胰岛素治疗对糖尿病大鼠骨骼肌脂肪酸转运相关蛋白表达影响的研究

目的探讨胰岛素干预治疗对骨骼肌细胞内脂肪酸转运蛋白表达的影响。方法建立高脂喂养联合小剂量STZ诱导的糖尿病SD大鼠模型,在FPG升高后3d予中效胰岛素或格列齐特(GLI)治疗3周,血糖控制目标随机血糖<8 mmol/L。Western blot检测骨骼肌细胞内脂蛋白脂酶(LPL),脂肪酸转位酶(FAT)、脂肪酸转运蛋白1(FATP-1)、脂肪酸结合蛋白(FABP)及肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)蛋白表达水平。结果与NC组比较,DM组骨骼肌细胞内LPL蛋白表达上调30%,Ins组和GLI组治疗下调了LPL蛋白表达;DM组骨骼肌细胞内CPT-1和FAT蛋白分别下调了45%和47%,Ins组和GLI组治疗分别上调了FAT蛋白表达31%和26%,Ins组同时上调了CPT-1蛋白表达57.5%;FATP-1和FABP蛋白表达各组间差异无统计学意义。结论胰岛素治疗改善了细胞内脂肪酸转运及线粒体氧化,可能是骨骼肌细胞内脂质沉积减少的机制之一。

固醇调节元件结合蛋白1c对骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达调控的影响

目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1（IRS-1）表达调控的影响.方法 采用酶联合消化法取2～3 d SPF级雄性SD大鼠原代骨骼肌细胞,将原代细胞分为对照组（C）、对照＋胰岛素组（C＋I）、高脂组（PA）及高脂＋胰岛素组（PA＋I）.将表达SREBP-1c腺病毒转染L6细胞,根据感染复数（MOI）分为含绿色荧光蛋白阴性载体（GFP）组、MOI值为5、50、100、200组.将靶基因为SREBP-1c的干扰RNA （siRNA）转染L6细胞,并分为空白对照组、阴性siRNA组及SREBP-1c siRNA组.Western blotting和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测SREBP-1c、IRS-1、蛋白激酶B（Akt）基因及蛋白表达,油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况.多组资料比较采用方差分析,两两比较采用最小显著差异法.结果 与C组相比,PA组SREBP-1c基因和蛋白水平升高（分别为2.72±0.08比1.00±0.18,3.02 ±0.19比1.00±0.05,t=15.240、18.289,均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白水平降低（分别为0.71 ±0.04比1.00 ±0.05,0.82 ±0.04比1.00±0.04,t=-7.960、-6.052,均P＜0.05）,丝氨酸磷酸化IRS-1蛋白表达升高,丝氨酸磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达下降（t=20.987、-5.869,均P＜0.05）.与GFP组相比,MOI值为50、100和200组的SREBP-1c基因和蛋白表达呈剂量依赖性上升（均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白表达水平呈剂量依赖性下降（均P＜0.05）.与空白对照组和阴性siRNA组相比,SREBP-1c siRNA组SREBP-1c基因和蛋白水平降低,IRS-1蛋白表达升高（均P＜0.05）.结论 SREBP-1c可抑制骨骼肌IRS-1胰岛素信号通路,参与肌细胞胰岛素抵抗的发生.

艾塞那肽对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响

目的观察比较艾塞那肽和甘精胰岛素治疗对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响。方法7～8周龄雄性sD大鼠，体重180～200g，按随机数字表法分为2组（对照组8只，高脂组30只）：对照组仅予普通饮食，高脂组予高脂喂养5周，联合小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病SD大鼠模型，3d后将成模大鼠随机分为3组进行不同干预：对照组和糖尿病组给予生理盐水，另外2组分别予艾塞那肽或甘精胰岛素干预4周。通过Westernblotting和实时定量聚合酶链式反应检测大鼠附睾周围脂肪组织中脂肪细胞脂质合成酶如磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶-1（ACC-1）蛋白及基因表达，以及脂质水解相关酶如脂肪组织甘油三酯脂酶（ATGL）、色素上皮衍生因子（PEDF）基因表达。多组定量资料间比较采用方差分析，两两比较采用最小差异显著性分析。结果与对照组比较，糖尿病大鼠脂肪细胞脂质合成酶PEPCK和FAS基因及蛋白表达降低，ACC-1基因水平降低，脂质水解相关蛋白ATGL和PEDF基因表达升高（均P〈0．05）。艾塞那肽及甘精胰岛素治疗后，PEPCK、FAS基因及蛋白水平升高，ACC-1基因表达增加，ATGL、PEDF基因表达降低（均P〈0．05）。与甘精胰岛素组比较，艾塞那肽组PEPCK、FAS基因[艾塞那肽与甘精胰岛素：PEPCKmRNA（1．68±0．45）VS（1．15±0．24）；FASmRNA（7．12±0．13）vs（1．18±0．16）]及蛋白[PEPCK（1．11±0．08）vs（0．87±0．08）；FAS（1．95±0．10）VS（0．99±0．08）]水平明显升高（t=2．525、69．374、5．312、18．670，均P〈0．05）。结论艾塞那肽可促进脂肪组织甘油三酯合成、减少脂质分解，其作用强于甘精胰岛素。

