HL-60和SiHA细胞株ATM表达量与^(60)Co照射后细胞周期阻滞之间的关系

背景与目的:毛细血管扩张性共济失调综合征(ataxiatelangiectasia,AT)是由ATM(ataxiatelangiectasiamutant)基因所致,其突出特点是对放射线非常敏感,因此,ATM表达与放射敏感性应存在相关性。本研究旨在探讨两种肿瘤细胞株ATM表达量与60Co照射后细胞周期阻滞功能之间的关系。方法:使用半定量RT-PCR和流式细胞仪技术检测HL-60细胞和SiHA细胞中ATMmRNA和ATM蛋白表达量,同时以6、10和15Gy60Co照射SiHA细胞,HL-60细胞仅以6、10Gy照射,于照射后6、12、24、48及60h观察细胞周期阻滞现象和细胞凋亡率的变化。结果:HL-60细胞ATM平均蛋白荧光强度为14.11±2.38,SiHA细胞为27.74±1.16,约为HL-60细胞的2倍;HL-60细胞ATMmRNA相对表达量为0.09,SiHA细胞为0.80,约为HL-60细胞的9倍。照射后HL-60细胞和SiHA细胞均表现G2/M期阻滞。射线对HL-60细胞周期阻滞功能明显较SiHA细胞弱。结论:放射线对HL-60细胞和SiHA细胞的周期阻滞功能与ATM表达量相符,即ATM表达量低,细胞周期阻滞功能差。

HL-60细胞株经顺铂和电离辐射作用后细胞周期阻滞变化

目的:观察HL-60细胞株经顺铂作用和60Co照射后其细胞周期阻滞的动态变化。方法:用60Co分别以6,10Gy的吸收剂量照射HL-60肿瘤细胞株,并于照射后6、12、24及60h测量其细胞周期变化,同样使用化疗药物顺铂分别以10μmol/L,20μmol/L浓度梯度作用HL-60细胞株,并于作用后4、8、12及24h测量其细胞周期变化。结果:HL-60细胞株在受到小剂量外界作用后,如6Gy60Co照射和10μmol/L顺铂作用,表现有G2/M期崩溃现象,而在大剂量外界作用后,如10Gy60Co照射和20μmol/L顺铂作用,未表现G2/M期崩溃现象,而是表现持续的细胞周期阻滞现象。结论:在一定范围的外界剂量作用下,HL-60细胞株的细胞周期阻滞现象即自我保护机制呈剂量依赖性增强。小剂量外界刺激可导致其凋亡增加,而大剂量反而使其表现较强的细胞周期阻滞现象。

急性白血病大剂量化疗肺部真菌感染研究分析

目的比较白血病经大剂量化疗和常规剂量化疗两种缓解后治疗方案的肺部真菌感染率。方法选取经标准方案诱导达缓解的AML患者42例,ALL患者37例,其中AML患者经大剂量Ara-C进行缓解后治疗方案者23例,经标准DA或HA加或不加Vp-16作为缓解后治疗方案者19例,ALL患者经大剂量MTX或hyper-CVAD进行缓解治疗者21例,以经典VCDPA联合或不加L-asp作为缓解后治疗患者16例。结果经大剂量化疗的23例AML患者有11例感染真菌,经常规剂量化疗的19例AML患者有3例真菌感染;经大剂量化疗的21例ALL患者有10例感染真菌,经常规剂量化疗的16例ALL患者有5例真菌感染。AL患者经大剂量化疗真菌感染率明显高于常规剂量化疗患者,P<0.05,差异显著,AML患者与ALL患者化疗后真菌感染率差异不显著,P>0.05。结论AL患者经大剂量化疗真菌感染率明显高于常规剂量化疗患者。应加强抗真菌预防性或验性治疗。

ATM基因在髓性白血病原代细胞中的表达及其对基因治疗的意义

目的 研究在髓性白血病原代细胞和肿瘤细胞株中共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM) 的转录水平, 以确定反义封闭ATM基因治疗在白血病中应用的可行性。方法 利用半定量RT -PCR技术, 检测了正常人及31例髓性白血病患者和9种肿瘤细胞株的ATM mRNA表达量。结果 31例髓性白血病患者及9种肿瘤细胞株中ATMmRNA表达量普遍降低。结论 由于白血病患者中ATM mRNA表达量普遍降低, 因此, 反义封闭ATM对于白血病原代细胞基因治疗的适应性有待商榷。

