高糖对肾小管上皮细胞表达CTGF的影响及P38MAPK通路在其中的作用

目的探讨高糖对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及蛋白表达的影响,以及p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在其中的作用。方法以高糖刺激体外培养的人肾小管上皮细胞株HKC,应用RT-PCR,免疫组化、间接免疫荧光、Western blotting等分析技术,检测高糖刺激24、48、72、96h,以及20d时HKC表达CTGFmRNA及蛋白的影响,并观察以SB203580特异性阻断p38MAPK信号传导途径后上述过程的变化。结果体外培养HKC的CTGFmRNA与蛋白含量极低,高糖刺激48h后HKC表达CTGFmRNA水平达峰值,以后逐渐下降,96h时接近正常水平,但长期(20d)高糖刺激的HKC,其表达CTGFmRNA水平稳定高于正常对照组2倍。而随高糖刺激时间的延长,HKC细胞表达CTGF蛋白水平进行性升高,长期(20d)持续高糖刺激可使CTGF蛋白表达水平达到正常组的5倍左右。SB203580能显著抑制高糖引起的CTGFmRNA及蛋白的高表达。结论持续高糖刺激可以引起体外培养的人肾小管上皮细胞表达CTGF显著升高,提示CTGF高表达是糖尿病肾病肾小管间质纤维化发生的重要环节,而p38MAPK信号途径可能参与了这一过程。

siRNA沉默CTGF表达对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨针对结缔组织生长因子(CTGF)基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为6组:(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siR-NA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA蛋白表达水平降低。结论CTGF是高糖诱导HK-2细胞EMT的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。

金属蛋白酶组织抑制因子-1、基质金属蛋白酶-9的表达与肾脏纤维化的关系

目的 :探讨基质金属蛋白酶 - 9(matrixmetalloproteinase - 9,MMP - 9)、金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(tis sueinhibitorofmetalloproteinase - 1,TIMP - 1)在肾脏纤维化发生、发展中的意义。方法 :采用免疫组化技术和计算机图像分析系统检测不同病程肾脏疾病患者肾组织中TIMP - 1,MMP - 9及Ⅳ型胶原的表达情况 ,并以体视学多能目镜测试系统对肾活检病理切片进行形态计量 ,计算病变肾小管肾间质比率及肾小球硬化比率。结果 :肾脏病患者肾小管间质MMP - 9表达较正常呈显著增强 ,间质纤维化程度越重表达越弱 ;肾小管间质TIMP - 1表达、TIMP - 1/MMP - 9之比与病变肾小管肾间质比率呈显著正相关。结论 :肾脏病患者肾组织表达MMP - 9增高有助于消除过多的细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM ) ,是对肾组织纤维化形成的一种自身抑制效应 ;而TIMP - 1表达增高 ,导致ECM降解减少 ,参与肾组织纤维化的发生机制。

跨膜蛋白39A基因单核苷酸多态性与中国南方汉族人群系统性红斑狼疮相关性研究

目的探讨跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因2个单核苷酸多态性位点(rs1132202,rs13082536)与中国南方汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)易感性有无关联。方法采用PCR和直接测序法分别对116例SLE患者和90例健康对照者TMEM39A基因rs1132202、rs13082536的基因多态性进行检测,比较组间基因型和等位基因频率的差异,并与主要临床指标进行相关性分析。结果中国南方汉族人群SLE患者rs1132202 GG基因型缺失,CC、CG基因型及C、G基因频率与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。rs13082536 TT基因型缺失,GG、GT基因型及G、T基因频率与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。TMEM39A rs1132202、rs13082536基因型及等位基因频率与中国南方汉族人群SLE患者抗核抗体及肾损害临床表现均无关(P>0.05)。结论 TMEM39A rs1132202、rs1308253基因多态性与中国南方汉族人群SLE易感性及抗核抗体,肾损害主要临床指标均无显著相关性。