胰岛素对高脂诱导胰岛素抵抗L6细胞固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的探讨胰岛素对高脂诱导胰岛素抵抗的骨骼肌细胞脂代谢及相关基因、蛋白表达的影响和机制。方法 L6成肌细胞诱导分化后行棕榈酸干预建立胰岛素抵抗模型，胰岛素干预后，分别检测3组脂代谢相关基因和蛋白表达的变化。结果与对照组比较，高脂组诱导胰岛素抵抗后，固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1cmRNA和蛋白水平明显升高，IRS-1mRNA和蛋白水平明显降低。胰岛素干预后，SREBP-1c表达下降，IRS-1表达升高。3组中肿瘤坏死因子（TNF）-α、star3mRNA表达无明显变化。结论高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗下，胰岛素干预可能通过影响脂质代谢通路中关键的转录因子改善胰岛素抵抗。

促红细胞生成素改善ob／ob小鼠肝脏脂质沉积

目的研究促红细胞生成素（EPO）对肝脏脂质沉积的影响及可能的分子机制。方法12只雄性8周龄遗传型肥胖小鼠（ob／ob）随机数字表法分为2组：一组腹腔注射EPO（3000UAg），即EPO组（ob/ob＋EPO，n=6）；另一组注射等量磷酸盐缓冲液（PBS），即PBS组（ob／ob＋PBS，n=6）；同窝野生型C57BU6小鼠作为正常对照组（C57BU6，n=6），药物干预5周。以棕榈酸（PA，0．5mmol／L）及不同浓度EPO处理人肝癌细胞株HepG2，分为对照组（不处理）、PA组、PA＋EPOf5U／my组及PA＋EPOf10U／m1）组。油红O染色观察各组小鼠肝组织及HepG2细胞内脂质沉积。Western blotting法检测各组小鼠肝脏及HepG2细胞中EPO受体（EPOR）、固醇调节元件结合蛋白lc（SREBP．1c）、脂肪酸合酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）及肉毒碱棕榈酰基转移酶1a（CPT．1a）的蛋白表达。多组间数据比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差异法。结果油红O染色显示EPO干预的小鼠肝脏组织及HepG2细胞内脂质沉积均较各自对照组减少。与PBS组相比，EPO组小鼠肝脏SREBP—1c、FAS、ACC蛋白水平显著下降（分别为0．78~0．08比1．23±0．03、1．03±0．08比1．16±0．01、1．10±0．33比1．69±0．02，t=-6．906、-2．756、-8．794．均P〈0．05），EPOR和CPT．1a蛋白水平明显升高（分别为1．28±0．14比0．97±0．06、0．77~0．06比0．60±0．12，t=2．749、2．655，均P〈0．05）。在HepG2细胞中，与PA组相比，PA＋EPO（10U／m1）组中SREBP．1c、FAS、ACC蛋白水平显著下降（t=-10．731、-2．760、-9．618，均P〈0．05），EPOR和CPT-1a蛋白水平升高（t=7．556、2．674，均P〈0．05）。结论EPO可能通过抑制肝脏脂质合成，促进脂肪酸氧化，从而减少肝脏脂质过度沉积。

胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c的调节作用

目的研究胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c(SREBP-1c)的调节作用。方法将诱导分化完成的大鼠骨骼肌L6肌管细胞分为对照组、胰岛素组、磷酸酰基醇3激酶抑制剂wortmannin+胰岛素组、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制剂compound C+胰岛素组、高脂对照组、高脂+胰岛素组、高脂+wortmannin+胰岛素组和高脂+compound C+胰岛素组。Western blot检测SREBP-1c、苏氨酸蛋白激酶(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、AMPK-mTOR通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,胰岛素组SREBP-1c、p-Akt、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05);与胰岛素组相比,wortmannin+胰岛素组SREBP-1c表达降低(P<0.05);与高脂对照组相比,高脂+胰岛素组SREBP-1c、p-mTOR蛋白表达降低,p-Akt、p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);与高脂+胰岛素组相比,高脂+compound C+胰岛素组SREBP-1c表达升高(P<0.05)。结论骨骼肌细胞生理状态下,胰岛素对SREBP-1c的上调作用可能主要通过Akt-mTOR通路;胰岛素抵抗状态下,胰岛素治疗对SREBP-1c的下调作用可能主要通过AMPK-mTOR通路。