人TOP2A单克隆抗体的制备与初步应用

目的制备抗TOP2A(DNA拓扑异构酶Ⅱ型α)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法应用分子生物学技术构建含人TOP2A编码序列的原核表达载体,表达并纯化人TOP2A蛋白。TOP2A蛋白皮下多点和腹腔注射加强免疫Balb/c小鼠,取脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,利用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行亚克隆,用免疫印迹法、免疫组化染色和流式细胞术对抗体进行特异性鉴定。结果获得了3株能够稳定分泌TOP2A单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为11G5、3B10和10A3,通过免疫印迹、免疫组化和流式结果验证均为阳性。结论成功制备TOP2A单克隆抗体,为进一步的TOP2A蛋白的表达与肿瘤的关系研究奠定了基础。