麝香滴眼液在家兔眼内组织中的分布及药代动力学研究

目的:研究麝香滴眼液家兔点眼后的眼内组织分布及药代动力学。方法:27只家兔给药后0.083、0.167、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和12 h安乐处死取出眼球,分离出房水、玻璃体、角膜和虹膜睫状体,以气相色谱法测定眼内各组织中药物浓度,用3p97计算药动学参数。结果:泪液、角膜、房水、虹膜睫状体和玻璃体组织中最高药物浓度分别为(107.52±67.07)、(2.15±1.49)、(0.034±0.007 6)、(2.87±1.50)和(0.013±0.004 5)μg/g或μg/mL;各组织中药物t1/2分别为(8.08±3.08)、(2.87±2.24)、(3.37±0.68)、(4.69±1.32)和(8.37±2.70)h;AUC(0→t)分别为(114.57±37.41)、(11.57±7.16)、(0.18±0.056)、(2.86±0.42)和(0.079±0.017)μg/(h.g)或μg/(h.mL)。结论:麝香滴兔眼后易于渗透到眼内各组织,且浓度较高。

五味痔疮胶囊的抗炎作用研究

目的初步探讨五味痔疮胶囊(FTHC)的抗炎作用及其可能的作用机制。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型以及巴豆油致大鼠肛门肿胀模型,观察FTHC的抗炎作用,同时测定大鼠直肠组织中的丙二醛含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并行组织病理学观察。结果与溶媒组相比,FTHC各剂量组均能显著抑制小鼠耳肿胀,明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性(P<0.05或P<0.01);高、中剂量还能抑制大鼠的足跖肿胀(P<0.05或P<0.01)。高、中、低剂量均能降低大鼠的肛门肿胀系数(P<0.05或P<0.01);高剂量可显著降低直肠组织的丙二醛含量,升高SOD的活性(P<0.01),中剂量可明显升高直肠组织SOD的活性(P<0.01);高、中剂量组的直肠黏膜层和肌层病理变化均有明显好转。结论 FTHC具有较好的抗炎作用,其机理可能与抗自由基损伤有关。

丹参酮对左氧氟沙星在盆腔炎模型大鼠子宫组织中分布的影响

目的:探讨丹参酮对左氧氟沙星在盆腔炎模型大鼠子宫组织中分布的影响。方法:选取96只盆腔炎模型大鼠,随机分为实验组和对照组,每组48只,实验组肌注丹参酮(8 mg/kg),对照组肌注相同体积生理盐水;1 h后,2组动物均按80 mg/kg灌服左氧氟沙星(Levofloxacin,LVFX),于灌服LVFX后的0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、8.0、12.0 h不同时间点,2组动物分别处死大鼠6只,采集血浆和子宫组织。高效液相色谱法法测定血浆和子宫组织中LVFX浓度,DAS2计算药动学参数。结果:实验组和对照组血浆与子宫组织血药浓度-时时间曲线均为二室模型,主要药动学参数列举如下:血浆中峰浓度Cmax分别为(14.341±1.551)μg/m L和(12.780±1.062)μg/m L,子宫组织中C_(max)分别为(13.910±1.704)μg/m L和(11.671±1.134)μg/m L(P<0.05);血浆中达峰时间tmax分别为(1.329±0.269)h和(1.249±0.264)h,子宫组织中t_(max)分别为(1.419±0.380)h,(1.280±0.270)h;血浆中药物的半衰期t1/2β分别为(6.284±1.132)h和(5.442±2.590)h,子宫组织中t1/2β分别为(7.920±2.802)h和(3.894±1.595)h(P<0.05);血浆中曲线下面积AUC0→t分别为(62.667±4.516)μg·h/m L和(55.693±3.138)μg·h/m L(P<0.05),子宫组织中AUC0→t分别为(55.518±11.709)μg·h/m L和(40.374±2.892)μg·h/m L(P<0.05)。结论:丹参酮能明显增加盆腔炎模型大鼠子宫组织中左氧氟沙星的分布。

