ELISA法检测Graves氏病患者血清甲状腺刺激性抗体

应用本室纯化的TsAb免疫的 BALB/C 小鼠,其脾细胞与 SP2/O 骨髓瘤细胞融合,获得了6株分泌抗人 TsAb 单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为1∶10~6,与人 TG、TM 无免疫交叉反应,抗体亚型为 IgG2a。用辛酸-硫酸铵二步沉淀法对抗体进行了纯化。应用 ELISA 法初步测定了 Graves 氏病患者血清中 TSI 的含量,其阳性率平均为88%。

碘缺乏地区甲低病人的抑制型免疫球蛋白

我们对地方性克汀病(地克病)病人血清中 IgG 对甲低和甲状腺萎缩的病因发病学进行了研究。在新疆阿克苏地区检测了20例无甲状腺肿大的地克病病人,粘肿型8例,神经型5例,混合型7例,其中7例粘肿型,1例混合型病人血清中 TSH 水平增高,T_4降低(?)1例混合型病人高 TSH,而 T_4值在正常范围(亚临床甲低),其余病人为甲状腺功能正常或怀疑甲亢者。通过对病人血清 IgG 纯化后,按4mg/ml 在大鼠甲状腺细胞(FRTL-5)中抑制~3H-胸腺嘧啶核苷掺入DNA 的作用,测定甲状腺生长抑制免疫球蛋白(TGII),结果在上述9例病人血清中有6例(66.7%)TGII 阳性,其它各种类型的病人均为阴性。此外也测定了其它抑制生长的 IgG,如对IGF-I 抑制~3H-胸腺嘧啶核苷掺入 DNA 的作用。结果在上述9例病人中有5例(55.6%)有抑制胰岛素样生长因子 I 的(IGF-I blocking)IgG。上述结果指出,尽管血清中 TSH 水平升高,TGII 确是引起甲状腺萎缩的原因之一,同时抑制 IGF-I 诱发甲状腺生长的 IgG。

自身免疫性甲状腺疾病

本文对自身免疫性甲状腺疾病的发病机制作了详细介绍,着重讨论体液免疫的作用。

灵敏的人血清甲状腺球蛋白单克隆抗体ELISA法的建立

为提高对人血清甲状腺球蛋白检测的灵敏度 ,本文采用杂交瘤细胞技术制备了鼠抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体 (McAb) ,建立了灵敏的TgELISA双抗体夹心法。其灵敏度为 1ng/mL ;批内变异系数为 5.3% ( 4 0例 ) ,批间变异系数为 6.7% ( 10例 ) ,116名健康献血者血清中含有甲状腺球蛋白的占 72 .4 %。

ELISA法检测甲状腺刺激抗体及其临床应用

ＥＬＩＳＡ法检测甲状腺刺激抗体及其临床应用汤特，张天庚，叶静，张定泉Ｇｒａｖｅ病（ＧＤ）是一种常见的甲状腺自身免疫性疾病。甲状腺自身抗体（Ｔｈｙｒｏｉｄｓｔｉｍｕｌａｔｉｕｇａｎｔｉｂｏｄｙ，ＴＳＡｂ）的存在与ＧＤ的发病密切相关［１］。本文以制备的抗...

自身免疫性甲状腺疾病

自身免疫性疾病是指自身免疫反应引起组织损伤的疾病,是指对自身组织具有特异性抗体或免疫活性细胞作用的结果。许多实验和临床研究认为,非特异性T抑制细胞的数目或功能下降所引起,T抑制细胞缺失被认为是自身免疫性疾病的发病原因。目前更有人提出“遗传性自身免疫性疾病的H基因理论”比T抑制细胞的全面缺失导致自身免疫性疾病更符合疾病的临床特征。此外,自身免疫性疾病具有遗传易感性,其遗传方式是有几个共显性基因一起决定其易感性,很清楚了解到某些有关基因是与MHC相关的,但非MHC基因也参与决定易感性。

共有序列寡核苷酸竞争结合NF-κB以减少TNF产生的实验研究

目的 :了解使用含核因子 -κB(NF -κB)结合位点序列的共有序列寡核苷酸在胞浆内与NF -κB结合 ,以减少LPS刺激TNF产生的效果。方法 :直接将经硫代磷酸修饰的寡核苷酸导入大鼠腹腔巨噬细胞 ,以减少细胞分泌产生肿瘤坏死因子 (TNF)的效果作为判断指标 ,以ELISA法检测细胞培养上清液中的TNF -α含量。结果 :加入具有NF -κB结合位点序列的共有序列寡核苷酸 ,可明显减少巨噬细胞受LPS刺激后所产生的TNF -α。结论 :结果提示 ,具有NF -κB结合位点的共有序列寡核苷酸的使用 ,可在内毒素脂多糖 (LPS)致病过程的中心环节上阻止或减轻LPS诱导的TNF

