环介导等温扩增技术的临床应用进展

环介导等温扩增技术（LAMP）是由日本荣研株式会社的纳富继宣博士带领团队建立的,其基本原理是在具有置换活性的DNA聚合酶作用下,利用特别设计的4段引物识别靶基因的6个区域,以达到对目的基因的高效、特异复制的目的 。

高压气瓶用钢34Mn2V连铸坯的生产实践

包钢采用 80t转炉 ,83tLF(VD) ,4流弧形连铸机生产断面为 (mm) :2 80× 32 5、2 80× 380、319×4 10高压气瓶用钢 34Mn2V连铸坯 ,LF(VD)后的平均成分为 (% ) :0 34C ,0 2 5Si,1 5 9Mn ,0 0 15P ,0 0 0 4S ,0 10V ,LF(VD)脱硫率为 84 6 2 % ,钢中氢含量为 (0 94～ 1 15 )× 10 -6。叙述了转炉 ,LF(VD) 。

LF精炼造渣工艺研究

根据炼钢厂第一连铸车间钢包炉造渣的特点 ,利用炉渣组元CaO、SiO2 、Al2 O3 、CaF2 进行分析研究 ,制定出合理的渣系配比和造渣制度 ,通过实践取得了稳定的脱硫、脱氧效果。

高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的观察高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HASMC细胞分为实验组和和对照组,实验组包括实验1、2、3组,另设空白对照组。对照组常规培养;实验1、2、3组分别加入10%、15%、20%浓度的高脂血清培养;空白对照组仅加培养基无细胞。继续培养6、12、24、48 h,用CCK-8法测算实验组HASMC细胞增殖率;培养24 h时采用实时荧光定量PCR法检测各组HASMC中GRIM-19和p-STAT3 mRNA,采用Western blotting法检测GRIM-19和p-STAT3蛋白。结果相同时间点细胞增殖率实验3组高于实验2组,实验2组高于实验1组,P均<0.05。随着高脂血清培养时间增加,各组HASMC细胞增殖率呈递增趋势,P均<0.05。培养24 h时HASMC中GRIM-19 mRNA和蛋白实验3组低于实验2组,实验2组低于实验1组,P均<0.05;HASMC中p-STAT3 mRNA和蛋白实验3组高于实验2组,实验2组高于实验1组,P均<0.05。结论高脂血清可以促进HASMC增殖。与10%、15%的高脂血清相比,20%高脂血清促进HASMC增殖的效果最为明显。其作用机制可能与GRIM-19下调p-STAT3表达有关。

PLCD3基因rs12946454位点多态性与山东汉族人群子痫前期遗传易感性关系

目的探讨磷脂酶Cδ3(PLCD3)基因rs12946454位点多态性与山东汉族人群子痫前期遗传易感性关系。方法用Taqman探针荧光定量PCR技术,对842例子痫前期病人以及1 013例正常妊娠妇女的PLCD3基因rs12946454位点进行基因型检测,比较两组基因型分布和等位基因频率的差异。结果子痫前期组与对照组PLCD3基因rs12946454位点基因型分布及等位基因频率差异无显著性(P>0.05)。轻度及重度子痫前期组、早发型及晚发型子痫前期组分别与对照组相比,PLCD3基因rs12946454位点基因型分布和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。轻度子痫前期与重度子痫前期相比、早发型子痫前期与晚发型子痫前期相比,PLCD3基因rs12946454位点基因型和等位基因频率差异均无显著性(P>0.05)。结论 PLCD3基因rs12946454位点多态性可能与山东汉族人群子痫前期发病不相关。

ADAMTS7基因rs3825807位点单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性关系

目的探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7(ADAMTS7)基因rs3825807位点多态性与子痫前期(PE)遗传易感性的相关性。方法使用TaqMan探针实时荧光PCR技术,对山东地区706例PE病人(病例组)以及926例正常孕妇(对照组)的外周血DNA进行扩增,比较两组孕妇ADAMTS7基因rs3825807位点基因型及等位基因频率。结果病例组和对照组孕妇ADAMTS7基因rs3825807位点基因型及等位基因频率差异均无显著性(P>0.05);早发型、晚发型PE病人基因型及等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS7基因rs3825807位点多态性与山东地区汉族人群PE的遗传易感性没有相关性。

子痫前期孕妇外周血CTGF基因启动子甲基化检测

目的检测子痫前期孕妇外周血中结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子区的甲基化水平,探讨其在子痫前期发生发展中的作用。方法收集90例子痫前期病人(子痫前期组)和94例正常妊娠孕妇(正常对照组)的外周血样本,采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测CTGF基因启动子区的甲基化水平,对两组检测结果进行分析比较。结果子痫前期组和正常对照组CTGF基因启动子区甲基化阳性率分别为32.2%和46.8%,子痫前期组CTGF基因甲基化水平低于正常对照组,差异有统计学意义(χ~2=4.087,P<0.05)。结论子痫前期孕妇CTGF基因启动子区呈异常的低甲基化状态,推测其在子痫前期的发生发展过程中具有重要意义。