血清、尿TIMP-1浓度对肾脏病病程的判断价值

目的 :探讨血清、尿金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP - 1)浓度对肾脏纤维化的诊断价值。方法 :以酶联免疫吸附检测 (ELISA)方法检测健康者及肾脏病患者血清、尿TIMP - 1浓度。结果 :①以血清TIMP - 1浓度显著增高来判断肾组织有无纤维化敏感性为 89% ,特异性为 94% ,与肾活检符合率为 85 %。②尿TIPM - 1浓度与尿蛋白呈正相关 (r=0 .5 3,P <0 0 1)。结论 :血清TIMP -

川芎嗪对增殖性肾炎的疗效观察

目的 :观察川芎嗪对增殖性肾炎的临床疗效。方法 :将 4 5例经肾活检证实肾组织均存在不同程度的肾小球系膜细胞增殖、肾小球硬化、微血栓形成等病理变化的患者 ,按临床表现、年龄、肾组织病变程度随机分为两组。对照组 2 0例 ,用激素、环磷酰胺、科素亚、潘生丁及常规内科对症支持治疗。治疗组 2 5例 ,在上述药物治疗基础上 ,加用生理盐水 10 0ml+盐酸川芎嗪 80mg ,静脉滴注 ,一天两次 ,三周为一个疗程 ,观察四周 ,结果 :治疗组治疗后 ,尿量、尿蛋白、血清白蛋白、尿红细胞、肌酐清除率等各项指标均得到改善 ,其中尿蛋白、血清白蛋白、血尿的改善与对照组治疗后相比差异有显著性。结论 :川芎嗪对增殖性肾炎有较好临床疗效 ,而且引起出血等副作用小 ,无需特别监护 ,便于临床使用。

慢性肾炎患者血清TIMP-1浓度的变化及氯沙坦治疗对TIMP-1浓度的影响

目的探讨慢性肾炎患者血清金属蛋白酶组织抑制因子-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)浓度的变化及意义,并观察氯沙坦治疗对TIMP-1浓度的影响。方法以酶联免疫吸附试验检测45例慢性肾炎患者及10例健康志愿者血清TIMP-1浓度,分析其与肾组织纤维化程度的相关性;并将慢性肾炎患者分为2组,治疗组25例,在常规治疗的基础上加用氯沙坦,对照组20例,单用常规治疗,观察治疗前后血清TIMP-1浓度的变化,进行对照分析。结果慢性肾炎患者血清TIMP-1浓度较正常显著增高;血清TIMP-1浓度与肾组织纤维化程度呈正相关。氯沙坦治疗组在改善肾功能、降低尿蛋白及血清TIMP-1浓度方面明显好于对照组。结论血清TIMP-1浓度可反映慢性肾炎患者肾脏纤维化程度,氯沙坦治疗能显著降低慢性肾炎患者血清TIMP-1浓度,提示氯沙坦可通过调节金属蛋白酶活性,从而减缓肾脏纤维化。

结缔组织生长因子介导高糖诱导肾小管上皮细胞肥大的机制

【目的】研究高糖诱导肾小管上皮细胞肥大的作用途径及可能机制。【方法】HK-2细胞分正常对照组(培养基含葡萄糖1g/L),等渗对照组(葡萄糖1g/L+甘露醇3.5g/L)和高糖组(葡萄糖4.5g/L)培养。收集各组培养至24h,48h,96h的细胞,检测结缔组织生长因子(CTGF)、p27kip的mRNA水平、CTGF、p27kip的蛋白水平、细胞增殖活力、细胞周期分布及细胞总蛋白含量。另外检测各组培养30min、1h、24h、48h时的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)水平。每个检测指标设3个重复样本。【结果】高糖刺激可引起HK-2细胞的CTGF、p27kip的mRNA及蛋白表达水平显著升高,ERK1/2磷酸化激活,阻滞于G1期的细胞显著增多,细胞增殖活力受抑制,细胞肥大主要指标胞内蛋白总含量进行性增高。【结论】证实了高糖可通过上调CTGF激活ERK1/2信号转导,从转录水平上调p27kip,从而使增殖细胞阻滞于G1期诱导细胞肥大。

实习阶段医学英语教学不可忽视

进入临床实习后，医学英语教学不可终止，应适时转入专业阅读阶段，教学单位需切实重视，制订教学计划，选择教学材料，组织教学活动。规范考核标准，达到提高医学生医学英语水平的目的，为医疗事业培养符合时代发展需求的人才。