Graves病患者治疗前后血清TSI、TGI及外周血T淋巴细胞亚群的变化

检测了３７例Ｇｒａｖｅｓ病患者血清甲状腺刺激免疫球蛋白（ＴＳＩ）、甲状腺生长免疫球蛋白（ＴＧＩ）和外周血总Ｔ细胞（ＣＤ３）、辅助性／诱导性Ｔ细胞（ＣＤ４）及抑制性／细胞毒性Ｔ细胞（ＣＤ８），并以３２例正常人作对照．发现Ｇｒａｖｅｓ病ＴＳＩ阳性率８３．８％，ＴＧＩ阳性率５８．３０，ＴＳＩ活性与血清ＴＴ４含量呈正相关（Ｐ＜０．０１），ＴＧＩ活性随甲状腺肿大加重而升高．外周血ＣＤ３＋、ＣＤ８＋百分率降低（Ｐ＜０．０１），ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值增高（Ｐ＜０．０５）．其中１８例经他巴唑治疗，甲状腺功能恢复明显，ＴＳＩ活性明显下降，而ＴＧＩ活性、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋百分率和ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值无显著变化．对ＴＳＩ、ＴＧＩ及Ｔ细胞亚群在Ｇｒａｖｅｓ病发病中的作用及其临床意义作了讨论．

黄河流域三角洲的高碘甲亢

本文对黄河流域三角洲的高碘甲亢与非高碘地区传统的甲亢进行了比较研究。结果表明:高碘地区患病率明显高于非病区;高碘甲亢临床症状较轻,与体征相一致,未见突眼和甲状腺杂音;TT_3、TT_4 rT_3值较低,而FT_3及Tg值均高,提示FT_3升高可做为诊断碘致甲亢的有用指标。考虑两者的发病机制可有所不同。

分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的应用

目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)分子上的特定片段-TR1(aa37-45)、TR2(aa353-366)和TR3(aa648-655)与其相应的反义肽-RT1(aa45-37)、RT2(aa366-353)和RT3(aa655-648)之间的选择性识别。方法制备固相反义肽亲和层析柱-RT1-sepharose4B,RT2-sepharose4B和RT3-sepharose4B,采用阶段洗脱法,观察相应天然肽-TR1、TR2和TR3在柱上的滞留行为。结果TR1、TR2和TR3与其相应的反义肽之间存在选择性识别,而反义肽RT1且能识别TSHR大分子;此外,牛促甲状腺激素(bTSH)蛋白还能被TR1识别。结论本实验证实了分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的存在,它可能用于生物大分子蛋白质的分离、促甲状腺激素(TSH)与受体(TSHR)结合位点的测定,并用于实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的实验性治疗。

人血清泌乳素生物活性与免疫活性的不一致性

本研究利用放射免疫分析法和放射受体分析法对几种不同病理条件下的人血清泌乳素水平进行了测定,并对其生物活性和免疫活性的变化作进一步探讨。结果发现,垂体泌乳素腺瘤患者血清泌乳素的比生物活性(8.6±7.4IU/mg)明显低于健康正常对照(26.5±14.4IU/mg,P<0.001);而垂体非泌乳素腺瘤(包括生长激素腺瘤、促肾上腺皮质激素腺瘤和无分泌功能腺瘤)患者血清泌乳素水平虽然明显升高(P<0.05),但其比生物活性与正常对照则无显著性差异;舞蹈手足徐动症和帕金森氏病患者无论血清泌乳素水平,还是其比生物活性与正常对照的差异均无显著性。

两种自家免疫性甲低患者治疗前后血清TSII、TGII及外周血T淋巴细胞亚群的变化

对９例原发性粘液性水肿和１４例Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ甲状腺炎患者测定了血清ＴＳＩＩ、ＴＧＩＩ及外周血Ｔ淋巴细胞亚群，并以３２例正常人作为对照．原发性粘液性水肿和Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ甲状腺炎患者血清存在ＴＳＩＩ、ＴＧＩＩ，阳性比例不同，而且外周血ＣＤ８＋百分率降低和ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值增高．ＴＳＩＩ、ＴＧＩＩ活性与ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值无显著相关．经甲状腺激素治疗，两种自家免疫性甲低患者甲状腺功能明显恢复，血清ＴＳＩＩ、ＴＧＩＩ活性无明显变化，原发性粘液性水肿患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群未见明显变化，而Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ甲状腺炎患者ＣＤ８＋百分率明显回升．

酶联免疫吸附法测定促甲状腺激素受体抗体及临床应用

本文介绍了酶联免疫吸附法在63例 Graves 甲亢病人中测定 TSH 受体抗体的方法及结果,其阳性率达71.5%,显著高于单纯测定血清中 LATS 免疫活性(42.5%)。本方法简单、快速、准确、方便,可在临床推广使用。