麝香滴眼液对实验变应性结膜炎的治疗研究

目的:观察麝香滴眼液对豚鼠变应性结膜炎模型的治疗作用,并探讨其机制。方法:建立由卵清蛋白和氢氧化铝混合液所致的豚鼠变应性结膜炎模型,将造模成功的豚鼠随机分为模型组,麝香滴眼液大、中、小剂量组、市售地塞米松组、和溶媒对照组,共计6组,每组10只。各组用相应药物治疗一周,观察各组豚鼠局部刺激症状,眼组织中组胺和OVA特异性IgE含量以及结膜组织的形态变化。结果:模型组眼部症状评分、搔抓反应计数、眼组织中组胺和OVA特异性IgE含量以及结膜组织形态学变化均较模型组优,麝香大、中、小剂量组明显改善眼局部症状(P<0.05),减少搔抓反应次数(P<0.05);降低眼组织中组胺含量(P<0.01)和OVA特异性IgE含量(P<0.05),减轻结膜组织病理学改变。结论:麝香滴眼液对变应性结膜炎具有良好的治疗作用,其作用机制可能是通过减少特异性IgE的产生而发挥作用。

IL-37抑制体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨白细胞介素37(IL-37)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 SMMC-7721肝癌细胞分为重组人IL-37(rh IL-37)处理组和对照组,处理组给予(50、100、200、500)ng/m L rh IL-37,对照组给予等体积培养液。CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,TranswellTM实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的水平。结果 CCK-8实验结果显示rh IL-37可抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖;划痕实验结果证明rh IL-37抑制SMMC-7721肝癌细胞的迁移;TranswellTM实验结果显示,rh IL-37可抑制SMMC-7721细胞的侵袭。Western blot结果表明,rh IL-37处理可下调SMMC-7721细胞p-STAT3、MMP-2的水平。结论 IL-37可抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖、侵袭、迁移,可能与下调p-STAT3、MMP-2表达有关。

IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤中的保护作用

目的探讨IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的肝细胞损伤中的保护作用及其相关分子机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测在不同极化类型的人单核巨噬细胞THP-1中IL-37 mRNA和蛋白质水平。通过慢病毒转染构建稳定过表达IL-37的细胞株,qRT-PCR检测CD206、CD86、ARG1和iNOS mRNA水平,流式细胞术检测CD163、CD86蛋白质水平。通过Transwell法将THP-1细胞与人肝细胞L02细胞共培养并构建H/R模型,CCK-8法及流式细胞术检测L02细胞存活率及凋亡率,ELISA检测细胞培养液中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)含量,HE染色观察细胞形态变化。Western blot检测THP-1细胞中STAT6及其磷酸化水平。结果 M2型巨噬细胞中IL-37 mRNA及蛋白质水平上调。IL-37促进巨噬细胞M2型极化。IL-37诱导的M2型巨噬细胞与L02细胞共培养,在H/R状态下显著提高肝细胞存活率(P=0.015),并降低细胞凋亡率和ALT、AST水平(P<0.001),减轻细胞损伤。Western blot提示过表达IL-37的THP-1细胞中STAT6蛋白质磷酸化水平上调(P<0.01)。结论 IL-37能促进巨噬细胞M2型极化,并对H/R诱导的肝细胞损伤有保护作用,其机制可能与STAT6信号通路有关。

漆黄素通过调控TLR4/NF-κB通路减轻大鼠肝细胞缺氧/复氧损伤

目的探讨漆黄素对大鼠肝细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法构建BRL-3A大鼠肝细胞H/R模型,并给予漆黄素处理。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,微板法检测细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平,实时定量PCR检测BRL-3A细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)mRNA水平,Western blot法检测TLR4、NF-κBp65蛋白水平。结果 H/R处理的BRL-3A细胞存活率下降,细胞凋亡增多,培养细胞上清中ALT、AST水平和IL-1β、TNF-α升高;漆黄素处理可提高细胞存活率,减少细胞凋亡,降低ALT、AST水平,抑制IL-1β、TNF-α的释放,同时抑制H/R诱导的TLR4、NF-κBp65水平升高。结论漆黄素可能通过调节TLR4/NF-κB信号通路减轻大鼠肝细胞H/R损伤。

