代分析方法相结合,具有较好的科学性、合理性及可操作性。

基于入血成分-靶点-通路策略探索丹参-川芎-葛根角药配伍对脑心同治的科学内涵

目的:基于入血-成分-靶点-通路的策略,初步探析角药配伍丹参-川芎-葛根(简称“通脉方”)治疗缺血性心、脑血管疾病相关中医药理论“理、法、方、药”及“脑心同治”之内涵,为临床合理应用提供科学依据。方法:大鼠灌胃丹参-川芎-葛根水提物,采用UPLC-MS法,检测鉴别代谢入血成分,根据实测提取物、入血成分及通脉方成分分析相关文献,筛选通脉方活性成分的范围,通过本草组鉴(HERB)、Swiss Target Prediction、GeneCards等数据库检索活性成分所对应的靶点以及缺血性心、脑血管疾病相关靶点;获取成分与疾病的交集靶点,采用STRING平台和Cytoscape可视化软件构建丹参-川芎-葛根活性成分-靶点网络及蛋白互作(PPI)网络;经拓扑学条件过滤,筛选核心靶点网络;运行R语言脚本对PPI网络进行差异基因富集分析,获得富集排名前列的基因和信号通路;采用AutoDock Vina软件将高连接度的活性成分与核心靶点进行分子对接。结果:在丹参-川芎-葛根水提物中检测到14种成分,大鼠给药后血浆中检测到11个入血原型成分,有大豆苷元、染料木素、3′-甲氧基大豆苷元、芒柄花素、隐丹参酮、等,同时也是核心靶点所映射的成分。分子对接结果显示这些成分与靶蛋白受体具有较强的结合能力(结合能<-7.0 kcal/mol)。通脉方“脑心同治”机理涉及的“脑”、“心”共同点包括:缺血性心、脑血管疾病各自的成分-靶点调控网络中,有多个共同的靶基因和靶基因映射相连的通脉方成分;由22个核心靶点构成的核心蛋白互作网络(PPI)中,其中21个为共同靶点,与核心靶点相映射的通脉方成分相同(23个);差异基因富集分析中,有9项共同的生物过程(BP),8项共同的分子功能(MF),15条显著影响的共同信号通路,其中基因占比最高的通路均为PI3K/AKT信号通路;心、脑疾病核心靶点调控网络映射的入血成分(11个)相同。结论:本研究发现丹参-川芎-葛根角药对心脑血管的作用与其入血大豆苷元、染料木素、3′-甲氧基大豆苷元、芒柄花素、隐丹参酮、等成分密切相关,缺血性心、脑血管疾病具有共同的病理基础和密切的内在联系,“脑心同治”理论具有合理性,从物质基础和可能的作用机理揭示了丹参-川芎-葛根角药配伍的理、法、方、药的科学性与合理性,其详细作用机理有待进一步深入研究。

附子水溶性生物碱提取纯化工艺研究

目的研究附子水溶性生物碱的提取纯化工艺。方法采用UPLC-MS/MS技术,以14种生物碱(多根乌头碱、宋果灵、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱)的总量为考察指标,采用单因素实验和正交试验方法筛选最佳提取工艺;以8种水溶性生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、宋果灵、多根乌头碱)的量为考察指标,对5种大孔树脂吸附和解吸附性能进行考察,优选最佳纯化工艺。结果最佳提取纯化工艺为蒸附片加10倍量pH值3.5的酸水,煎煮3次(维持pH值约3.5),每次2 h,合并水煎液,用20%NaOH溶液调pH值10.0,加热回流水解2 h后,放冷,调pH值11.0,上大孔树脂HPD 300,上样量为生药2.5 g/mL树脂,6 BV水洗除杂,4 BV 80%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压浓缩干燥,即得附子水溶性生物碱提取物。该提取物收率为1.69%,其中新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、多根乌头碱、宋果灵的总量高达约15%。结论优选得到的提取纯化工艺稳定可行,为附子水溶性生物碱的研究应用提供参考。