研究脂多糖在建立内毒素感染细胞模型中的应用

目的 :从大肠杆菌中制备LPS ,经凝胶色谱纯化 ,用纯化的LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞产生TNF ,建立内毒素感染的细胞模型。方法 :收集培养的大肠杆菌 ,洗去菌毛 ,冻干研磨成菌粉 ,经沸水浴提取 ,蛋白酶K消化 ,制成初提物。再用SephadexG -75色谱柱洗脱 ,收集纯化的组分。将纯化的LPS ,稀释成不同的浓度加入长有巨噬细胞的培养板中 ,刺激一定的时间后 ,收集上清液。用ELISA方法检测上清液中的TNF -α含量。结果 :纯化的LPS用紫外/可见光分光光度计扫描 ,呈单一吸收峰 ,并能被鲎试剂特异检出。用2.5μg/ml和5μg/mlLPS诱导巨噬细胞 ,24h后 ,培养上清液中的TNF -α含量分别为(8.13±1.25)pg/ml和(7.50±4.51)pg/ml(x±sn=4)。结论 :本法制备的LPS纯度较高 ,对鲎试剂高度敏感 ,有较好的内毒素活性 ,能满足建立内毒素感染的细胞模型的需要。该法简便、快速。

TSBAb-ELISA法的建立与临床初步应用

利用杂交瘤技术制备了抗人甲状腺刺激阻断抗体（ｔｈｙｒｏｉｄ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｂｌｏｃｋｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴＳＢＡｂ）单克隆抗体。两株单抗均为ＩｇＧ１，识别同一抗原表位。与甲状腺球蛋白（ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，ＴＧ）、甲状腺过氧化酶（ｔｈｙｒｏｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＴＰＯ）无交叉反应，与促甲状腺激素受体抗体（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴＲＡｂ）、甲状腺刺激抗体（ｔｈｙｒｏｉｄｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴＳＡｂ）有部分交叉反应。用间接ＥＬＩＳＡ法检测甲减患者血清ＴＳＢＡｂ水平，表明该法有一定特异性、灵敏、稳定、简便。利用抗人ＴＳＢＡｂ单抗和ＥＬＩＳＡ技术，可为临床检测ＴＳＢＡｂ和探讨自身免疫性甲状腺机能低下的发病机理提供一种新的手段。

基于灰色关联度分析法的电力投资项目决策分析

本文运用灰色关联度分析法,提出了电力投资项目决策分析综合评价方法,认为通过计算灰色关联度可以综合评价方案的优劣,构建了电力投资项目灰色关联度分析法评价指标体系,通过计算关联度,对各个方案优劣进行排序,关联度越大方案越优。

糖尿病患者甲状腺自身免疫抗体的观察

目的 :探讨糖尿病患者血清中的甲状腺自身免疫抗体水平。方法 :利用天津医科大学病生理教研室研制的TgAb、TPOAb、TRAb和TSI的ELISA试剂盒对35例1型糖尿病患者血清和60例2型糖尿病患者血清,以及40例正常人血清进行检测 ,测定数据经统计学处理 ,u检验。结果 :Type2DM和Type1DM组的TgAb、TPOAb、TRAb和TSI的阳性率显著高于正常组 (P<0.001)。Type1DM组也显著高于Type2DM组(P<0.05) ,Type1DM组甲状腺抗体的阳性率与文献报道的自身免疫甲状腺疾病 (AITD)的甲状腺抗体的阳性率接近。结论 :Type1DM和AITD同属自身免疫内分泌紊乱 ,二者之间有一定的联系 ,Type2DM患者的甲状腺抗体阳性率高于正常人 。

大鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子的分泌与内毒素剂量关系的初步分析

目的 :确定内毒素 (LPS)诱导巨噬细胞产生肿瘤坏死因子 (TNF)的适宜用量 ,建立内毒素感染的细胞模型。方法 :选用不同剂量的LPS ,刺激大鼠腹腔巨噬细胞 ,分别于不同的刺激时间收集细胞培养上清。TNF细胞毒效应用L929细胞和WEHI-164细胞检测,TNF -α浓度用ELISA法检测。结果 :当LPS使用浓度为0.1μg/ml至5μg/ml时 ,其诱导产生的TNF细胞毒效应有逐渐增加的趋势 ,超过此剂量时 ,TNF细胞毒效应反而降低 ;巨噬细胞TNF的分泌量也随LPS剂量的增加而减少。结论 :LPS在一定的浓度范围内 ,巨噬细胞培养上清中TNF含量明显增多 。

人甲状腺球蛋白的提取和纯化

目的 :提取高纯度的甲状腺球蛋白 (Tg) ,为制备Tg 抗血清及Tg单克隆抗体 ,建立Tg的检验方法及TgAb的测定方法做准备。方法 :将手术切除的新鲜人甲状腺组织 ,加入生理盐水匀浆、过滤 ,把滤液浓缩 ,经二次SephadexG -200柱层析 ,再经DEAE纤维素离子交换层析。结果 :获得较高纯度的人Tg ,经SDSPAGE鉴定 ,显示为1条区带 ,表明纯度较高。经免疫电泳鉴定 ,提纯的Tg有较好的免疫活性。结论 :这种提取Tg 的方法 ,简便易行 ,分离效果好 ,适用于大量制备抗原。

Northern Blot法分析高浓度TSH诱导甲状腺细胞c-fos的表达

近年研究结果已在分子水平上认识到原癌基因不仅可致肿瘤形成,其对正常细胞的生长、分化、增殖、信息传递及内分泌细胞的分泌都具有极其重要的作用。c-fos是其中一种核内蛋白类原癌基因,可被激素等快速而短暂地激活。由于它是转录激活因子的组成成份。