频发腹膜透析相关性腹膜炎的临床特征和危险因素探讨

目的了解频发腹膜透析相关性腹膜炎的临床特征,探讨其发生的危险因素。方法回顾性研究2004年1月至2009年11月在我院腹膜透析置管行持续性非卧床腹膜透析的尿毒症患者,将1年内发生两次或以上感染性腹膜炎定义为频发腹膜炎(1组),1年内仅发生1次腹膜炎的病例(2组)作为对照,比较两组临床和实验室数据差异,分析频发腹膜透析相关性腹膜炎发生的危险因素。结果1组16例,发生感染性腹膜炎44例次,2组45例,发生感染性腹膜炎53例次。与2组相比,1组患者血压明显升高(P≤0.05),有水肿的比例明显增加(P≤0.01),血红蛋白(P≤0.05)和血浆白蛋白(P≤0.01)明显降低,病原学检查革兰氏阴性杆菌和真菌的比例明显增加(P≤0.05),无效拔管例数明显增加(P≤0.05)。两组间年龄、置管手术方式、腹膜炎发生距开始腹膜透析时间、腹膜炎发生诱因、伴有呼吸困难症状例次、血清肌酐、尿素、钙、无机磷、外周血白细胞、腹膜透出液白细胞无明显差异(P>0.05)。Logistic回归分析显示置管时血红蛋白<70g/L(OR0.135,P≤0.01)和血浆白蛋白<30g/L(OR0.181,P≤0.05)为频发腹膜透析相关性腹膜炎发生的危险因素和预测因素。结论与发生单次腹膜炎的腹膜透析患者相比,频发腹膜炎腹膜透析患者革兰氏阴性菌和真菌感染率较高,营养不良和容量负荷过重的状况进一步恶化,这些因素可能与患者拔管率高、预后差有关。较严重的贫血和低蛋白血症是频发腹膜透析相关性腹膜炎发生的危险因素和预测因素。改善贫血和低蛋白血症,积极治疗腹腔内源性感染可能有助于该病的预防和控制。

牛蒡子苷对晚期氧化蛋白产物诱导小鼠足细胞转分化的影响

目的探讨牛蒡子苷对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导小鼠足细胞转分化的影响。方法用200μg/ml AOPP刺激小鼠足细胞24 h,同时加入牛蒡子苷(浓度分别为50、100、200、400μmol/L)进行干预,采用Western blotting检测内质网应激标志性蛋白Grp78、CHOP及平滑肌激动蛋白(α-SMA)表达水平。结果牛蒡子苷干预后可抑制小鼠足细胞Grp78、CHOP、α-SMA蛋白表达水平,且在一定范围内呈剂量依赖性。结论 AOPP可通过引起小鼠足细胞内质网应激(ERS)从而导致上皮-间充质转分化(EMT),而牛蒡子苷则可通过减轻ERS从而逆转EMT,为治疗肾脏纤维化提供新的研究方向。

晚期蛋白氧化产物通过氧化应激诱导肾小管上皮细胞转分化

目的探讨晚期蛋白氧化产物(AOPP)对人近端肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响及作用机制。方法实验共3部分:⑤分别用不同浓度AOPP及BSA刺激细胞24 h后检测α-SMA、E-Cadherin蛋白表达;⑤AOPP刺激细胞不同时间后检测α-SMA、E-Cadherin表达;⑤分别予BSA、AOPP以及用DPI、C-SOD预处理后再加入AOPP刺激细胞,检测α-SMA、E-Cadherin表达和不同时间的MDA含量及SOD、CAT、GSH-px活力。结果 AOPP以浓度和时间依赖方式诱导HK-2细胞α-SMA表达上调、ECadherin表达下调。AOPP引起细胞MDA含量上升,SOD、CAT和GSH-px活力下降。DPI、C-SOD预处理细胞可以部分抑制AOPP诱导的α-SMA表达上调和E-Cadherin表达下调;降低MDA含量,提高SOD、CAT和GSH-px活力。结论 AOPP通过氧化应激诱导肾小管上皮细胞EMT,抑制NADPH氧化酶活性及抗氧化治疗可以抑制肾小管上皮细胞EMT,延缓肾间质纤维化的进展。