ATM与癌症

共济失调毛细血管扩张症基因的突变 (ataxiatelangiectasismutatedgene,ATM)导致AT疾病 (共济失调毛细血管扩张症 )。AT患者及其携带者的患癌率较正常人明显增高 ,且易患淋巴样恶性肿瘤 ,其中主要包括淋巴瘤和白血病 ,说明ATM在其发病机理中起重要作用。ATM基因位于人类染色体 11q2 2 - 2 3,其蛋白产物ATM是一种核蛋白 ,它的主要的功能区为P13K ,位于羧基末端 ,与许多细胞周期检测点及DNA损伤反应蛋白具有同源性。ATM蛋白主要参与细胞周期关卡 ,DNA损伤修复和凋亡等一系列重要的细胞功能的信号传导 ,并起到枢纽作用。AT患者由于AT基因突变导致ATM蛋白结构和功能的变化 ,从而导致细胞周期关卡和DNA损伤后修复功能异常 ,表现为凋亡敏感性增加 ,细胞对放射线异常敏感。

122例特发性血小板减少性紫癜血小板输注疗效观察

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者临床血小板输注的指征。方法:比较122例ITP患者输注血小板和未输注血小板的临床转归;比较血小板输注前及输注24h后血小板计数。参照PAIg,分析抗体与血小板输注疗效的相关性。结果:67例未输注血小板的患者中,有2例PLT<10×109/L的患者发生严重出血危及生命,55例输注血小板的患者,有17例(31%)PLT较输注前降低,其中7例输注后PLT<10×109/L,未发生严重出血;ITP患者血小板输注无效率86%,PAIg升高患者血小板输注无效率升高,有统计学差异。结论:如无明显的出血症状,ITP血小板输注指征建议PLT<10×109/L,应输注少白细胞同型单采血小板制剂。

12例经流式细胞仪确诊的急性混合型白血病分析

目的:对比经流式细胞仪(FCM)确诊的急性混合型白血病(MAL)与经骨髓细胞形态学组化染色发现具有急性混合型白血病特性的急性白血病(AL)患者的符合率。方法:选取12例MAL患者,经FCM确诊,对比其相应的骨髓细胞学组化染色FAB分型结果,并计算经形态学和免疫组化发现MAL特性的AL患者占经FCM确诊MAL患者的百分率。结果:经FCM确诊的MAL患者,其中急性双表型白血病8例,急性双克隆型白血病3例,发现急性细胞系转变型1例。此12例AL患者经骨髓细胞学组化染色确诊7例为急性淋巴细胞白血病(ALL),3例为急性髓系白血病(AML),另2例经细胞形态学未确诊的AL患者中,1例多次细胞形态学显示呈骨髓坏死,但最终FCM技术也确诊为MAL。结论:经骨髓细胞形态学及组化染色发现具有MAL表现的AL患者仅占经FCM确诊的MAL患者的17%,误诊率极高。应重视流式细胞仪免疫分型在MAL诊断中的应用。

K562和SiHA细胞株经γ-射线照射后细胞周期阻滞与ATM表达量的关系研究

共济失调毛细血管扩张症(ataxiatelangiectasis,AT)是由ATM(ataxiatelangiectasismutant)基因突变所致,其突出特点是对放射线敏感。为探讨K562和SiHA两种肿瘤细胞株ATM表达量与γ射线照射后细胞周期阻滞即自我保护功能之间的关系,应用半定量RTPCR测量它们的ATMmRNA表达,同时以6、10和15Gy60Coγ射线分别照射细胞,并于照射后6、12、24、48及60小时观察细胞周期阻滞现象和凋亡率的变化。结果显示,K562细胞株ATMRNA相对表达量为0.04,而在SiHA细胞株为0.80,SiHA的ATMRNA表达量约为K562的20倍。结论:照射后K562和SiHA细胞株均表现G/M期阻滞,K562细胞周期阻滞即自我保护机制明显比SiHA差。