密码子优化人PD-L1基因在巴斯德毕赤酵母中的表达与鉴定

目的利用巴斯德毕赤酵母获得具有可溶性、免疫原性的重组PD-L1蛋白。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统的密码子使用偏好,优化人PD-L1基因序列,将优化后的序列构建至质粒pPIC9K,合成重组质粒pPIC9K-PDL1。使用SacⅠ-HF将pPIC9K-PDL1线性化,然后通过电击法将pPIC9K-PDL1上的PD-L1基因序列整合至巴斯德毕赤酵母基因组中,依次使用MD平板(无组氨酸)和遗传霉素G418从电击处理过的菌液中筛选重组巴斯德毕赤酵母菌株,然后使用PCR和测序对筛选到的菌株进行鉴定。利用甲醇体积分数为0.005的BMMY培养基诱导重组巴斯德毕赤酵母菌株表达,使用免疫印迹法检测菌株培养基上清液中的表达产物。结果筛选得到了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,表达的PD-L1相对分子质量约为44700,可以与抗PD-L1抗体特异性结合。结论成功构建了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,菌株表达的PD-L1蛋白可用于开发血清PD-L1检测试剂盒。

SUF膜技术处理元坝气田钻井废水的实验

探索了元坝气田钻井废水的污染特性和常规处理方法，在分析钻井废水常规处理方法存在问题的基础上，提出了一种高盐钻井废水深度达标处理的方法——SUF膜处理技术，并通过实验考察了SUF膜技术对元坝气田钻井废水深度达标处理的适用性。实验水样选用元坝气田钻井废水10m^3，处理前后共取了10组对比样。实验结果表明，SUF膜技术处理钻井废水的产水率大于70％，SUF膜技术对于钻井废水的COD和氯离子去除效果较好，10组水样出水COD都降到100mg／L以下，氯根离子浓度降到400mg／L以下，COD去除率在98．5％以上，氯离子去除率达到96％以上，对COD指标小于9000mg／L的钻井废水处理后备项指标均能够达到污水综合排放（GB8978—1996）一级标准，通过在永页1井的应用，验证了SUF膜技术在元坝气田钻井废水深度达标处理的可行性，为钻井废水的高规格和高标准处理提供了一种可行的技术方案，实现了钻井废水的资源化利用和无害化处置，满足钻井废水的高规格和高标准处理要求，具有较好的应用前景。

lncRNA MIR210HG在子痫前期胎盘组织中的表达及其功能分析

目的研究子痫前期(PE)产妇胎盘组织中长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达及其中之一MIR210HG对绒毛膜滋养层细胞系HTR8/SVneo细胞生物学特性的影响,并对MIR210HG进行功能分析。方法选取2018年7月至2019年7月青岛大学附属医院收治的PE产妇39例(PE组)和同期正常妊娠产妇39例(对照组)。(1)采用转录组测序(RNA-seq)技术分析两组产妇胎盘组织中差异表达的lncRNA;实时荧光定量PCR技术方法检测两组产妇胎盘组织中差异表达的lncRNA之一MIR210HG的表达水平,并分析MIR210HG表达水平与收缩压、舒张压和新生儿出生体重的相关性。(2)构建小分子干扰RNA(siRNA),转染HTR8/SVneo细胞以敲低MIR210HG的表达,实验分为两组,即MIR210HG敲低(KD)组(HTR8/SVneo细胞转染siRNA敲低了MIR210HG的表达)和阴性对照(NC)组(HTR8/SVneo细胞转染NC siRNA),采用活细胞计数(CCK-8)法、穿膜小室(transwell小室)体外实验检测两组HTR8/SVneo细胞增殖和迁移能力的变化。(3)采用RNA相互作用百科全书(ENCORI)数据库预测与MIR210HG相互作用的RNA,并采用基因本体(GO)功能注释、京都基因和基因组百科全书(KEGG)和BioCarta通路富集方法对MIR210HG的功能进行分析。结果(1)RNA-seq技术共检测出显著差异表达的lncRNA 26个,其中表达上调21个、下调5个。MIR210HG在PE组产妇胎盘组织中的表达水平显著高于对照组(分别为9.30±1.90、1.10±0.20;t=4.425,P<0.01);MIR210HG的表达水平与收缩压(r2=0.234,P<0.05)和舒张压(r2=0.190,P<0.05)均呈线性正相关关系,与新生儿出生体重呈线性负相关关系(r2=0.157,P<0.05)。(2)与NC组相比,KD组HTR8/SVneo细胞的增殖和迁移能力均显著增强(P均<0.05)。(3)ENCORI数据库分析共预测出可能与MIR210HG相互作用的RNA 38个。GO功能注释分析显示,MIR210HG可能参与免疫应答分子中介物产生的调控等27条通路的功能;KEGG通路富集显示,MIR210HG可能参与同种异体移植物排斥等8条通路的功能;BioCarta通路富集显示,MIR210HG可能参与翻译起始因子通路等8条通路的功能。结论lncRNA MIR210HG在PE产妇的胎盘组织中表达上调,降低MIR210HG的表达水平可促进HTR8/SVneo细胞的增殖和迁移,MIR210HG可能是滋养层细胞生物学行为的调节因子。