复发和再发性腹膜透析相关性腹膜炎的危险因素及致病菌特征

目的探讨复发和再发性腹膜透析相关性腹膜炎发生的危险因素和致病菌特征。方法以2012年1月1日至2015年9月30日于珠江医院随访的至少发生过一次腹膜透析相关性腹膜炎的患者为研究对象,分为观察组34例患者(114例次复发和再发性腹膜炎)和对照组67例患者(98例次普通腹膜炎),收集并比较两组患者的一般情况、生化指标,腹膜炎致病菌及药物敏感试验报告数据。结果与对照组相比,观察组患者年龄相对较小(t=-0.218,P=0.008),收缩压(t=-2.245,P=0.027)、舒张压(t=-2.14,P=0.035)更高,血浆白蛋白水平降低(t=2.189,P=0.031),多重耐药菌株分离率增加(2=4.716,P=0.030),但对照组真菌分离率高于观察组(P=0.040);革兰阳性菌对糖肽类抗生素的敏感率达99%,革兰阴性菌对亚胺培南、丁胺卡钠、美罗培南的敏感率均达97%。结论复发和再发性腹膜炎的发生与年龄相对较小,容量负荷加重和低白蛋白血症相关;复发和再发性腹膜炎易发生多重耐药菌感染,需适当延长治疗时间;发现真菌性腹膜炎需尽早拔管。

高糖通过结缔组织生长因子诱导足细胞减少podocalyxin的表达

目的探讨高糖对小鼠足细胞podocalyxin表达的影响及结缔组织生长因子(CTGF)参与其损伤的可能机制。方法构建针对CTGF基因的特异性siRNA质粒并转染至小鼠足细胞。将体外培养的足细胞分为6组(1)正常对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5g/L;(3)高糖组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖4.5g/L;(4)高糖+空白对照组:足细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:足细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:足细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养。Western blot方法检测小鼠足细胞Podocalyxin、CTGF蛋白表达及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平。结果高糖培养足细胞24、48h时均可下调其Podocalyxin蛋白表达量(P<0.05),并可诱导CTGF蛋白表达增加(P<0.05)。同时高糖可以活化足细胞ERK1/2信号途径,在高糖刺激30min时开始活化,持续活化至24h。特异性siRNA干扰CTGF合成后,ERK1/2活化减少,并且足细胞Podocalyxin表达升高。结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,可通过ERK1/2途径诱导podocalyxin表达下降,针对CTGF的siRNA能明显改善podocalyxin表达量,为DN的治疗提供新的思路。

单个中心6年腹膜透析回顾性分析

目的研究2004年1月1日至2009年11月30日6年间在我中心进行持续不卧床腹膜透析(CAPD)治疗的236例终末期肾病(ESRD)患者的流行病学、腹膜透析(PD)并发症以及生存情况特点,分析可能的原因。方法回顾性收集患者的性别、PD起始时间、年龄、住址、医疗费用支付类别、原发病、植管方式、透析管类型、并发症、退出PD时间等资料,计算漂管率、腹膜炎发生率、掉队率(DOR)、PD治疗时间(TOT)和生存率等指标,并与其它PD中心比较。结果新增PD患者数呈逐年上涨趋势;新增患者年龄47±16岁,60岁以下77.96%;自费病人67.37%,自费比率呈逐年下降趋势;慢性肾炎(54.66%)是导致ESRD的最主要原因,糖尿病肾病(12.29%)位居第二,与亚太地区多数中心相似,但梗阻性肾病(11.02%)、慢性肾炎比率偏高,糖尿病肾病、高血压良性肾小动脉硬化症(10.17%)比率偏低;导管移位发生率(8.05%)和腹膜炎感染率(1∶44.22病人月)均较低;患者1年、2年和3年总体生存率分别为83.65%、51.59%和29.81%,低于其它经济发达国家和地区,但高于国内平均水平;DOR呈逐年下降趋势,TOT呈逐年上升趋势,2009年二者分别为11.56%和23.61月。结论以上特点与我中心遵循"PD优先"原则、患者主要来源地区泌尿系统结石发病率高、部分患者在植管时预先采用了大网膜部分切除术、重视病人宣教与随访、以及医疗保险覆盖面和资助力度逐年增加有关。