巢式PCR检测WT1在白血病患者中的表达及其临床意义

应用巢式逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)测定 K5 62细胞株及 75例白血病患者及 10名正常人 WT1基因的表达。并同时测定 mdr1的表达。检测结果为 K5 62细胞株高表达 ,急性髓性白血病 ( AML) 3 0例中 19例 ,急性淋巴细胞白血病 ( AL L) 13例中 10例 ,慢性粒细胞白血病 ( CML)共 17例 ,其中加速及急变期 3例 ,慢性期 14例中 8例 ,WT1表达为阳性 ,10名正常人及 7例缓解期患者 WT1表达均为阴性 ;且 WT1阳性患者完全缓解率 ( CR)低于表达阴性者 (分别为 65 %和 88% ,P<0 .0 5 )。此结果说明 WT1在白血病患者中高表达 ,可作为检测白血病微小残留病的标记基因 ,WT1的阳性表达者化疗后 CR率低 ,且其与白血病的病程发展可能有关 ,WT1与 m dr1无明显相关性。

稳定表达反义ATM/PI3K细胞系U937-ASPI3K的建立

为进一步研究DNA损伤杀灭肿瘤细胞的机制 ,为增强肿瘤治疗疗效提供一种有价值的细胞模型 ,构建了高效表达ATM基因编码羧基端 10 0kD功能片段的反义cDNA ,通过转染和筛选建立稳定表达反义ATM PI3KcDNA的细胞系U937 ASPI3K。结果显示 ,构建的ATM PI3KcDNA经测序证明反向定位于表达载体 pZeoSV2 (+ )中。经转染和筛选得到稳定表达 pZeoSV(+ ) ATM PI3K的细胞系U937 ASPI3K和对照细胞系U937 pZeoSV (- ) ,前者ATM蛋白表达极度受抑制 ,后者以及淋巴瘤细胞系U937ATM蛋白的高表达未受影响。本实验为阐明细胞周期关卡 (checkpoint)在DNA损伤信号传导通路中的作用机制 。

优化体格检查教学的探索

体格检查是医生的基本功。文章阐述了在诊断学理论基础上,发挥教师集体备课的优势,总结了在体格检查教学中采用形象化,师生互动,重难点突出,因材施教的教学方法,同时重视医学生医德医风素质的培养。从而提高了学生诊断思维和实践能力,有效地提高了教学效果和质量。

反义寡核苷酸封闭癌基因MDM2提高白血病细胞化疗敏感性的研究

目的通过M DM 2反义寡核苷酸(M DM 2-A S)阻滞白血病K 562细胞M DM 2的表达,研究非p53通路下M DM 2抑制的化疗增敏作用。方法细胞分为对照组、A S组、顺铂组和联合组,以RT-PCR和W estern b lot检测M DM表达,流式细胞仪检测处理后各组细胞的凋亡率。结果A S组细胞M DM 2表达明显受抑制(P<0.05),联合组K 562细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论在p53缺失情况下,以M DM 2-A S反义封闭抑制M DM 2表达,可增加白血病细胞的化疗敏感性,为白血病的临床治疗提供参考。

MDM2反义寡核苷酸的化疗增敏作用研究

目的:通过MDM2反义寡核苷酸(MDM2-AS)抑制白血病细胞系K562和HL-60中MDM2的表达,研究其化疗增敏作用。方法:细胞分为对照组、AS组、顺铂组和联合处理组,分别单独或联合MDM2-AS转染细胞,以RT-PCR和WESTERNBLOT检测MDM2的表达;以单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤;以流式细胞仪检测处理后各组细胞的凋亡率。结果:经MDM2-AS转染后细胞的MDM2表达明显受抑制(P<0.05),而经过MDM2-AS与顺铂联合处理细胞,K562和HL60细胞凋亡率明显增加(P<0.01),与顺铂处理组相比亦明显增加(P<0.05)。结论:以MDM2-AS反义封闭抑制MDM2的表达,可以增加白血病细胞的化疗敏感性,提示这一方法在白血病治疗中的广泛应用前景。