五味痔疮胶囊的镇痛、止血、通便和抗菌作用研究

目的:研究五味痔疮胶囊的镇痛、止血、通便和抗菌作用。方法:采用小鼠热板致痛和醋酸扭体实验观察五味痔疮胶囊的镇痛作用;采用小鼠断尾出血和体外凝血实验观察其止血作用;采用小鼠肠推进实验观察其通便作用;通过家兔肛门细菌性溃疡模型观察其抗菌作用。结果:1.68、0.84、0.42 g/kg剂量下,五味痔疮胶囊在给药30、90 min后可明显提高小鼠热板痛阈;1.68、0.84g/kg剂量下,五味痔疮胶囊可提高碳末在小鼠小肠的运行率;对冰醋酸所致扭体次数和出血、凝血时间虽有减少和缩短趋势,但差异均无统计学意义。0.482、0.241、0.121 g/kg剂量下,五味痔疮胶囊能明显改善细菌所致的家兔直肠黏膜层和肌层病理变化。结论:五味痔疮胶囊具有较好的镇痛、通便和抗菌作用。

口服还原型谷胱甘肽片在大鼠肝、脑、肾组织中的分布及其药动学

目的探讨口服还原型谷胱甘肽(GSH)片在大鼠肝、脑、肾组织中的分布及其药动学。方法Wistar大鼠84只,随机分为7组,每组12只,6只按120 mg·kg^(-1)灌服GSH片,另6只灌服溶媒,容量0.12 mL·kg^(-1)。分别于给药后0.5、1、2、3、5、8和12 h采集各组动物肝、脑、肾制作组织匀浆,HPLC法测定各组织中的GSH浓度,3p97软件计算药动学参数。结果口服GSH在肝、脑、肾的药-时曲线均为一室摸型;t_(1/2Ka)分别为(1.14±0.08)、(0.75±0.07)和(0.53±0.07)h;t_(1/2Ke)分别为(1.62±0.15)、(1.6±0.7)和(0.9±0.5)h;t_(max)分别为(2.8±0.4)、(2.7±0.6)和(1.2±0.5)h;c_(max)分别为(1 733±341)、(89±11)和(27.2±0.9)μg·g^(-1);AUC_(0～t)分别为(8 480±1 422)、(74.9±0.6)和(51±15)μg·h·g^(-1)。结论口服GSH能达肝、脑、肾组织,其中肝组织浓度较高。

上调miR-101对肝细胞癌生物学行为的影响

目的:探讨mi R-101在肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法:分别将mi R-101模拟物或mi RNA阴性对照序列转染Hep G2和SMMC-7721两种HCC细胞,以无处理自然生长的两种细胞为各自空白对照,观察mi R-101对两种细胞增殖、集落形成能力、凋亡及周期的影响,以及对侵袭和迁移能力的影响。结果:与各自的空白对照细胞比较,转染mi R-101模拟物后的Hep G2和SMMC-7721细胞的增值能力明显降低、细胞集落的形成明显减少、G0/G1期的细胞比例升高、细胞凋亡率明显增加、迁移与侵袭细胞数明显减少(均P<0.05);转染mi RNA阴性对照序列对两种细胞的以上指标无明显影响(均P>0.05)。结论:mi R-101可能在HCC细胞中起到了抑癌基因的作用,上调其表达能抑制HCC的恶性生物学行为。

USP9X低表达通过下调Mcl-1促进肝癌细胞凋亡

研究抑制泛素特异性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X,USP9X)对人肝癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC)细胞SMMC7721和HepG2中髓细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)蛋白的表达调控及对细胞凋亡和生长活力的影响。实验分为USP9X-siRNA组和阴性对照NC组两组进行分析。通过Western blot技术分别检测USP9X在肝癌细胞SMMC7721、HepG2和正常人肝细胞株L02中的蛋白表达情况;应用化学合成USP9X-siRNA转染肝癌细胞SMMC7721和HepG2,通过Western blot、流式细胞仪和MTT检测转染前后Mcl-1的蛋白表达差异以及细胞凋亡和生长活力变化。结果表明,USP9X在肝癌细胞SMMC7721和HepG2中的蛋白表达水平均高于正常肝细胞L02(t=15.155,P=0.000;t=9.171,P=0.001);SMMC7721和HepG2细胞中抑制USP9X能明显下调Mcl-1的蛋白表达,并导致细胞凋亡增加和生长活力降低。提示,肝癌细胞SMMC7721和HepG2中USP9X表达上调;USP9X表达降低可能通过下调Mcl-1的蛋白表达进而诱导人肝癌细胞SMMC7721和HepG2的凋亡。