针对CTGF的siRNA对高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin减少的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin表达减少中的作用,及针对CTGF基因的siRNA对其影响。方法将体外培养的小鼠足细胞分为6组:(1)正常对照组,1640培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,1640培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,1640培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养。应用Realtime PCR检测nephrin、podocin、CTGF mRNA水平,Western blot检测CTGF、nephrin、podocin蛋白表达水平。结果高糖可诱导CTGF mRNA及蛋白表达增加,下调足细胞的nephrin、podocin mRNA及蛋白水平,而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,CTGF表达减少,同时伴有细胞nephrin、podocin表达升高。结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,高糖可通过CTGF诱导nephrin,podocin表达减少。针对CTGF的siRNA能明显改善这种损伤,为DN发病机制的研究提供新的实验依据。

中国汉族TMEM39A基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的相关性

目的探讨跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的3个位点(1880G/A,2442T/G,2456A/T)单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮(SLE)发病的相关性。方法采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分别对110例中国汉族SLE患者及80例健康对照者TMEM39A基因1880G/A、2442T/G、2456A/T位点进行多态性检测,应用χ2检验统计分析病例组和对照组基因型频率、等位基因频率。结果 SLE患者TMEM39A基因1880G/A位点的AA、GA、GG基因型频率与健康对照组间有显著差异(P=0.002),两组间A、G等位基因频率分布有显著差异(P=0.044);2442T/G位点的GG、TG、TT基因型频率与健康对照组间有显著差异(P=0.001),两组间G、T等位基因频率分布有显著差异(P=0.041);2456A/T位点的TT、AT、AA基因型频率与健康对照组间无显著差异(P>0.05),两组间T、A等位基因频率分布无显著差异(P>0.05);3个位点(1880G/A、2442T/G、2456A/T)的基因型频率和等位基因频率在狼疮性肾炎患者组和非狼疮性肾炎患者组间分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 TMEM39A基因1880G/A、2442T/G多态性与汉族人群SLE的遗传易感性有关,TMEM39A基因2456 A/T位点的多态性与汉族人群SLE的易感性无相关性;1880G/A、2442T/G、2456A/T的基因型和等位基因对狼疮性肾炎的发生无显著影响。

针对结缔组织生长因子的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞肥大的影响

目的观测人肾小管上皮细胞转染针对结缔组织生长因子(CTGF)的siRNA后对高糖诱导细胞肥大的影响。方法细胞分6组培养:正常对照组(培养基含D-葡萄糖1g/L),等渗对照组(培养基含D-葡萄糖1g/L、甘露醇3.5g/L),高糖组(培养基含D-葡萄糖4.5g/L),高糖+空白对照组(细胞转染空质粒后培养于高糖培养基中),高糖+阴性对照组(细胞转染含无关序列的质粒后培养于高糖培养基中),高糖+干扰组(细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后培养于高糖培养基中)。收集各组培养至24、48、96h的细胞,以实时PCR检测CTGF mRNA水平;Western blotting检测CTGF蛋白水平;MTT法测定细胞增殖活力;流式细胞仪测定细胞周期分布;考马氏亮蓝法测定细胞总蛋白含量。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGF mRNA及蛋白水平,使停留于G1期的细胞比例升高,增殖活力受抑制,细胞肥大指标胞内总蛋白含量增加;而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,细胞增殖活力增强,更多的细胞由G1期进入S期,细胞内总蛋白含量降低。结论证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞肥大的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞肥大,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。

临床教学中如何激发实习生的学习兴趣

在临床教学过程中注重激发学生的学习兴趣，是高效率、高质量地完成教学任务的重要因素。教师应在掌握学生不同心态的基础上，引导学生树立正确的学习目的，结合临床实习教学特点，采用灵活多变的教学方式，寓教于乐，达到良好的教学效果。