硼替佐米为主的化疗方案治疗多发性骨髓瘤50例临床分析

目的:研究硼替佐米(万珂)为主的化疗方案治疗多发性骨髓瘤(MM)的疗效和安全性。方法:收集近4年来我科住院和随访的MM患者91例的临床资料,其中50例接受万珂为主化疗方案(VDT组);41例接受传统化疗方案(VADT)。分析并比较2组患者的年龄、性别、β2-微球蛋白值、白蛋白值和2组的缓解率及不良反应。疗效评价按照欧洲骨髓移植协作组(EBMT)标准。结果:2组患者的年龄、性别、疾病分期无明显差异。中位随访20个月,发现VDT组50例患者总体反应率为88%,平均2个疗程即起效。其中初治患者CR+nCR率明显优于同组复发难治患者以及传统方案治疗组,且初治患者的总缓解率在VDT组与VADT组中存在显著差异。VDT组不良反应以周围神经病变和血小板减少为常见,经对症治疗均可缓解。结论:万珂为主的化疗方案治疗初治和复发难治MM患者,起效快,其中初治患者CR+nCR率及总缓解率更高,其不良反应可耐受。对有不良核型和IgD型MM患者,如何提高疗效尚待研究。

血清游离轻链比值测定对鉴别骨髓瘤肾病致尿毒症的指导意义

目的探讨血清游离轻链比值（serum free light chain ratio, rFLC）测定对鉴别骨髓瘤肾病致尿毒症的指导意义。方法采用免疫比浊法测定39例初诊为尿毒症患者的血清游离轻链值，根据其临床诊断分为多发性骨髓瘤致尿毒症组12例；非多发性骨髓瘤致尿毒症组27例；比较2组．c血清游离轻链（κ-sFLC）、x血清游离轻链（κ-sFLC）及rFLC的差异，并分析其相关性。结果多发性骨髓瘤致尿毒症患者κ-sFLC、λ—sFLC高于正常范围的比例分别为83．3％和66．6％；非多发性骨髓瘤致尿毒症患者k-sFLC、λ-sFLC高于正常范围的比例分别为96．3％和96．3％，无统计学差异（P〉0．05）；多发性骨髓瘤致尿毒症组rFLC均不在正常范围内，非多发性骨髓瘤致尿毒症组rFLC均在正常范围内，具有统计学差异（P〈0．05）。多发性骨髓瘤致尿毒症组κsFLC与λ-sFLC无显著相关性（P〉0．05）；非多发性骨髓瘤致尿毒症组κ-sFLC与λ-sFLC呈正相关（P〈0.01，r=0．675）。结论rFLC可以反映κsFLC和λsFLC是否是单克隆性增高，可以作为鉴别骨髓瘤肾病所致尿毒症的可靠指标。

多原发性癌1例报告及文献复习

患者，女，55岁。2007年10月因发现左侧乳腺肿块，行左侧乳腺改良根治术，术后病理报告为浸润性导管癌（Ⅱ级），伴同侧腋窝淋巴结（3／17枚）癌转移（乳头内未见癌），ER（＋＋），PR（＋），PS-2（＋），HER-2（＋）。术后行6次化疗（CMF方案：环磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶）及内分泌治疗（来曲唑），无复发。

骨髓呈再生障碍性贫血样表现的低增生性白血病

目的探讨低增生性白血病与再生障碍性贫血的鉴别诊断要点,以减少误诊。方法回顾性分析我院收治的1例低增生性白血病的临床资料。结果本例因反复牙龈出血2年,皮肤淤斑1个月入院。首次行骨髓穿刺(骨穿)及活检提示再生障碍性贫血可能,再次行骨穿及活检提示急性单核细胞白血病可能,后经流式细胞仪检测与多次多部位骨穿及活检确诊为低增生性白血病,予预激方案化疗两疗程,患者骨髓象未缓解,放弃治疗自动出院。结论临床上低增生性白血病与再生障碍性贫血表现相似,易混淆。对可疑患者行外周血涂片同时,需结合多次多部位骨穿及活检的多项检查结果进行综合判断,以避免误诊。