日本白鲫(♀)×德国镜鲤(♂)F_1代及双亲的RAPD分析

利用筛选的24个随机引物,对日本白鲫(Carassius Curatus Cuvieri)(♀)×德国镜鲤(Cyprinus carpio varspecularis Lacepede)(♂)杂种一代及双亲进行RAPD分析。结果表明:在德国镜鲤、日本白鲫、F1中检测到的位点数分别为200、207、218,其中多态性位点数分别为63、66、72,多态位点比例分别为31.5%、31.9%、33%。F1多态位点高于父母本,表明它的遗传多样性和变异水平最高。3个群体间的遗传距离分别为0.3068(德国镜鲤和日本白鲫)、0.2041(德国镜鲤和F1)、0.1961(日本白鲫和F1)。德国镜鲤和日本白鲫的遗传距离最大,表明它们之间具有最大的杂交潜力,F1与父本遗传距离大于F1与母本遗传距离,表明F1与母本亲缘关系更近。从扩增谱带中找到了1个引物(S21)的特异性带是德国镜鲤区分日本白鲫和F1的分子标记,找到4个引物(S79、S114、S331、S333)扩增出的特异性谱带是日本白鲫区分德国镜鲤和F1的特异标记,还有1个引物(S106)扩增的特异性谱带可以作为F1区分父母本的遗传标记。在3个群体所有个体的UPGMP分支图中,所有个体分别成3个群分支,清晰地反映出个体间的相互关系。

10个甲型血友病家系FⅧ基因突变分析

目的 分析10个家系中甲型血友病（hemophilia A,HA）患者及女性疑似携带者FⅧ基因突变,并指导产前诊断.方法 应用聚合酶链反应（polymerase chin reaction,PCR）、变性高效液相色谱技术（denaturing high performance liquid chromatogramphy,DHPLC）和DNA测序技术对10个家系中8例HA患者、12名女性疑似携带者的FⅧ基因进行突变检测,并应用St14（DXS 52）、13（CA）n、EX18/BclⅠ3个遗传标记位点对HA家系进行连锁分析.产前诊断检测已知突变位点.针对未见报道的新突变,用限制性内切酶进行分析,同时与100名表型正常的无关个体进行比较,排除多态性.结果 （1）在10个家系中发现5例错义突变、3例移码突变、2例无义突变和2个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点.错义突变c.878A＞G、c.1015A＞G和c.6870G＞T,移码突变c.1282delA、c3072_3073insT和c.4880_4881insA以及SNP位点c.5000 G＞A均为国际血友病网站和人类突变数据库未记载的突变或多态.在100名正常人中未检测到错义突变c.878A＞G、c.1015A＞G和c.6870G＞T.（2）在12名女性疑似携带者中,基困水平确诊9例为HA携带者,3名为正常人.（3）遗传连锁分析为4个家系提供了X风险染色体的有效信息.（4）产前诊断结果显示2例胎儿正常、1例HA携带者和1例HA患者.结论 发现c.878 A＞G、c.1015A＞G、c.6870G＞T、c.1282delA、c.3072 3073insT及c.4880_4881insA共6种能引起甲型血友病的新突变;PCR、DHPLC和DNA测序技术可有效检测甲型血友病患者基因突变,而联合限制性内切酶分析和遗传连锁分析能快速筛查HA携带者,进行有效的产前诊断.

两个斑驳病家系KIT基因突变研究

目的对2个斑驳病家系进行致病基因突变分析，为患者及其家系成员提供遗传咨询和生育指导。方法分别采集家系1两例患者（先证者及其父亲）、家系2先证者及3名表型正常家系成员的外周血，提取外周血DNA和RNA。应用PCR、逆转录PCR及测序等技术，从基因组水平和表达水平对此两家系先证者和患者进行KIT基因诊断，并初步探讨检测到的突变对KIT基因功能的影响。结果家系1中两例患者KIT基因均存在IVSl2＋2_＋7delinsACATCTTTA的杂合突变，该突变在cDNA水平导致KIT基因c．1765-1779del突变，在氨基酸水平导致p．Gly592Ala／del：E12突变，使得KIT基因剪切位点发生改变，即其中一条cDNA第12外显子被跨越、未转录。家系2中先证者KIT基因存在c．2401A〉C突变，3位表型正常的家系成员未见该突变。结论确诊了两个斑驳病家系的致病原因。家系1患者KIT基因均存在IVSl2＋2_＋7delinsAcATcTTTA的杂合突变，该突变为人类基因突变数据库未记载的、新的剪切突变；家系2先证者KIT基因存在c．2401A〉C突变，结合3位表型正常的家系成员KIT基因未见c．240LA〉C突变，推测该突变为先证者患斑驳病的致病突变可能性大。为此两家系进行遗传咨询和产前诊断提供了理论依据。

不明原因智力障碍患者的FMR1基因分析及产前诊断

目的对不明原因智力障碍患者进行FMR1基因(CGG)n重复数分析,调查智力障碍患者中脆性X综合征的发病率,进而对患者家系成员进行遗传咨询和产前诊断。方法本研究募集了201例不明原因智力障碍患者(男173例、女28例),应用PCR-琼脂糖凝胶电泳(结合FMR1基因RNA表达)、Perkin Elmer FragilEase™PCR-毛细管电泳检测方法对FMR1基因(CGG)n重复数进行分析,并对前突变/全突变携带者孕妇进行产前诊断;同时对智力障碍的全突变携带者女性进行X染色体失活模式检测。结果在201例不明原因智力障碍患者中共鉴定出15个脆性X综合征全突变家系(先证者为13男2女),智力障碍患者中脆性X综合征的发病率为7.5%(15/201)。并对6名FMR1基因前突变/全突变携带者孕妇进行了产前诊断。智力障碍全突变携带者女性的X染色体失活模式均为偏斜失活。结论脆性X综合征在不明原因智力障碍患者中的发病率较高,对不明原因智力障碍患者进行FMR1基因(CGG)n重复数分析,可以为患者及其家系的遗传咨询和产前诊断提供理论依据,FMR1基因分析应作为不明原因智力障碍患者的一线检测手段。

卵巢储备功能不全患者FMR1基因CGG重复数的研究

目的探讨FMR1基因(CGG)n重复数与卵巢储备功能不全(diminished ovarian reserve,DOR)发病的相关性,为患者提供遗传咨询和生育指导。方法采集214例DOR患者的外周血样,提取DNA。用PCR扩增结合毛细管电泳测定患者及部分家系成员FMR1基因的(CGG)n重复数。结果共发现3例患者携带前突变,1例携带灰区突变。经遗传咨询,1例前突变携带者和另1例患者的妹妹(亦携带前突变)均已自然妊娠。产前诊断显示胎儿均为携带者。结论FMR1基因(CGG)n重复数异常是DOR的重要原因。对DOR患者进行FMR1基因(CGG)n重复数检测能够为患者的临床治疗、遗传咨询和生育指导提供依据。